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狂犬病實驗室診斷:重慶狂犬抗體檢測指南

上傳人:劉****2 文檔編號:187469486 上傳時間:2023-02-14 格式:DOCX 頁數(shù):12 大?。?4.36KB
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1、泓域健康/重慶狂犬抗體檢測 狂犬病實驗室診斷 一、 狂犬病實驗室診斷 病人發(fā)病后(死亡前)可采集其唾液(間隔3-6小時,至少采集3份)、腦脊液、血清及頸后帶毛囊的小塊皮膚;病人死后最好采集其腦組織標本(小腦和腦干)進行實驗室檢測。 直接免疫熒光法是狂犬病診斷的金標準,可以快速、敏感、特異地檢測人和動物腦組織中的病毒抗原。臨床病例活體組織標本(如頸后部皮膚毛囊)亦可進行DFA檢測。直接快速免疫組化法及酶聯(lián)免疫吸附測定法亦可特異檢測狂犬病病毒抗原。 病毒核酸檢測可用于早期診斷,以逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測體液(唾液、血清等)和腦組織等標本,但需要嚴格的質(zhì)量控制以保證結(jié)果的準確性。腦組織及唾液等病

2、毒含量高的樣本還可進行病毒分離。細胞培養(yǎng)分離所需時間(1-2天)遠少于小鼠顱內(nèi)接種分離法所需時間(10-21天),且前者的生物安全風(fēng)險遠小于后者。 未接種過疫苗的患者,發(fā)病早期幾乎沒有中和抗體產(chǎn)生,到發(fā)病晚期(通常在臨床癥狀出現(xiàn)后7-8天),病毒在腦內(nèi)大量增殖后突破血腦屏障進入血液,刺激機體產(chǎn)生低水平的中和抗體。通過病毒中和試驗檢測病人血清或腦脊液中的中和抗體,可作為狂犬病診斷的依據(jù)之一。 世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的抗狂犬病病毒中和抗體標準檢測方法包括快速熒光灶抑制試驗(RFFIT)和小鼠腦內(nèi)中和試驗(MNT)。由于RFFIT法無需使用小鼠,所用時間短(24小時),目前已被廣泛采用。RF

3、FIT方法也是我國現(xiàn)行藥典規(guī)定的檢測狂犬病病毒中和抗體的標準方法之一。此外,常用的狂犬病病毒中和抗體檢測方法還有熒光抗體病毒中和試驗(FAVNT)。用ELISA法測定的抗狂犬病病毒糖蛋白抗體滴度與用病毒中和試驗測定的結(jié)果有一定的相關(guān)性(約80%符合率),但相應(yīng)試劑盒尚未普及。 此外,還可以通過檢測中和抗體,監(jiān)測暴露前抗體背景及暴露后疫苗注射的免疫效果。WHO狂犬病專家咨詢委員會認為:中和抗體水平等于或高于0.5IU/ml時,接種者才具備了有效的保護能力;如果發(fā)現(xiàn)中和抗體水平低于0.5IU/ml,應(yīng)進行加強免疫,至達到有效保護水平為止。 二、 常用狂犬疫苗對比 狂犬病是由狂犬病毒引起的人獸

4、共患急性傳染病,多見于犬、狼、貓等食肉動物,人多因被病獸咬傷而感染。人患狂犬病后的病死率幾近100%,目前對于狂犬病尚無有效治療手段,因此暴露后接種狂犬疫苗是預(yù)防狂犬病的關(guān)鍵。 我國常用狂犬疫苗可分為動物細胞狂犬疫苗和人源細胞狂疫苗兩大類,其中動物細胞狂犬疫苗常用地鼠腎、雞胚、非洲綠猴腎(Vero)細胞,人源細胞狂犬疫苗則使用人二倍體細胞。 三、 當前狂犬疫苗發(fā)展面臨的問題與困境 疫苗的質(zhì)量直接關(guān)系到國家公共衛(wèi)生健康與安全,下一代人類疫苗通常是為了減少不良事件或提高現(xiàn)有疫苗的功效而開發(fā)的。目前上市的幾款狂犬疫苗在預(yù)防狂犬病方面已經(jīng)取得了巨大的成功,但仍然存在一定的局限性,因此仍然需要利用

