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1、 專題二 細(xì)胞工程 第1課時(shí) 植物組織培養(yǎng)技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.簡(jiǎn)述細(xì)胞全能性的概念含義 2. 植物組織培養(yǎng)的過程和方法 一、細(xì)胞工程的概念 指以細(xì)胞為基本單位，在體外無(wú)菌條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖或利用細(xì)胞融合、核移植等技術(shù)，使細(xì)胞某些生物學(xué)特性按照人們的意愿發(fā)生改變，從而改良生物品種、創(chuàng)造新品種和加速繁育生物個(gè)體，以及獲得某些有用的細(xì)胞代謝產(chǎn)物的技術(shù)。 1．原理和方法：應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法。 2．操作水平：細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。 3．工程目的：按照人的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞

2、產(chǎn)品。 二、分類 根據(jù)操作對(duì)象不同，可分為植物細(xì)胞工程、動(dòng)物細(xì)胞工程和微生物細(xì)胞工程。 三、技術(shù)應(yīng)用 I．植物細(xì)胞工程 （一）植物組織培養(yǎng) 1．概念：在無(wú)菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織，叢芽，最終形成完整的植株。 2．理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性。 （1）概念：每個(gè)細(xì)胞都包含該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因。 （2）原因：生物體的任一細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息。 （3）生物體上的細(xì)胞未表現(xiàn)出全能性，而是形成特定的組織器官，其原因是：細(xì)胞中的基因進(jìn)行了選擇性表達(dá)

3、，使細(xì)胞分化成不同的組織和器官 （4）表現(xiàn)出全能性的條件：完整的細(xì)胞核、脫離母體、無(wú)菌、一定的營(yíng)養(yǎng)、激素；適宜的外部條件。 （5）全能性表達(dá)的難易程度：受精卵＞生殖細(xì)胞＞干細(xì)胞＞體細(xì)胞；植物細(xì)胞＞動(dòng)物細(xì)胞 3．目的：獲取植株。 4．選材：植物莖尖、根尖、葉片和花藥等。 5．過程 （1）外植體需消毒，可用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精。各類器具需經(jīng)過滅菌處理，在無(wú)菌條件下操作。若選取外植體是花藥，則此過程稱為花藥（花粉）離體培養(yǎng)。 （2）細(xì)胞分化：植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。 （3）分化的實(shí)質(zhì):基因選擇性表達(dá)的結(jié)

4、果。 （4）脫分化:讓已經(jīng)分化的細(xì)胞,經(jīng)過誘導(dǎo)后,失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程。此過程應(yīng)作遮光處理。 （5）愈傷組織的特點(diǎn)：沒有特定結(jié)構(gòu)和功能并處于旺盛分裂狀態(tài)的薄壁細(xì)胞（排列疏松高度液泡化，無(wú)定形狀態(tài)）。 愈傷組織由于分裂旺盛，細(xì)胞增殖較迅速，更容易受到外界環(huán)境的干擾而發(fā)生突變（包括基因突變和染色體變異）。 當(dāng)細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的含量，配比相等時(shí)，愈傷組織只生長(zhǎng)不分化；配比高時(shí)利于芽的分化；比例低時(shí)利于根的分化。 （6）再分化與脫分化所用的培養(yǎng)基成分不同。再分化時(shí)需要光照處理。再分化成根、芽或胚狀體等。 （7）胚狀體：也稱體細(xì)胞胚，類似胚的結(jié)構(gòu)，具有胚芽和胚根，

5、在合適條件下可發(fā)育稱為新的植株。再分化成胚狀體與再分化成根、芽的所處條件不同。 6．條件 ①離體狀態(tài)。②無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境。③適宜的溫度、PH、光照等。④特定的培養(yǎng)基：水、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、天然附加物、生長(zhǎng)物質(zhì)。也可在培養(yǎng)基中添加抗生素或殺菌物質(zhì)，來(lái)避免污染。 7． 地位：是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。 專題二 細(xì)胞工程 第2課時(shí) 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.列舉植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用 （一） ．植物組織培養(yǎng)技術(shù) 8.應(yīng)用

6、 （1）微型繁殖 植物組織培養(yǎng)可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性，可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。 （2）作物脫毒 植物分生區(qū)附近，如莖尖、根尖、因很少被病毒感染，甚至無(wú)病毒。生產(chǎn)上常選用莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，再生出的植株就有可能不帶病毒。 注意：產(chǎn)生的植株只是無(wú)病毒植株，而不具備抗病毒的特性。要獲得抗病毒特性，可采用基因工程的方法。 （3）制造人工種子 ①人工種子結(jié)構(gòu)： a.人工種皮：所用材料應(yīng)有韌性、耐壓、對(duì)胚狀體無(wú)毒害，最常用海藻酸鈉制作，具有保護(hù)作用。 b.人工胚乳：一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物和蛋白質(zhì)。 c.胚狀體。 ②優(yōu)點(diǎn)：不受環(huán)境因素的制約，一年四季都可以進(jìn)行工

