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1、2022年高三生物考前贏分30天 第30天 1、DNA的粗提取與鑒定 （1）．思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。 （2）．原理 利用DNA的溶解性 ①DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl中溶解度不同，鹽濃度為0.14mol/l時(shí)，DNA溶解度最小。 ②DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。 利用DNA的耐受性 ①蛋白酶水解：蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)DNA沒有影響。 ②高溫變性：大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60℃—80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會(huì)變性。 ③洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒有影響。

2、（3）．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ①材料的選?。哼x用DNA相對(duì)較高的生物組織。 ②細(xì)胞的破碎（以雞血為例） 過濾 加蒸餾水 雞血細(xì)胞 用玻璃棒攪拌 收集濾液。 ③雜質(zhì)的去除：方案之一是利用DNA在不同濃度的NaCl中溶解度的不同，通過控制NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)。 ④DNA的析出：處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、95%冷卻的酒精溶液可使DNA析出。 *動(dòng)物材料：加水-過濾-加NaCl-加水-過濾-加NaCl-過濾-加酒精-攪拌析出（輕緩，以免DNA分子斷裂） *植物材料：碎——磨（加洗滌劑和食鹽）——濾（紗布，濾去雜質(zhì)）——析（加

3、冷酒精） （4）．提純方法 ①鹽濃度為0.14mol/l，DNA析出 ②木瓜蛋白酶處理，去除蛋白質(zhì)雜質(zhì) ③60-75℃保溫10-15min ④95%的冷酒精：蛋白質(zhì)溶解，DNA不溶 ⑤過濾、離心等 沸水浴 加熱 （5）．DNA的鑒定 DNA溶解在2 mol/l的NaCl溶液中 + 二苯胺試劑 溶液顏色變藍(lán)。 對(duì)照組不加絲狀物，其他與實(shí)驗(yàn)組相同 1、分離蛋白質(zhì)的常用方法和原理 （1）凝膠色譜法 ①概念：凝膠色譜法也稱作分配色譜法 ，是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。 ②原理：大多數(shù)凝膠是由多糖類化合物 構(gòu)成的，如葡聚糖 或瓊脂糖 。

4、其內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較小 的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長 ，移動(dòng)速度較慢 ；而相對(duì)分子質(zhì)量較大 的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短 ，移動(dòng)速度較快 。相對(duì)分子質(zhì)量 不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。 （2） 緩沖液 ①作用：在一定范圍內(nèi)，緩沖溶液能抵制外界的酸和堿 對(duì)溶液PH 的影響，維持PH值基本不變。 ②配置：通常由1—2 種緩沖劑溶解于水中配置而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例 就可以制得不同PH范圍內(nèi)使用 的緩沖液。 （3）電泳 ①概念：帶電粒子在電場 的作用下發(fā)生遷移 的過程。 ②原理：許多重要的生物

5、大分子，如多肽 、核酸 等都具有帶電的基團(tuán)，在一定PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上 正電 或負(fù)電。在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極 移動(dòng)。電泳利用了分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異 以及分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的 遷移速度 ，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 2、實(shí)驗(yàn)操作 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。 （1） 樣品處理 血紅蛋白由四個(gè)肽鏈組成，包括兩個(gè)α-肽鏈和兩個(gè)β-肽鏈。每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳。血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。 ① 紅細(xì)胞的洗滌： （I）目的：去除雜

6、蛋白 （II）方法：低速短時(shí)間 離心，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿 ，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯中，再加五倍體積 的生理鹽水，緩慢攪拌10min ，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次 ，直到上清液沒有黃色 ，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 ② 血紅蛋白的釋放： 將洗滌好的紅細(xì)胞倒入燒杯中，加蒸餾水 到原血液的體積，再加40％體積的甲苯 ，置于磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?0min。 ③ 分離血紅蛋白的溶液：將攪拌好的混合8高速離心后，觀察到試管中溶液分為四層 第1層：無色透明 的甲苯層 第2層：脂溶性物質(zhì) 的沉淀層--白色 薄層固體 第3層：血紅蛋白 的水溶液--紅色

7、透明液體 第4層：其他雜質(zhì)的暗紅色 色沉淀物。 ④透析：取1ml的血紅蛋白 溶液裝入透析袋 中，將其放入盛有300ml的20mol/L的磷酸緩沖液 中（PH為 7 ） （去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)，或用于更換樣品中的緩沖液） （2）凝膠色譜操作： （1）凝膠色譜柱的制作：（略看） （I）柱底部制作： a．選擇合適的橡皮塞，中間打孔 b．在橡皮塞頂部切出鍋底狀的凹穴 ，在0. 5ml的移液管 頭部切下5cm 長的一段，插入橡皮塞孔內(nèi)，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。 c．剪尼龍網(wǎng)小圓片覆蓋在橡皮塞的凹穴 。用大小合適的100目 的尼龍紗將橡皮塞 包好，插到玻璃管上

8、部一端。 d．色譜柱的下端用移液管頭作出口部位，連接一細(xì)的尼龍管 ，并用螺旋夾 控制尼龍管的打開 與關(guān)閉 ，另一端放入收集色譜流出液 的收集器內(nèi)。 （II）柱頂部制作：插入安裝了玻璃管的橡皮塞 （3）凝膠色譜柱的裝填 （I）填充材料；交聯(lián)葡聚糖凝膠 。 （II）方法：凝膠用蒸餾水 充分溶脹后，配成凝膠懸浮液 ，在與色譜柱下端連接的尼龍管打開的情況下，一次性緩慢倒入色譜柱 內(nèi) 注意：色譜柱內(nèi)不能有氣泡 ，一旦發(fā)現(xiàn)，必須重裝。 在20mmol/ L磷酸緩沖液（pH7.0）充分平衡凝膠12h （4） 樣品的加入和洗脫： （I）加樣前：打開流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液 下