5、現(xiàn)代生物技術(shù)進一步改進完善。 疫苗本身開發(fā)模式具有特殊性:研發(fā)即生產(chǎn)。車間產(chǎn)能的持續(xù)迭代背后存在大量時間成本、審批成本,產(chǎn)量決定了臨床規(guī)模及商業(yè)化規(guī)模。 血清問題:無血清培養(yǎng)是狂犬疫苗研制中世界性的技術(shù)難題,疫苗生產(chǎn)均使用動物來源的牛血清和豬胰酶,產(chǎn)品存在外源病毒因子污染風(fēng)險,給后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn)帶來挑戰(zhàn)。降血清至無血清是國內(nèi)疫苗生產(chǎn)企業(yè)共同的研究趨勢。 二倍體狂犬疫苗安全性強,為狂犬疫苗未來主要發(fā)展趨勢之一。但存在成本高、制備困難、產(chǎn)量低、大規(guī)模培養(yǎng)難度較大等技術(shù)問題。 免疫程序的選擇:世衛(wèi)組織已經(jīng)批準了不同的方案,例如兩點皮內(nèi)注射(0,3和7天);單點肌肉注射(0,3,7天和第14-28

6、天之間)和3周肌肉注射(0天x2,7天x1和21天x1)疫苗接種。目前國內(nèi)狂犬病疫苗接種程序所采用的是肌內(nèi)接種,即五針法(0,3,7,14,28天)和2-1-1法(0天x2,7天x1和21天x1)。選擇最佳的免疫接種程序可有效降低成本和劑量。 中國的犬數(shù)超過1億只,其中大部分在農(nóng)村散養(yǎng)。消除狂犬病必須免疫動物,而與歐洲等發(fā)達國家的動物普遍免疫不同,中國接種疫苗的動物比例較少。因此,人用狂犬病疫苗屬于剛性需求。隨著人均可支配收入的增加,國內(nèi)民眾將愈發(fā)重視對疾病的預(yù)防和管理。隨著中國人均可支配收入快速增長,人們付費接種疫苗的意愿和能力也將隨之提高。此外,教育程度的提升會提高狂犬病疫苗接種率,這將

7、促進人用狂犬病疫苗的銷量增長。 未來隨著國內(nèi)企業(yè)在疫苗領(lǐng)域研發(fā)投入的加大,優(yōu)質(zhì)的技術(shù)+充足的產(chǎn)能,將助力患者的可及性持續(xù)提升,推動狂犬疫苗長期可持續(xù)發(fā)展。 狂犬病是由狂犬病毒引起的人獸共患傳染病。幾乎所有溫血動物都對狂犬病毒易感,其中犬類是主要宿主??袢≈饕ㄟ^動物咬傷后,唾液中的狂犬病毒經(jīng)破損皮膚侵入體內(nèi)傳播??袢∈瞧駷橹谷祟惒∷缆首罡叩募毙詡魅静?,一旦發(fā)病死亡率接近100%,即使治愈也會留下嚴重后遺癥。目前對狂犬病缺乏有效的治療手段,因此使用狂犬疫苗預(yù)防是關(guān)鍵。 隨著我國狂犬病預(yù)防的加強,發(fā)病人數(shù)及病死人數(shù)逐年下降。從發(fā)病病例來看,自2007年起,我國狂犬病發(fā)病病例逐步下降,目

