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1、1下列關于凝膠色譜法的原理及操作不正確的是 A是利用凝膠把分子大小不同的物質分離開的一種方法 B在洗脫過程中，大分子不能進入凝膠內部而最先流出，而小分子可以進入凝膠內部而流速緩慢，以致最后流出 C凝膠內部有很微細的多孔網(wǎng)狀結構，其孔隙大小與被分離的物質分子的大小無相應關系 D一般情況下，凝膠對要分離的物質沒有吸附作用，因此所有要分離的物質都應該被洗脫出來,解析：凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量大小分離蛋白質的有效方法，凝膠是由多糖類化合物構成的，其內部有很微細的多孔網(wǎng)狀結構，小分子蛋白質可以進入凝膠內部，路程較長，移動速度慢，而相對分子質量較大的蛋白質無法進入凝膠內部，路程較短，移動速度快，因此在

2、洗脫過程中分離。選用不同種凝膠，其網(wǎng)狀結構不同，孔隙大小不同，可分離的分子大小不同，二者是相關的，故C項不正確。,C,2關于電泳的說法不正確的是 A電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程 B帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動 C蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少 D用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，蛋白質的電泳遷移率完全取決于分子的大小,解析：蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能與各種蛋白質形成蛋白質SDS復合物，SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差異，使電泳遷移率完

3、全取決于分子的大小。,C,3下列操作正確的是 A分離紅細胞時采用低速長時間離心 B紅細胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可 C分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心 D透析時要用20 m mol/L的磷酸緩沖液，透析12 h,解析：分離紅細胞時，采用低速短時間離心，如500 r/min離心2 min；分離血紅蛋白溶液時，離心時間較長，如2000 r/min離心10 min。釋放血紅蛋白時，加入蒸餾水和40%體積的甲苯；透析時用物質的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液，以除去相對分子質量較小的雜質。,D,4有關緩沖溶液的說法不正確的是 A緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不

4、變 B緩沖溶液通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成 C調節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同pH范圍內使用的緩沖液 D生物體內進行的各種生物化學反應都是在一定的pH下進行,解析：緩沖溶液通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成。調節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同pH范圍內使用的緩沖液。在一定范圍內，緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不變，超過一定范圍，緩沖溶液就起不到這樣的作用了。,A,5.已知某樣品中存在甲、乙、丙、丁、戊五種蛋白質分子，分子大小、電荷的性質和數(shù)量情況如圖所示，下列有關蛋白質分離的敘述正確的是,A若將樣品以2000 r/min的速度離心10 min，分子戊

5、在沉淀中，則丙也一定在沉淀中 B若用凝膠色譜法分離樣品中的蛋白質，則分子甲移動速度最快 C將樣品裝入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋內，則乙也一定保留在袋內 D若用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品中的蛋白質分子，則分子甲和分子丁形成的電泳帶相距最遠,A,解析：分子丙的相對分子質量大于戊，所以，在離心時戊存在于沉淀中，丙也一定在沉淀中，A項正確。用凝膠色譜法分離蛋白質時，甲相對分子質量最小，容易進入凝膠內部，則移動速度最慢，B項錯誤。分子丙的相對分子質量大于乙，則丙保留在袋內，乙可能在袋外，C項錯誤。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的遷移速度完全取決于分子的大小，因此，分子甲與丙形成的電泳帶相距最

6、遠，D項錯誤。,6如圖表示血紅蛋白提取和分 離的部分實驗裝置，請據(jù)圖回 答下列問題。 (1)血紅蛋白是人和其他脊椎動物 紅細胞的主要組成成分，它在紅 細胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質具有 ________功能。 (2)甲裝置中，B是血紅蛋白溶液， 則A是______ __；乙裝置中，C溶液的作用是________ (3)甲裝置用于____ ____透析(粗分離)目的是____________ 用乙裝置分離蛋白質的方法叫____________，是根據(jù)____________ 分離蛋白質的有效方法。 (4)用乙裝置分離血紅蛋白時，待____________ 時，用試管收集流出液，每5 m

7、L收集一管，連續(xù)收集。,運輸,磷酸緩沖溶液,洗脫血紅蛋白,透析(粗分離),去除樣品中相對分子質量較小的雜質,凝膠色譜法,相對分子質量的大小,紅色的蛋白質接近色譜柱的底端,6紅細胞含有大量血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶O2和CO2，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白。請回答下列有關問題： (1)血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：________、粗分離、純化和________。 (2)實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。 加入檸檬酸鈉的目的是________

8、________________________________。 以上所述的過程即是樣品處理，它包括紅細胞的洗滌、______________、______________。,樣品處理,純度鑒定,防止血液凝固,血紅蛋白的釋放,分離血紅蛋白溶液,(3)收集的血紅蛋白溶液要進行粗分離，其方法是_____________________。 (4)然后通過____________將樣品進一步純化，最后經(jīng) 進行純度鑒定。樣品純化的目的是__________________________________________。 (5)電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及

9、 、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。,透析,凝膠色譜法,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去,分子本身的大小,7、凝膠色譜技術是一種快速而又簡單的分離技術，由于設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果，目前已經(jīng)被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫(yī)學等有關領域廣泛應用，不但應用于科學實驗研究，而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。據(jù)圖回答下列問題： (1)a、b均為蛋白質分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是__________，原因是___________________

10、_________________________________________________________________。,a,a相對分子質量較大，無法進入凝 膠內部的通道，只能在凝膠外部移 動，路程較短，移動速度較快,(2)自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部d位置相當于多孔板的結構可由__________________________替代。 (3)裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內不能有氣泡存在，原因是________________________________________________________________________ ___________________________________。 (4)洗脫用的液體應盡量與浸泡凝膠所用的液體__________(填“相同”或“不同”)，洗脫時，對洗脫液的流速要求是____________________。,尼龍網(wǎng)和尼龍紗,氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫 次序，降低分離效果,相同,保持穩(wěn)定,