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1、2022年高三生物二輪復習 生物學科綜合能力訓練（五）（1）教案 人教版 1．實驗目的 （1）了解配制培養(yǎng)基的一般步驟和方法。 （2）練習配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 （3）了解滅菌的基本原理，以及實驗室中常用的滅菌方法。 （4）初步學會細菌培養(yǎng)的基本技術(shù)。 2．實驗原理 根據(jù)細菌的需要配制培養(yǎng)基，在培養(yǎng)之前要徹底滅菌。根據(jù)某種細菌的營養(yǎng)需要而選擇多種原料配制而成的培養(yǎng)基，不僅含有這種細菌生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，還要有適宜的pH、離子濃度。本實驗所用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，應用較廣泛，適于芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等多種細菌的培養(yǎng)，配制好的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌。滅菌是指殺死液體或固體

2、表面所有微生物的細胞、芽孢和孢子。對不同的材料，應當采取不同的滅菌方法。培養(yǎng)基一般采用高壓蒸氣滅菌法，就是將待滅菌的培養(yǎng)基放入密閉的高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)，通過加熱使鍋內(nèi)的水沸騰并產(chǎn)生水蒸氣。當水蒸氣將鍋內(nèi)的冷空氣排盡以后，關閉排氣閥并繼續(xù)加熱，這時鍋內(nèi)的壓力就會升高，最終使菌體蛋白質(zhì)凝固變性，從而達到滅菌的目的。接種環(huán)是用火焰燒灼滅菌的。無菌室或超凈工作臺則是通過紫外線照射滅菌的。 將某種細菌接種在徹底滅菌的培養(yǎng)基上，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)后，就能夠得到生長良好的細菌群體，它們在培養(yǎng)基上會呈現(xiàn)出一定的形態(tài)特征。 3．實驗材料 天平、角匙、200 mL燒杯、試管、漏斗、量筒、玻棒、滴管、膠管、彈簧

3、夾、鐵架臺、酒精燈、石棉網(wǎng)、三角架、火柴、紗布、棉花、牛皮紙、線繩、標簽、接種環(huán)、pH試紙、金屬小筐、高壓蒸汽滅菌鍋、無菌操作箱。芽孢桿菌或金黃色葡萄球菌、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、濃度為1 mol/L 的NaOH溶液、體積分數(shù)為75%的酒精溶液、蒸鎦水。 4．實驗方法與步驟 （1）培養(yǎng)基的配制 細菌培養(yǎng)的基礎是配制培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方然后再加熱溶解，補足水分，其制作過程包括以下幾個環(huán)節(jié)： ①清潔玻璃器皿 一般用肥皂液煮沸30 min,或用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的溶液浸泡數(shù)10 min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆谩? ②配制液體培養(yǎng)基 a．根據(jù)需要配制培養(yǎng)基數(shù)量，

4、先在燒杯中注入少量蒸餾水；b．按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次使之溶解；c．補足需水量；d．如用牛肉膏、蛋白胨配制時，需加熱熔化后溶解；e．加熱后，補足水分即可。 ③配制固體培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基里加入一定量的瓊脂，加熱熔化即可。 ④調(diào)pH 先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基滴加1 mol/L 的NaOH溶液，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測pH,直到7.4～7.6為止。反之則用1 mol/L的HCl進行調(diào)節(jié)。 ⑤過濾分裝 用紗布趁熱過濾，將濾液分裝于試管中，其量約為試管體積的1/5（不要玷污管壁）。 ⑥加棉塞 培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞

5、。棉塞能防止雜菌污染；保證通氣良好，加棉塞時，應使棉塞長度的2/3在試管口內(nèi)。 ⑦包扎 每10支試管用線繩捆成一捆，并且在管口外面包上一層牛皮紙，然后用線繩扎好。在每捆試管外掛上標簽，注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名。 （2）滅菌 高壓蒸汽滅菌的效果是細菌培養(yǎng)的關鍵。具體操作如下： ①打開高壓滅菌鍋，取出里面的滅菌桶，向鍋內(nèi)加水（最好用開水）水面與底架平齊為宜。 ②將扎好的試管管口向上，豎放在滅菌桶內(nèi)，再將滅菌桶放回滅菌鍋。 注意：滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠，否則會影響滅菌效果。 ③加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。以兩兩對稱的方式，同時旋緊相對的兩個緊固螺栓，以防漏

6、氣。 ④排出鍋內(nèi)的冷空氣。打開火源，當壓力上升到49 kPa時，打開排氣閥放氣，當壓力回到0時，關閉排氣閥。重復上述放氣過程一次，以徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣。 ⑤當鍋內(nèi)的壓力上升到98 kPa時，控制火力大小，使壓力維持在98 kPa左右20 min，切斷電源。 ⑥當壓力降至0以后，打開排氣閥，完全排出水蒸氣（約10 min）后，放松緊固螺栓，取出試管。最后，將滅菌鍋里的水排放干凈。 （3）擱置斜面 滅菌后的培養(yǎng)基冷卻到50℃時，將每個試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上，使培養(yǎng)基形成斜面，斜面的長度不超過試管總長度的一半。 （4）接種 ①用肥皂將雙手洗凈，擦干，再用酒精棉球（體積分數(shù)75

7、%）擦拭雙手。 ②當手上酒精揮發(fā)后，點燃酒精燈。 ③接種，操作程序見下圖。 a．用左手大姆指、食指和無名指夾住菌種試管和待接種的斜面試管，管口并齊，并使斜面向上成水平狀態(tài)。右手擰松棉塞，但不要取下。 b．右手拿接種環(huán)（如握鋼筆），在火焰上燒灼滅菌。注意：有可能伸入試管內(nèi)的接種環(huán)其余部分也要燒灼，特別是箍處。 c．在火焰邊用右手無名指和小指夾住兩個棉塞，將它們?nèi)∠拢ú荒芊畔拢┩瑫r左腕轉(zhuǎn)動燒灼管口一周，勿燒得過燙。 d．將接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)，讓環(huán)先接觸培養(yǎng)基上未長菌的部位，使環(huán)冷卻。輕輕挑取少量菌體，立即將接種環(huán)抽出。 e．在火焰旁迅速將沾有菌體的接種環(huán)伸到斜面培養(yǎng)基的底部，由

8、里向外輕輕劃蛇形細線，線要劃密一些。注意不要將培養(yǎng)基劃破，也不要使接種環(huán)接觸到管壁或管口。 f．抽出接種環(huán)，再用火焰燒灼管口，并在火焰上方將棉塞塞上。將接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌，接種致病菌時更要注意這點，將棉塞旋緊。 ④熄滅酒精燈。在接種試管標簽上填寫菌種、日期、接種者。實驗后的帶菌培養(yǎng)基處理掉，如果生長有非致病菌，加熱后倒掉。生有致病菌的，必須高壓蒸氣滅菌后倒掉。 （5）培養(yǎng) 將接種后的試管放入恒溫箱內(nèi)，在25℃下培養(yǎng)5～7d，或在37℃下培養(yǎng)1d。 （6）觀察記錄 當培養(yǎng)基表面長出菌落后，觀察各種菌菌落的大小、形態(tài)、質(zhì)地、顏色，并作記錄。 5．注意事項 （1）培養(yǎng)基分裝完畢。管口通常用棉塞封住。制作棉塞時，不要使用脫脂棉，因為脫脂棉容易吸水。 （2）滅菌結(jié)束后，切勿過早打開排氣閥，否則，開蓋時試管內(nèi)的培養(yǎng)基會由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出管口，使棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。 （3）接種劃線時要注意：a．劃線的方向應該從里往外；b．線條要細且密；c．不要重復劃線