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1、 中 國 藥 典 2015版微 生 物 新 增 指 導(dǎo) 原 則 主 要 內(nèi) 容一、概述二、微生物新增三個指導(dǎo)原則三、小結(jié) 一 、 概 述樣品檢驗結(jié)果判斷 一 、 概 述檢查標(biāo)準(zhǔn)檢測方法結(jié)果判斷1、新版變化2、標(biāo)準(zhǔn)比較1、方法變化2、方法驗證1、計數(shù)結(jié)果2、控制菌檢查結(jié)果相互關(guān)聯(lián)，相互影響，不可分割 一 、 概 述 1000以下藥典各論中各種檢查法的說明 -制劑通則、鑒別試驗、色譜光譜法 10 xx -1101 無菌檢查法（二部 H） -1105/6/7 計數(shù)法/控制菌/限度標(biāo)準(zhǔn)（二部 J） -1121抑菌效力檢查法（二部 N） -其它：異常毒性、熱原、抗生素效價測定 20 xx 中藥 30 x

2、x 生物制品相關(guān)測定/實驗動物 一 、 概 述 80 xx 試劑和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 90 xx 指導(dǎo)原則（二部附錄 ） -9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則 -9202 非無菌藥品微生物限度檢查法指導(dǎo)原則 -9203 藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 -9204 微生物鑒定指導(dǎo)原則（new） -9205 藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則（new） -9206 無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證指導(dǎo)原則（new） 二 、 9204微 生 物 鑒 定 指 導(dǎo) 原 則本指導(dǎo)原則為非無菌產(chǎn)品微生物限度控制菌檢查中疑似菌的鑒定， 以及藥物原料、輔料、制藥用水、中間體、終產(chǎn)品和環(huán)境中檢出微生物的鑒定提供指導(dǎo)。

3、當(dāng)微生物的鑒定結(jié)果有爭議時， 以 伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊 ( Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)現(xiàn)行版的鑒定結(jié)果為準(zhǔn)。 微 生 物 的 鑒 定 程 序微生物鑒定的基本程序包括分離純化和鑒定，鑒定時，一般先將待檢菌進(jìn)行初步的分類。 1、待檢菌的分離純化 微生物鑒定的第一步是待檢培養(yǎng)物的分離純化。 2、初篩試驗 3、表型微生物鑒定 4、基因型微生物鑒定 微生物鑒定方法的確認(rèn)系統(tǒng)發(fā)育的相關(guān)內(nèi)容溯源分析 三 、 9205 藥 品 潔 凈 實 驗 室 微 生 物 監(jiān) 測 和 控制 指 導(dǎo) 原 則本指導(dǎo)原則是用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗用的潔凈室等受控環(huán)境微生物污

4、染情況的監(jiān)測和控制。藥品潔凈實驗室的潔凈級別按空氣懸浮粒子大小和數(shù)量的不同參考現(xiàn)行 “藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”分為 A、B、C、D 4 個級別。 人員要求、初次使用的潔凈實驗室參數(shù)確認(rèn)、微生物監(jiān)測方法、監(jiān)測頻次及監(jiān)測項目、監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)、警戒限和糾偏限、數(shù)據(jù)分析及偏差處理、微生物鑒定和微生物控制。 人 員從事藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制的人員應(yīng)符合現(xiàn)行中國藥典通則中“藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則（通則 9203）”的相關(guān)要求。 (9203)藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則（1）人員專業(yè)背景 應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。（2）人員培訓(xùn)-崗位和職責(zé)培訓(xùn)-設(shè)備操作培訓(xùn)-檢驗技術(shù)培訓(xùn)（無菌操

5、作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種、傳代和保藏、微生物檢查方法和鑒定基本技術(shù)等）-生物安全培訓(xùn)-繼續(xù)教育培訓(xùn) （3）人員技能檢 驗 人 員 ： 必 須 熟 悉 相 關(guān) 檢 測 方 法 、 程 序 、 檢 測 目 的和 結(jié) 果 評 價 。管 理 者 ： 專 業(yè) 技 能 和 經(jīng) 驗 水 平 應(yīng) 與 他 們 的 職 責(zé) 范 圍 相符 ， 如 ： 管 理 技 能 、 實 驗 室 安 全 、 試 驗 安 排 、 預(yù) 算 、實 驗 研 究 、 實 驗 結(jié) 果 的 評 估 和 數(shù) 據(jù) 偏 差 的 調(diào) 查 、 技 術(shù)報 告 書 寫 等 。實 驗 室 ： 應(yīng) 通 過 參 加 內(nèi) 部 質(zhì) 量

6、 控 制 、 能 力 驗 證 或 使 用標(biāo) 準(zhǔn) 菌 株 等 方 法 客 觀 評 估 檢 驗 人 員 的 能 力 ， 必 要 時 對其 進(jìn) 行 再 培 訓(xùn) 并 重 新 評 估 。 當(dāng) 使 用 一 種 非 經(jīng) 常 使 用 的方 法 或 技 術(shù) 時 ， 有 必 要 在 檢 測 前 確 認(rèn) 微 生 物 檢 測 人 員的 操 作 技 能 。（ 4） 人 員 檔 案所 有 人 員 的 培 訓(xùn) 、 考 核 內(nèi) 容 和 結(jié) 果 均 應(yīng) 記 錄 歸 檔 。 確 認(rèn)確認(rèn)目的：確保操作順暢，保證設(shè)備系統(tǒng)的運行能力和可靠性。確認(rèn)時間：初次使用的潔凈實驗室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，物理參數(shù)的測試應(yīng)當(dāng)在微生物監(jiān)測方案實施之前。確認(rèn)