8、前,據(jù)國家衛(wèi)健委數(shù)據(jù),2021年我國狂犬病發(fā)病病例降至157例。 四、 狂犬疫苗行業(yè)前景展望 由于人二倍體疫苗產(chǎn)量低、大體積生物反應(yīng)器培養(yǎng)人二倍體細胞難度較大等因素,二代狂犬疫苗仍為國內(nèi)使用的主流狂犬疫苗。不過,康華生物正在進行產(chǎn)能擴建,隨著三代狂犬疫苗獲批企業(yè)數(shù)量的增加以及產(chǎn)能的不斷釋放,三代疫苗將逐步替代二代疫苗。 中國疾病預(yù)防控制中心報告顯示,我國狂犬病疫情主要分布在人口稠密的華中、華南、西南、華東地區(qū)。人群分布上呈三多特征:農(nóng)村地區(qū)病例較多、15歲以下兒童和50歲以上人群發(fā)病較多。中國的犬數(shù)超過1億只,其中大部分在農(nóng)村散養(yǎng)。消除狂犬病必須免疫動物,而與歐洲等發(fā)達國家的動物普遍免疫

9、不同,中國接種疫苗的動物比例較少。因此,人用狂犬病疫苗屬于剛性需求。 狂犬疫苗是我國主要出口的疫苗之一,預(yù)計到2023年,中國狂犬病疫苗主要出口國泰國、埃及、孟加拉國和印度的市場將達6.8億美元,年均復(fù)合增長率為22.2%。僅遼寧成大一家,2019年狂犬疫苗的出口銷售額就達到2538.7萬美元,出口份額占比超過30%。 業(yè)內(nèi)人士分析,由于公眾對狂犬病疫苗的接種意識仍然相對淡薄,一些國家和地區(qū)正在不斷推進狂犬病疫苗接種,受政策利好影響,未來市場的接種率有可能提高,這也將為中國疫苗企業(yè)拓展海外市場提供機會。此外,由于狂犬病高發(fā)市場嚴重缺乏人用狂犬病疫苗生產(chǎn)商,中國狂犬病疫苗生產(chǎn)商有機會抓住該等

10、市場內(nèi)當?shù)毓?yīng)商未獲滿足的日益增長的需求,從而帶動出口市場的增長。 一旦出現(xiàn)臨床癥狀,病死率幾乎為100%!中國每年都有數(shù)百人因狂犬病而死亡,消除狂犬病仍存在一定的現(xiàn)實問題,包含傳染源數(shù)量多、分布廣、動物免疫率低等。農(nóng)村地區(qū)尤其是貧困地區(qū)狂犬病流行造成的影響更為嚴重,面臨群眾文明養(yǎng)犬意識淡薄,動物狂犬病監(jiān)測能力不足等困難與挑戰(zhàn)。 日前,在2021年中國小動物醫(yī)學(xué)大會暨第一屆貓病大會的康華動??袢≌搲?,來自全國各地的小動物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)<?、學(xué)者相聚一堂,共同探討未來行業(yè)發(fā)展。與此同時,啟動中國寵物狂犬病免疫現(xiàn)狀調(diào)研項目,旨在了解狂犬病疫苗現(xiàn)狀及發(fā)展空間、關(guān)注寵主使用疫苗的喜好度、洞察未來市場

11、發(fā)展趨勢。 狂犬病是一種嚴重危害公共健康的人畜共患傳染病,也是世界上病死率最高的動物傳染病。WHO數(shù)據(jù)顯示,狂犬病在全球150多個國家和地區(qū)流行。據(jù)估計,每年狂犬病會導(dǎo)致全球約5.9萬人死亡,相當于每10分鐘世界上就有1人死于狂犬病。 2015年,世界衛(wèi)生組織(WHO)與聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)、世界動物衛(wèi)生組織(OIE)和全球狂犬病控制聯(lián)盟(GARC)一起,在瑞士日內(nèi)瓦召開的全球狂犬病會議上,提出2030年前在全球消除犬引起的人類狂犬病死亡(簡稱Zeroby30)戰(zhàn)略目標,此計劃以國家為中心,建立聯(lián)合抗擊狂犬病合作平臺。 五、 多家企業(yè)先后布局狂犬病疫苗的研發(fā)與生產(chǎn) 基于產(chǎn)量、