7、廠化生產(chǎn)；繁殖速度快，可在短時(shí)間內(nèi)提供大量種苗；胚狀體是經(jīng)人工無(wú)性繁殖產(chǎn)生的，有利于保存該種系的優(yōu)良性狀。 （4）作物新品種的培育 ①單倍體育種。②誘變育種的材料。③轉(zhuǎn)基因植物的培育。 （二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 1．概念：將植物組織培養(yǎng)過程中形成的愈傷組織或其它易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，得到分散的懸浮細(xì)胞，再利用細(xì)胞群體產(chǎn)生人類所需的細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物。 2．原理：細(xì)胞增殖。 3．目的：不是使細(xì)胞形成組織乃至植物體，而是通過大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)以獲得人類所需的細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物。 4．應(yīng)用 ①藥用原料，如紫杉醇（抗腫瘤藥物），人參皂苷。②食品添加劑，如各種天然的香精、食用色

8、素、甜味劑。③保健食品，如螺旋藻。 專題二 細(xì)胞工程 第3課時(shí) 植物體細(xì)胞雜交技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.簡(jiǎn)述植物體細(xì)胞雜交技術(shù) （三）植物體細(xì)胞雜交 1．概念 將不同種的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成 雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體。 2．目的：培育出種間或?qū)匍g雜種。 3．原理：細(xì)胞膜流動(dòng)性和植物細(xì)胞全能性 4．過程： （1）原生質(zhì)體：指去除植物細(xì)胞壁后獲得的裸露的植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)等。其來(lái)源可以是各種植物的葉片、根尖等部位，也可以從愈傷組織中獲得。 （2）制備原生

9、質(zhì)體的方法是: 酶解法,所用的酶是 纖維素酶和果膠酶。 基本過程是先利用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁,然后利用低速離心或采用相對(duì)密度漂浮法對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行分離純化并鑒定其活性,再用于細(xì)胞培養(yǎng)或體細(xì)胞雜交。 （3）人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法有: 物理法（離心，振動(dòng)，電刺激）和 化學(xué)法（聚乙二醇，英文縮寫PEG）。 （4）原生質(zhì)體融合完成的標(biāo)志是: 雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁。在此過程中最活躍的細(xì)胞器是高爾基體或高爾基體和線粒體。 （5）融合細(xì)胞的類型有3種（只考慮兩兩融合的情況）；染色體組數(shù)為 2M+2N 。可育。 判斷植物是否可育：第一，要有同源染色體。第二，同源染色體要能進(jìn)行正常的聯(lián)會(huì)。如三

10、倍體無(wú)籽西瓜，體細(xì)胞中有同源染色體，但在減數(shù)分裂過程中，同源染色體聯(lián)會(huì)發(fā)生紊亂，不能形成正常的生殖細(xì)胞，因此不可育，無(wú)籽。 5．意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙；擴(kuò)大了遺傳重組的范圍。 6．缺點(diǎn)：雖然雜種植株含有兩種生物的全部遺傳物質(zhì)，但不能完全具有兩種植株的全部性狀，不能完全按人們意愿培育出所需要的新品種。 7．實(shí)例：番茄——馬鈴薯；白菜—甘藍(lán)（特點(diǎn)：生長(zhǎng)期短、耐熱性強(qiáng)和易于貯藏）等。 專題二 細(xì)胞工程 第4課時(shí) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克?。ê?jiǎn)述

11、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及其應(yīng)用；） II．動(dòng)物細(xì)胞工程 （一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 1．概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。 2．原理：細(xì)胞增殖。 3．取材：大都取自動(dòng)物胚胎或出生后不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織。一般，各種動(dòng)物組織或細(xì)胞都可以體外培養(yǎng)，但代謝旺盛、分化程度低的更容易培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞更容易培養(yǎng)。 4．過程： （1）用胰蛋白酶處理動(dòng)物組織目的：使組織分散成單個(gè)細(xì)胞。 （2）不用胃蛋白酶的原因：培養(yǎng)液的PH為7.2~7.4，而胃蛋白酶的適宜PH為1.8左右，在此PH范圍內(nèi)，胃蛋白酶會(huì)變性失活。 （

12、3）原代培養(yǎng)：指從供體獲取組織或細(xì)胞后的初次培養(yǎng)。由于剛離體，細(xì)胞的生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，最接近體內(nèi)組織或細(xì)胞，很適合用于藥物測(cè)試、基因表達(dá)等試驗(yàn)研究。 （4）細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，稱為細(xì)胞的接觸抑制。 （5）傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。與原代培養(yǎng)的區(qū)別是是否分瓶，一旦分瓶就稱為傳代培養(yǎng)。多次分瓶后培養(yǎng)細(xì)胞仍叫傳代培養(yǎng)。 （6）細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)10~50代的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。原代培養(yǎng)的細(xì)胞不叫細(xì)胞株。 （7）細(xì)胞系：當(dāng)傳代培養(yǎng)50代后，一

