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1、植物激素的檢測(cè)方法 1. 生物測(cè)試 生物測(cè)試法是最早采用的植物激素測(cè)定方法它是利用植物激素 的生理活性通過(guò)某些植物的組織和器官對(duì)植物激素產(chǎn)生的特異性反 應(yīng)進(jìn)行測(cè)定的。 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行也能反映植物激素的生理活性 缺點(diǎn)：專一性較差且植物體內(nèi)含有生長(zhǎng)素類似物T拮抗物等影響測(cè) 定的結(jié)果 需在前處理中盡可能純化所要測(cè)定的組分 過(guò)程復(fù) 雜此外重復(fù)性差工作量大 2. 免疫檢測(cè) 免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用于植物激素的測(cè)定有力地促進(jìn)了激素定量研究的 發(fā)展它的基本原理是利用抗原和抗體的特異性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。 優(yōu)點(diǎn)：了檢測(cè)靈敏度可檢測(cè)出10-12 g的微量物質(zhì)相應(yīng)其前處理也 得到了簡(jiǎn)化又改善了測(cè)定的專一性。 缺點(diǎn)：

2、抗體的制備較復(fù)雜。 3. 物理化學(xué)方法 物理化學(xué)方法分光譜法和色譜法兩種 1)分光譜法：主要有紫外吸收光漕紅外吸收光譜和熒光法 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高 缺點(diǎn)：專一性差 2)色譜法：利用物質(zhì)在不同介質(zhì)中的分配原理進(jìn)行測(cè)定的，包括 紙上層析，薄層層析(TLC)，氣相色譜(GC)，高效液相色譜(HPLC)以 及氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）等，將分離和測(cè)定結(jié)合起來(lái)是色譜法的基本特點(diǎn)。 （1） 紙上層析和TLC： 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單易操作 缺點(diǎn)：分離效率和靈敏度有限制 （2） GC 和 HPLC： 是在紙上層析和TLC的基礎(chǔ)上裝備了商品化的色譜柱和檢測(cè) 器，保證了檢測(cè)方法的專一、靈敏和準(zhǔn)確 （3）

3、 GC 和 HPLC 方法： 分析植物激素,靈敏度和選擇性高,重復(fù)性好，但對(duì)前處理要 求較高；又因保留時(shí)間的分辨有一定限制，若達(dá)不到所需純度要 求可能會(huì)出現(xiàn)多種化合物的保留時(shí)間相同或接近而影響測(cè)定結(jié)果。 （4）在植物激素的理化檢測(cè)中儀器聯(lián)用是當(dāng)代的發(fā)展趨勢(shì)： 最常用的結(jié)合系統(tǒng)是氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GCMSD，技術(shù)，它是 目前最為可靠的激素檢測(cè)方法還可驗(yàn)證其它測(cè)定方法的可靠性 而且還可鑒定未知物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，但需經(jīng)冗長(zhǎng)的樣品純化程序設(shè) 備昂貴，使用和維護(hù)成本高。此外有氣液相色譜GLCD配以火焰 熱離子檢測(cè)器（FTDD快速靈敏地對(duì)植物細(xì)胞分裂素定量測(cè)定25], 也有薄層色譜與氣相色譜結(jié)合分析ABA。

4、 內(nèi)源植物激素：植物體內(nèi)產(chǎn)生的激素 主要有：、生長(zhǎng)素（auxin）、赤霉素（GA3）、細(xì)胞分裂素（CTK）、 脫落酸（abscisic acid, ABA）、乙烯（ethyne，ETH） 和油菜素甾醇、 吲哚乙酸（IAA）玉米素（Z）、 玉米素核苷（ZR）反玉米素（ZT）復(fù)合胺、褪黑 激素秋水仙素吲哚丁酸 外源植物激素：人工合成加到植物中 2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸），吲哚丙酸、、蔡乙酸、 4-碘苯氧乙酸乙稀利水楊酸（SA）茉莉酸b9 （必久）矮壯素（ccc）:又叫三西，碌化碌代膽堿 青 鮮素（mh）奈乙酸吲哚丙酸（IPA）吲哚丁酸（IBA） 6-芐基腺嘌吟（BA）激動(dòng)

5、素（K） 蔡乙酸（NAA） 實(shí)驗(yàn)儀器 中文： LC-6A高效液相色譜儀 日本島津制作所產(chǎn)品 。。，硅膠柱（250mmX5mm） 日本島津制作所產(chǎn)品 SPD-6AV紫外-可見(jiàn)光度檢測(cè)器 日本島津制作所產(chǎn)品 C-R3A數(shù)據(jù)處理機(jī) 日本島津制作所產(chǎn)品 HPLC Waters公司產(chǎn) Alliance系列HPLC及Premier LCT MS/ MS質(zhì)譜聯(lián)用設(shè)備 加拿大 Waters公 司 Xterra C18色 譜柱（100 mm x2.1 mm x3.5u m,加拿大 Waters公 司 美國(guó)HP-5890II型氣相色譜儀，配備FID檢測(cè)器，HP-3395積分儀

6、 1100型高效液相色譜儀 美國(guó)Aglent公司 SLC-10A VP高效液相色譜儀 日本島津公司 英文： HPLC-UV analysis, an Agilent 1100 series HPLC-UV system (Agilent Technologies, USA） Both methanol and ethanol（HPLC grade） Merck （Darmstadt, Germany） Acetic acid （analytical reagent grade） Fisher Scientific （Hanover Park, IL, USA）. 實(shí)驗(yàn)試劑