12、研發(fā)進展、價格等多重因素,Vero細胞狂犬病疫苗與人二倍體狂犬疫苗分別具有差異化優(yōu)勢,將推動其未來在狂犬疫苗市場的市占率不斷提升。隨著居民健康意識和支付能力的持續(xù)提升,上述兩種研究路線將成為下一代狂犬疫苗的主流方向。 為降低外源病毒帶來的疫苗安全風(fēng)險,無血清培養(yǎng)基是繼天然培養(yǎng)基、有血清合成培養(yǎng)基之后研制的一類既能滿足細胞在體外較長時間生長繁殖又無需添加血清避免外源物質(zhì)污染的合成培養(yǎng)基,是目前及未來生物工程領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)技術(shù)可適當降低生產(chǎn)成本,增加目的產(chǎn)物表達并簡化分離純化步驟,避免外源病毒污染。 目前,我國我國狂犬病疫苗在研企業(yè)已完成III期臨床試驗的企業(yè)共有4家,正開展I

13、II期臨床試驗的企業(yè)共有14家,正開展I期臨床試驗的企業(yè)共有2家。其中,上海榮盛生物藥業(yè)股份有限公司、天津津斯特疫苗有限責任公司及成都柏奧特克生物科技股份有限公司,為國內(nèi)僅有的三家針對無血清Vero細胞狂犬病疫苗率先推進至三期臨床試驗的企業(yè)。 六、 狂犬病防制措施 1、免疫接種 被狂犬咬傷的人或動物應(yīng)對傷口進行徹底消毒,并及時到專業(yè)機構(gòu)注射狂犬病免疫血清或狂犬病疫苗。目前世界上,狂犬病尚無有效的治療手段,做好狂犬疫苗的緊急免疫接種是防制本病發(fā)生最行之有效的重要措施。即使做過狂犬疫苗預(yù)防免疫接種的人或動物一旦被咬傷或抓傷,安全起見,仍然要再次接種狂犬疫苗,這樣會形成更快、更強大的保護力。

14、 2、疫病監(jiān)測 可用RT-PCR或酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測方法對老疫區(qū)和城市重點區(qū)域的犬、貓進行定期監(jiān)測。對病毒檢測結(jié)果為陽性的犬、貓要采取果斷措施,及時予以捕殺,并對飼養(yǎng)場所進行全面消毒。 3、科普宣傳 要充分利用各種宣傳工具,如報紙、電視廣播、張貼掛圖等,大力宣傳狂犬病的危害性和預(yù)防知識,尤其要加強農(nóng)村地區(qū)狂犬病防制宣傳工作力度,提高全社會對狂犬病防制工作的重視,提高公民被犬、貓咬傷、抓傷后主動及時就醫(yī)的自覺性,提高人民群眾的自我防護意識。 4、加強管理 相關(guān)職能部門要做好犬只管理工作,特別是做好城區(qū)寵物犬的管理工作,動員群眾養(yǎng)犬要注射疫苗,遛狗要拴繩。發(fā)現(xiàn)狂犬要立即撲

15、殺,尸體焚化或深埋。 七、 國內(nèi)狂犬疫苗市場持續(xù)增長 近年來,隨著我國狂犬病預(yù)防教育普及、人用狂犬病疫苗接種數(shù)量增加,我國狂犬病預(yù)防工作取得了重大進展,在控制狂犬病發(fā)病率方面起到了重要作用。2018年,中國人用狂犬疫苗市場規(guī)模達到28.4億元,預(yù)計2022年將達到38.7億元的市場規(guī)模。 Vero細胞人用狂犬病疫苗是狂犬病疫苗市場的主導(dǎo)者,占據(jù)75.0%的市場份額;人二倍體細胞培養(yǎng)狂犬病疫苗和原代細胞培養(yǎng)狂犬病疫苗(包括地鼠腎細胞人用狂犬病疫苗和雞胚細胞人用狂犬病疫苗)分別占據(jù)18.2%和6.8%的市場份額。 中國疾病預(yù)防控制中心報告顯示,我國狂犬病疫情主要分布在人口稠密的華中、華南、

