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1、會計學1專題課題微生物的實驗室培養(yǎng)專題課題微生物的實驗室培養(yǎng) 高三一輪高三一輪第2頁/共42頁 單個或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖,可以形成肉眼可見子細胞的群體菌落菌落用途菌落用途：用于微生物：用于微生物純化、計數(shù)、鑒定純化、計數(shù)、鑒定第3頁/共42頁菌落菌落細菌的菌落特征因種而異。菌落特征是微生物鑒定的重要依據(jù)菌苔：菌落連成片 第4頁/共42頁第5頁/共42頁第6頁/共42頁第7頁/共42頁根據(jù)培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：液狀培養(yǎng)基需要進行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)。液狀培養(yǎng)基需要進行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)。這種培養(yǎng)基常用于工業(yè)這種培養(yǎng)基常用于工業(yè)生產生產。固體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：

2、在培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑在培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成，使其成為固體狀態(tài)，分離、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏等用為固體狀態(tài)，分離、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏等用瓊脂瓊脂加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。瓊脂的性質：熔點：96度凝固點：40度注意：一般細菌不能利用瓊脂。第8頁/共42頁第9頁/共42頁根據(jù)培養(yǎng)基的功能 鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物,如伊紅和美藍培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落帶有金屬如伊紅和美藍培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落帶有金屬光澤光澤, ,可以用來鑒別大腸桿菌可以用來鑒別大腸桿菌大腸桿菌分解乳糖產生大量混淆酸，可染上酸性伊紅，伊紅又和美大腸桿

3、菌分解乳糖產生大量混淆酸，可染上酸性伊紅，伊紅又和美藍結合，菌落被染成深紫色，從菌落外貌的發(fā)射光中還可以看到綠藍結合，菌落被染成深紫色，從菌落外貌的發(fā)射光中還可以看到綠色金屬發(fā)光色金屬發(fā)光第10頁/共42頁第11頁/共42頁第12頁/共42頁 剛果紅能與纖維素形成紅色復合物剛果紅能與纖維素形成紅色復合物，而不與，而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。 纖維素分解菌的篩選 在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛

4、果紅當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅- -纖維素的纖維素的復合物就無法形成，培養(yǎng)基中就會出現(xiàn)復合物就無法形成，培養(yǎng)基中就會出現(xiàn)以纖維以纖維素分解菌為中心的透明圈素分解菌為中心的透明圈，這樣我們就可以通，這樣我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素第13頁/共42頁第14頁/共42頁三、三、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質1 1、水水2 2、碳源碳源（提供碳元素的物質）（提供碳元素的物質）3 3、氮源氮源（提供氮元素的物質）（提供氮元素的物質）4 4、無機物無機物（無機鹽）（無機鹽）5 5、生長因子生長因子（

5、微生物生長不可缺少的微（微生物生長不可缺少的微量有機物。如維生素、含氮堿基）量有機物。如維生素、含氮堿基）第15頁/共42頁蛋白質蛋白質脂肪酸脂肪酸 不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a. 異養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為b. 自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物的碳源為的碳源為碳酸鹽碳酸鹽 碳酸氫鹽碳酸氫鹽二氧化二氧化碳碳糖類（主要）糖類（主要）含碳有機物（有機碳）含碳有機物（有機碳）含碳無機物（無機碳）含碳無機物（無機碳）第16頁/共42頁蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素氮氣氮氣氨氣氨氣硝酸鹽硝酸鹽銨鹽銨鹽注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽汁注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽

6、汁等天然營養(yǎng)物質中既含有碳源又同時含有等天然營養(yǎng)物質中既含有碳源又同時含有氮源、生長因子等營養(yǎng)要素氮源、生長因子等營養(yǎng)要素第17頁/共42頁第18頁/共42頁第19頁/共42頁無菌操作無菌操作1 1、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵：、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵：2 2、無菌操作、無菌操作 避免雜菌感染操作對象的操作過程避免雜菌感染操作對象的操作過程3 3、哪些地方有菌可能導致菌體感染？、哪些地方有菌可能導致菌體感染？ 操作者操作者 培養(yǎng)基、接種工具、器皿培養(yǎng)基、接種工具、器皿 空間空間 防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵第20頁/共42頁第21頁/共42頁第22頁/共42頁無菌操作無菌操作1 1、獲得純凈培

7、養(yǎng)物的關鍵：、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵：2 2、無菌操作、無菌操作 避免雜菌感染操作對象的操作過程避免雜菌感染操作對象的操作過程3 3、哪些地方有菌可能導致菌體感染？、哪些地方有菌可能導致菌體感染？ 操作者操作者 培養(yǎng)基、接種工具、器皿培養(yǎng)基、接種工具、器皿 空間空間 防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵第23頁/共42頁第24頁/共42頁第25頁/共42頁第26頁/共42頁（二）、分離純化大腸桿菌通常把無菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過程叫做接種。1.方法：微生物的接種的常用接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分

8、散到培養(yǎng)基表面。 稀釋涂布平板法：將駿業(yè)進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。第27頁/共42頁菌落。n1 平板劃線法分離微生物的原理：連續(xù)劃線。由于劃線后，線條末端的細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能 得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 第28頁/共42頁（1）平板劃線操作：一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；同時存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。（二）、分離純化大腸桿菌1.方法：第29頁/共42頁第30頁/

9、共42頁第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結束灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基殺死上次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染或感染操作者第31頁/共42頁（2）稀釋涂布平板的操作方法（二）、分離純化大腸桿菌1.方法：第32頁/共42頁（2）稀釋涂布平板的操作方法（二）、分離純化大腸桿菌1.方法：第33頁/共42頁（二）、分離純化大腸桿菌2.培養(yǎng)、鑒定：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基（對照組）都放入到37恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，分別觀察并記錄結果。 3.菌種保存：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。長期保存：甘油管藏法臨時保藏：第34

10、頁/共42頁第35頁/共42頁第36頁/共42頁第37頁/共42頁第38頁/共42頁第39頁/共42頁的的_ _ 含量進行定量測定。含量進行定量測定。發(fā)酵產纖維素酶 液體 固體 課題延伸第40頁/共42頁分解分解纖維纖維素的素的微生微生物的物的分離分離纖維素酶纖維素酶種類、作用、催化活力種類、作用、催化活力剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理實實驗驗設設計計土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)純化純化培養(yǎng)培養(yǎng)鑒別鑒別培養(yǎng)培養(yǎng)前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纖維素土壤富含纖維素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鑒別染色鑒別分離出分解菌分離出分解菌課堂總結第41頁/共42頁感謝您的觀看！第42頁/共42頁