7、中文： ,a-蔡乙酸（NAA）,吲哚乙酸（IAA ）, 6-芐基嘌吟（BA）,K,GA（上 海伯奧生物科技公司） ZT （上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司 IBA （英國(guó)產(chǎn)，上海化學(xué)試劑分裝站）， IPA（Sigma公 司） 褪黑激素、吲哚乙酸（山入）和復(fù)合胺（Sigma Chemica公司 甲醇和乙腈（HPLC級(jí)，加拿大VWR Scientific公司 甲酸（分析純，Sigma公司 IAA,GA3，Z （玉米素）和ABA Fluka公司 GA3 和 ABA Sigma 公司 IAA,ABA,GA 中國(guó)藥品生物制品檢定所 甲醇、三氯甲烷和乙酸乙酯 分析純 赤霉素GA3、

8、生長(zhǎng)素、IAA和ABA (純度大于97%, Sigma公司) 冰醋酸(AR，上海化學(xué)試劑公司) 玉米素核苷(zR) Sigma公司 玉米素(z) 中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所 玉米素、赤霉素、生長(zhǎng)素、脫落酸 Sigma,純度A99% 腺素、激動(dòng)素、6-芐氨基嘌吟、秋水仙素、吲柴3-丁酸(科 密歐，純度A95%) 色譜純甲醇 德國(guó)MERCK公司 分析純乙酸、甲醇、乙酸乙酯、石油醚 西安化學(xué)試劑廠 英文： GA3, IAA, ABA (脫落酸)，JA, IBA, NAA, 2,4-D(2, 4-二氯苯酚代乙 酚)，1-ethyl-3-(3- dimethylaminoprop

9、yl) carbodiimide (EDC) and sodium dodecyl sulphate (SDS) Sigma-Aldrich (St. Louis, MO,USA). Z, BA, GA, ABA and IBA Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany) IAA,NAAand 2,4-D PhytoTechnology Laboratories(Shawnee Mission, USA) 植物激素的危害 矮壯素：毒理學(xué)的研究表明:即使在低于日允許攝入量濃度水平 下，矮壯素對(duì)動(dòng)物的繁殖能力仍有不良影響。美國(guó)國(guó)家職業(yè)安全和健 康研究所發(fā)布的化學(xué)

10、物質(zhì)毒性數(shù)據(jù)庫(kù)已將矮壯素列為疑似內(nèi)分泌十 擾物質(zhì)。 赤霉素：赤霉素可能干擾人體正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)袁長(zhǎng)期食用會(huì) 在人體中蓄積袁造成器官的慢性中毒袁并可能引起癌變?cè)瑖?yán)重危及 消費(fèi)者的身心健康。可影響機(jī)體的內(nèi)分泌系統(tǒng)受試動(dòng)物的甲狀腺、 卵巢、腎上腺等內(nèi)分泌腺重量明顯增加使得動(dòng)物某些激素水平發(fā)生 改變，影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育 甚至發(fā)生癌變。 乙烯利：具有一定的神經(jīng)毒性、致突變性和弱的激素樣作用。對(duì) 小鼠的免疫功能具有一定的抑制作用能導(dǎo)致小鼠體細(xì)胞、生殖細(xì)胞遺 傳損傷，使小鼠骨髓細(xì)胞微核率和雄性生殖細(xì)胞畸形率提高干擾精 子正常生成和成熟過(guò)程導(dǎo)致小鼠體細(xì)胞染色體畸變和生殖細(xì)胞基 因突變。乙烯利對(duì)人類具有潛在

11、的誘癌、致畸及其他多方面的危險(xiǎn)。 蔡乙酸：有一定抑制睪丸細(xì)胞增殖活性、誘發(fā)睪丸細(xì)胞凋亡的作 用。 2, 4七：小鼠長(zhǎng)期暴露在2, 4 - D的環(huán)境中會(huì)造成骨骼畸形,致 病率和死亡率增加;2, 4 - D具有急性神經(jīng)毒性,對(duì)皮膚和眼睛有刺 激作用,吸入或接觸后,其急性毒性作用主要表現(xiàn)為神經(jīng)性毒性； 慢性毒性作用表現(xiàn)為對(duì)血液、肝、腎的毒性及抑制某些酶的活力,抑 制某些蛋白質(zhì)的合成。 NAA:屬于低毒農(nóng)藥，大白鼠急性口服1_。50為1 000?5 900 mg - kg- 1。對(duì)人的眼睛、皮膚、粘膜和上呼吸道有刺激作用吸入后 可引起咳嗽、喘息、喉炎、氣短、頭痛、惡心、嘔吐通過(guò)食道引起 中毒，對(duì)肝、腎造成損害。 青鮮素：可能是致癌物 因?yàn)樗芤鹄鲜蟮娜旧w斷裂和畸 變。 多效唑：高劑量的多效唑?qū)?dòng)物雄性生殖器官有損傷子代體重 和繁殖指數(shù)降低、肝臟受損 可能是致癌物質(zhì) 應(yīng)慎用；多效唑粉劑 對(duì)皮膚和眼睛有輕微至中等的刺激作用。 廠家：上海喜潤(rùn)化學(xué)工業(yè)有限公司 植物組培及激素-上海世澤生物科技有限公司（比較全）