16、西南、華東地區(qū)。人群分布上呈三多特征:農(nóng)村地區(qū)病例較多、15歲以下兒童和50歲以上人群發(fā)病較多。中國的犬數(shù)超過1億只,其中大部分在農(nóng)村散養(yǎng)。消除狂犬病必須免疫動物,而與歐洲等發(fā)達國家的動物普遍免疫不同,中國接種疫苗的動物比例較少。因此,人用狂犬病疫苗屬于剛性需求。隨著人均可支配收入的增加,國內(nèi)民眾將愈發(fā)重視對疾病的預(yù)防和管理。隨著中國人均可支配收入快速增長,人們付費接種疫苗的意愿和能力也將隨之提高。此外,教育程度的提升會提高狂犬病疫苗接種率,這將促進人用狂犬病疫苗的銷量增長。 八、 中國RABV的動物系統(tǒng)發(fā)育與進化分析 科研人員從177個陽性腦組織樣本中總共擴增到了108個完整的N基因。在

17、這些樣本中,科研人員分析并選擇了代表不同年份,動物種類,疫情程度和地點的78種,連同來自中國以及鄰國和其他國家的222種參考序列進行系統(tǒng)發(fā)育特征分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),中國動物RABV分布在4個主要的進化枝中:亞洲(Asian),世界性(Cosmospolitan),北極相關(guān)(Arctic-related)和印度次大陸(IndianSubcontinent),以及這些進化分枝中不同的子分枝。其中,亞洲進化枝是最普遍的進化枝,廣泛分布于中國和東南亞國家,具有豐富的遺傳多樣性,主要通過狗傳播。通過查閱文獻研究人員發(fā)現(xiàn),雪貂獾(ferrtebadger)RABV具有豐富的遺傳多樣性,但這僅在中國有報道。印度

18、次大陸的進化枝在中國還沒有被發(fā)現(xiàn),直到2017年在靠近尼泊爾的西藏邊境地區(qū)發(fā)現(xiàn)了由一只當?shù)亓骼斯芬娜祟惒±?,仍然是迄今為止在中國確認的唯一的印度次大陸分支RABV。 緊接著,研究人員利用對于不同亞類的時間排序,重新定位了1969-2018年期間分離的具有代表性的1,118個中國毒株。其中55個中國RABV序列在1969年(最早提交)至2003年分離。自2004年開始進行官方狂犬病監(jiān)測后,提交給GenBank的基因序列表明,大多數(shù)狂犬病爆發(fā)是由亞洲毒株(93.3%)引起的,其他3種毒株的參與有限。在亞洲類群中,SEA1亞類群在中國狂犬病毒株中占主導(dǎo)地位(70.1%),其次是SEA2(16.

19、7%)。 此外,緬甸、泰國、老撾和越南的許多SEA3毒株在遺傳上接近中國云南和廣西流通的一些毒株,這表明SEA3毒株可能由中國傳播至接壤的國家和地區(qū)。在中國與哈薩克斯坦、俄羅斯、蒙古和韓國之間的邊境地區(qū)也發(fā)現(xiàn)了同樣的傳播跡象。這種相似性令人擔憂,因為中國周圍有14個毗鄰的國家,所有這些國家都有狂犬病流行,在這些國家中,人們尚未對狂犬病的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育特征進行充分研究。 在中國,狂犬病是一個重大的公共衛(wèi)生問題,2015-2018年更是導(dǎo)致每年幾百人死亡。超過95%的人類狂犬病病例來源于患狂犬病的狗。相比之下,中國報告的動物狂犬病病例數(shù)卻遠低于人類狂犬病病例數(shù);僅有幾個省、自治區(qū)或直轄市的動物狂犬病病例報告給國家獸醫(yī)當局,且報告中國動物傳染病月度信息的唯一官方雜志是《獸醫(yī)通報(VeterinaryBulletin)》。即便如此,這類零星的研究仍表明野生動物狂犬病在赤狐(VulpesVulpes),貉(Nyctereutesprocyonoides)和鼬獾中都有增加。

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