9、降到與凝膠面 平齊，關(guān)閉出口。 （II）加樣：用吸管 將1ml透析后 的樣品加到色譜柱的頂端 ，注意不要破壞凝膠面 。 *要求：沿管壁環(huán)繞移動(dòng)，貼壁加樣，不接觸凝膠面，不破壞凝膠面 （III）加樣后：打開下端出口 ，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等完全進(jìn)入后，關(guān)閉下端的出口。小心加入緩沖液到適當(dāng)高度 ，連接緩沖液洗脫瓶 ，打開下端出口，進(jìn)行洗脫，待紅色的蛋白質(zhì) 接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5 ml 收集一管，連續(xù)收集。 （5）SDS——聚丙烯酰胺凝膠電泳 判斷純化 的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的鑒定，使用最多的是SDS——聚丙烯酰胺凝膠電泳 （掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別

10、，使電泳遷移率完全取決于分子的大?。? 補(bǔ)差糾錯(cuò) 以下關(guān)于血紅蛋白提取和分離的過程及原理敘述正確的是（xx揚(yáng)州一模） A．紅細(xì)胞洗滌過程中要加入5倍體積的蒸餾水，重復(fù)洗滌三次 B．將血紅蛋白溶液放在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.9％的NaCl溶液透析12小時(shí) C．凝膠裝填在色譜柱內(nèi)要均勻，不能有氣泡存在 D．蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較大的移動(dòng)速度慢 解題規(guī)范 以下對(duì) DNA 和血紅蛋白的提取與分離（鑒定）實(shí)驗(yàn)的分析不正確的是(xx徐州二模) A ．都要用豬血細(xì)胞來做實(shí)驗(yàn) B ．在 DNA 的粗提取與鑒定試驗(yàn)中，有兩次 DNA 析出，所用的方法相同 C ．在實(shí)驗(yàn)中都

11、要進(jìn)行除雜處理以便得到較純凈的 DNA 或血紅蛋白 D ，將析出的 DNA 溶解在 2mol/L的 NaCI 溶液中，加入二苯胺試劑后呈現(xiàn)藍(lán)色 考前贏分第30天 愛練才會(huì)贏 前日回顧 1．酵母菌的生長周期短，增殖速度快，是良好的實(shí)驗(yàn)材料?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題： (1)在利用酵母菌判斷細(xì)胞死活的實(shí)驗(yàn)中，被臺(tái)盼藍(lán)染液染成藍(lán)色的是????????的酵母菌細(xì)胞。 (2)在探究“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化”的實(shí)驗(yàn)中，需使用??????????? 在顯微鏡下對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。向裝有10mL培養(yǎng)液的試管中接種少量酵母菌菌種，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，酵母菌種群數(shù)量(Y)隨時(shí)間(X

12、)的變化情況最可能是????? ???????????。 (3)在果酒的工業(yè)制作過程中，接種完成后要先向發(fā)酵罐中通入一段時(shí)間的無菌空氣后再密封，這樣做的目的是??????????????? 。酵母菌利用葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生酒精的反應(yīng)式是?????????????????????? 。果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用???????????? 試劑來檢驗(yàn)，在果酒釀造過程中，如果果汁滅菌不嚴(yán)格，含有醋酸桿菌 ，在酒精發(fā)酵旺盛時(shí)，醋酸桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸?????????????? 。 (4)在酵母細(xì)胞的固定化實(shí)驗(yàn)中，將干酵母放入? ????????中，使其活化，常用???????????

13、???? 作載體包埋酵母細(xì)胞。 當(dāng)天鞏固 1．某同學(xué)以菜花為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，步驟如下： 步驟一：稱取30g菜花，去梗取花，切碎。 步驟二：將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。 步驟三：在漏斗中墊上濾紙，將菜花研磨液過濾到燒杯中。在冰箱中放置幾分鐘，取上清液。 步驟四：將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的某溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤?。將絮狀物纏繞在玻璃棒上。 請(qǐng)回答下列問題： （1）請(qǐng)指出并改正該同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作中的錯(cuò)誤：___________________。 （2）步驟二的目的是使菜花細(xì)胞破碎，釋放DNA，加入

14、研磨液的主要成分有____和___等。（3）如要使步驟三所得上清液中雜質(zhì)減少，可進(jìn)行______操作后再置于冰箱。 （4）步驟四中所用兩倍體積的某溶液為_________________，需“緩緩、輕輕地”攪拌溶液的原因是______________。 （5）簡要說明鑒定步驟四所得絮狀物是DNA的基本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：____________________。 前日回顧答案： 1、 (1)死??? (2)血球計(jì)數(shù)板(顯微計(jì)數(shù)板)??? C (3)先供氧，以促進(jìn)酵母菌的繁殖，使酵母菌的數(shù)目快速增加，然后讓酵母菌進(jìn)行無氧呼吸 ?? ???重鉻酸鉀?不能 (4)水??? 海藻酸鈉(聚丙烯酰胺，瓊脂糖，明膠，醋酸纖維素，硝酸纖維素，答出一項(xiàng)即可) 當(dāng)天鞏固答案：1、（1）濾紙應(yīng)改為紗布（或尼龍布）? （2）洗滌劑?? NaCl? （3）離心 （4）體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精??? 防止DNA斷裂 （5）將絮狀物溶于0.015mol/L（或2mol/L）的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，沸水浴加熱，觀察顏色變化，同時(shí)用相應(yīng)濃度的NaCl做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。