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1、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗,一、實驗?zāi)康?掌握雙向瓊擴(kuò)試驗的原理和用途 掌握雙向瓊擴(kuò)試驗操作方法 觀察抗原、抗體在瓊脂板中形成的沉淀線,一、原理,血清學(xué)反應(yīng)： 凝集反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 補(bǔ)體參與的反應(yīng) 中和反應(yīng),凝集反應(yīng),顆粒性抗原，或吸附在顆粒性載體表面的可溶性性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊 參與凝集反應(yīng)的抗原稱凝集原，抗體稱為凝集素,,,沉淀反應(yīng),沉淀反應(yīng)：將可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合，在電解質(zhì)存在條件下，經(jīng)過一定時間，即可形成肉眼可見的沉淀物 沉淀物只有在抗原抗體比例合適時才出現(xiàn),補(bǔ)體參與的反應(yīng),補(bǔ)體結(jié)合試驗是根據(jù)補(bǔ)體能與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，但不能單獨

2、同抗原或抗體結(jié)合的特性，用特定的補(bǔ)體來檢測抗原抗體間有無特異性結(jié)合,,中和反應(yīng),針對病毒的一些蛋白質(zhì)抗原或抗原表位的抗體與病毒結(jié)合后可以中和病毒的感染性。 病毒中和試驗可以在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動物上進(jìn)行，一般將抗體作稀釋，與一定量的病毒混合，然后檢測其在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動物上的殘余感染性。,,終點是以抑制細(xì)胞病變（細(xì)胞培養(yǎng)）或病毒復(fù)制（雞胚或動物）的抗體最高稀釋度來表示。 中和試驗具有很強(qiáng)的特異性，是檢測病毒和新分離病毒毒株的鑒定最經(jīng)典的方法，也可用于檢測病毒感染動物血清中的抗體。,,單向瓊脂擴(kuò)散試驗：指可溶性抗原在相應(yīng)抗體的瓊脂介質(zhì)中的擴(kuò)散，可定性、定量抗原,,雙向瓊脂擴(kuò)散試驗，是將抗原和相應(yīng)

3、抗體分別加入同一凝膠板內(nèi)的相鄰小孔中。兩者相互擴(kuò)散，當(dāng)擴(kuò)散到他們的濃度比例合適的部位相遇時，就會形成抗原抗體復(fù)合物的沉淀,二、實驗材料,法氏囊病毒瓊擴(kuò)抗原 法氏囊瓊擴(kuò)陽性血清 1%瓊脂 玻片、打孔器、加樣器、tip頭等,三、步驟,稱取1g瓊脂粉，加至100ml 8%高滲鹽水中，配制1%瓊脂凝膠； 稍冷至55 卻后澆板(4ml/塊)，注意載玻片應(yīng)放水平，瓊脂勿倒出板外； 待凝固后在瓊脂上打梅花孔(孔徑2mm,孔距3mm)，孔內(nèi)的瓊脂如未吸出則用注射器針頭挑出 封底：將玻片于酒精燈上烘烤背面（溫度不宜過高，以不燙手為宜），使瓊脂與玻片緊貼； 將抗體按二倍比稀釋法稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32 中間孔加抗原，周圍孔加倍比稀釋抗體，其中一個 孔加滴入生理鹽水作為對照（小心加樣，不要溢出） 置37 濕盒24-48h 結(jié)果觀察：在抗原抗體比例合適處，出現(xiàn)白色沉淀，以出現(xiàn)明顯的沉淀線的最高稀釋度為該抗體的效價,四、作業(yè),實驗報告（畫圖并解釋實驗結(jié)果） 瓊擴(kuò)試驗應(yīng)注意哪些事項？ 瓊擴(kuò)試驗有何意義？,