13、些細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，并且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，有可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，并不是每次培養(yǎng)都會(huì)使細(xì)胞稱為細(xì)胞系，只是有這種可能。 細(xì)胞株與細(xì)胞系最大區(qū)別是：細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變，而細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變了。 5．條件 （1）無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境 ①培養(yǎng)液及器具滅菌處理。②培養(yǎng)液中通常加入一定量的抗生素（注意加入抗生素的種類及濃度）。③定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞毒害。 （2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清。 （3）適宜的溫度、PH和氣體環(huán)境 ①溫度

14、：37℃左右。②PH：7.2~7.4。③氣體主要由O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，攪動(dòng)培養(yǎng)液的原因：增加培養(yǎng)液中的溶解氧，使動(dòng)物細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸。 6．地位：是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。 7．應(yīng)用 生物制品的生產(chǎn)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培養(yǎng)、檢測(cè)有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。 專題二 細(xì)胞工程 第5課時(shí) 細(xì)胞核移植和體細(xì)胞克隆 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.簡(jiǎn)述克隆動(dòng)物的概念含義和基本原理； 2.簡(jiǎn)述體細(xì)胞核移植技術(shù)和動(dòng)物克隆技術(shù)，以及應(yīng)用前景 （二）細(xì)胞核移植 1．概

15、念：將供體體細(xì)胞的細(xì)胞核與受體去核卵（母）細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行人工組合，借助于卵（母）細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進(jìn)而形成個(gè)體的技術(shù)。 2．原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性 3．目的： （1）生殖性克隆，得到克隆動(dòng)物。 （2）治療性克隆，克隆器官用于器官移植。 4．取材 （1）供體細(xì)胞 若取體細(xì)胞核，則為體細(xì)胞核移植；若取胚胎細(xì)胞核，則為胚胎細(xì)胞核移植。由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性較困難。 （2）卵（母）細(xì)胞 選取減數(shù)第二次分裂中期的卵（母）細(xì)胞，其細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)已成熟，能支持胚胎的全程發(fā)育。選取卵（母）細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原

16、因：卵（母）細(xì)胞體積大、易操作，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)多，含有能使細(xì)胞核的全能性表達(dá)的物質(zhì)。 5．過程 6．存在問題 成功率低，絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康問題，對(duì)克隆動(dòng)物食品的安全性問題也存在爭(zhēng)議 7．應(yīng)用 ①加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)良畜種群繁育。②保護(hù)瀕危物種，增大存活數(shù)量。③生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白。④作為異種移植的供體。⑤用于組織器官的移植。 專題二 細(xì)胞工程 第6課時(shí) 細(xì)胞核移植和體細(xì)胞克隆 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.細(xì)胞融合與單克隆抗體（簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞融合的方法和過程

17、；簡(jiǎn)述單克隆抗體的制備過程及其應(yīng)用；關(guān)注細(xì)胞工程研究的發(fā)展和應(yīng)用前景） （三）動(dòng)物細(xì)胞融合 1．概念：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。 2．原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 3．誘導(dǎo)融合方法： 物理法（離心、振動(dòng)、電激）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）。 4．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。 5．應(yīng)用：制備單克隆抗體。 （1）概念：?jiǎn)我坏腂淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)培養(yǎng)篩選后產(chǎn)生的專一抗體。 （2）傳統(tǒng)方法獲得的抗體特點(diǎn)：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。 （3）過程 ①制備單克

18、隆抗體為何用免疫過的B淋巴細(xì)胞？ 免疫過的B淋巴細(xì)胞才能產(chǎn)生抗體（實(shí)際上應(yīng)為效應(yīng)B細(xì)胞）。 ②為何制備單克隆抗體用單個(gè)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞？ 一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體，而骨髓瘤細(xì)胞能在體外大量增殖。 ③細(xì)胞融合之后，若只考慮兩兩融合： 有5種細(xì)胞，3種融合細(xì)胞。 ④單克隆抗體制備過程的三次（兩次）篩選： 第一次：用選擇性培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞； 第二次：（有限稀釋法）篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞； 第三次：篩選出產(chǎn)量高的雜交瘤細(xì)胞（一般不說(shuō)第三次篩選）。 ⑤雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖，又能產(chǎn)生專一性（特異性）抗體。 原因是：雜交瘤細(xì)胞具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)。 （4）主要優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。 （5）用途 ① 作為診斷試劑 準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 ② 用于治療疾病和運(yùn)載藥物 可制成“生物導(dǎo)彈”，如把抗癌細(xì)胞的單克隆抗體跟放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素相結(jié)合，制成“生物導(dǎo)彈”，注入體內(nèi)，借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置，在原位殺死癌細(xì)胞。這樣既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。 注意：?jiǎn)慰寺】贵w不等同于生物導(dǎo)彈，生物導(dǎo)彈=引導(dǎo)（單克隆抗體）+ 彈頭（藥物） 10