7、參數(shù)：物理參數(shù)、空氣懸浮粒子和微生物 -物理參數(shù)：高效空氣過濾器完整性，氣流組織、空氣流速（平均風(fēng)速） ，換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對濕度等。-微生物：浮游菌、沉降菌、表面微生物測試條件：模擬正常檢測條件 物理參數(shù)測試方法參照潔凈室施工及驗收規(guī)范的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)（GB50591-2010）中附錄方法 -高效空氣過濾器完整性： 附錄 D3 高效空氣過濾器現(xiàn)場掃描檢漏方法 -氣流組織：附錄 E12 氣流的檢測 -平均風(fēng)速：附錄 E1 風(fēng)量和風(fēng)速的檢測 -壓差：附錄 E2 靜壓差的檢測 -溫度、相對濕度：附錄 E5 溫濕度的檢測 空氣懸浮粒子和微生物的確認(rèn)： 見“監(jiān)測”項下。物理參數(shù)建議標(biāo)準(zhǔn)：參照GMP

8、(2010)、FDA(ISPE，換氣次數(shù))最長監(jiān)測周期：參照GB,詳見表1 監(jiān) 測1、監(jiān)測內(nèi)容 空氣懸浮粒子數(shù)（非生物活性） 微生物（有生物活性） -環(huán)境浮游菌 -環(huán)境沉降菌 -表面微生物（關(guān)鍵檢測臺面、人員操作服及5指手套等） 2、監(jiān)測方法： 懸浮粒子： 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法 （GB/T16292-2010） 浮游菌： 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法(GB/T16293-2010) 沉降菌： 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法(GB/T16294-2010) 2.監(jiān)測方法表面微生物（環(huán)境、設(shè)備和人員）接觸碟法：將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對規(guī)則表面或平面進(jìn)行取樣，

9、 然后置合適的溫度下培養(yǎng)一定時間并計數(shù)，每碟取樣面積約為 25 cm2 ，微生物計數(shù)結(jié)果以 cfu/碟報告；擦拭法：用于不規(guī)則表面的微生物監(jiān)測，特別是設(shè)備的不規(guī)則表面。擦拭法是采用合適尺寸的無菌模板或標(biāo)尺確定擦拭的面積，取樣后，將拭子置合適的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計數(shù)，每個拭子取樣面積為約 25 cm2 ，微生物計數(shù)結(jié)果以 cfu/拭子報告。表面微生物測定應(yīng)在實驗結(jié)束后進(jìn)行。 培養(yǎng)基：一般采用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA） ， 必要時可加入適宜的中和劑 ，當(dāng)監(jiān)測結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時， 可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)。 培養(yǎng)時間： ChP(2015)

10、GB/T16293-2010 TSA: 3-5天 不少于2天 SDA： 5-7天 不少于5天 3.監(jiān)測頻次及監(jiān)測項目 參考GMP（2010）及GB50073-2013，見表2 檢測頻次的調(diào)整 如果如果出現(xiàn)連續(xù)超過糾偏限和警戒限、 關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、 空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修、 消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加、潔凈室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動、引起微生物污染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時應(yīng)考慮修改監(jiān)測頻次。 4.監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn) 參考GMP（2010），見表3、4 5.警戒限和糾偏限（參考FDA ，見表5） 藥品潔凈實驗室應(yīng)根據(jù)歷史數(shù)據(jù)，結(jié)合不同潔凈區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)，采用

11、適宜的方法，制定適當(dāng)?shù)奈⑸锉O(jiān)測警戒限和糾偏限。限度確定后，應(yīng)定期回顧評價，如歷史數(shù)據(jù)表明環(huán)境有所改善，限度應(yīng)作出相應(yīng)調(diào)整以反映環(huán)境實際質(zhì)量狀況。表 5 列出了各級別潔凈環(huán)境微生物糾偏限參考值。 6.數(shù)據(jù)分析及偏差處理 參考USP(35) (1)數(shù)據(jù)分析 應(yīng)當(dāng)對日常環(huán)境監(jiān)測的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和回顧， 通過收集的數(shù)據(jù)和趨勢分析，總結(jié)和評估潔凈實驗室是否受控，評估警戒限和糾偏限是否適合，評估所采取的糾偏措施是否合適。 應(yīng)當(dāng)正確評估微生物污染，不僅僅關(guān)注微生物數(shù)量，更應(yīng)關(guān)注微生物污染檢出的頻率， 往往在一個采樣周期內(nèi)同一環(huán)境中多點發(fā)現(xiàn)微生物污染，可能預(yù)示著風(fēng)險增加，應(yīng)仔細(xì)評估。幾個位點同時有污染的現(xiàn)象也

12、可能由不規(guī)范的采樣操作引起， 所以在得出環(huán)境可能失控的結(jié)論之前，應(yīng)仔細(xì)回顧采樣操作過程。在污染后的幾天對環(huán)境進(jìn)行重新采樣是沒有意義的， 因為采樣過程不具有可重復(fù)性。 （2）偏差處理 當(dāng)微生物監(jiān)測結(jié)果超出糾偏限度時，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行報告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對糾正措施的有效性進(jìn)行評估。 7.微生物鑒定 建議對受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定， 微生物菌群信息有助于預(yù)期常見菌群， 并有助于評估清潔/消毒規(guī)程、方法、清潔/消毒劑及微生物監(jiān)測方法的有效性，尤其當(dāng)超過監(jiān)測限度時，微生物鑒定信息有助于污染源的調(diào)查。關(guān)鍵區(qū)域分離到的菌落應(yīng)先于非關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行鑒定。 微生物鑒定參

13、照微生物鑒定指導(dǎo)原則“通則 9204微生物鑒定指導(dǎo)原則”進(jìn)行。 微 生 物 控 制 微生物控制手段： 為了保證藥品潔凈實驗室環(huán)境維持適當(dāng)?shù)乃剑?并處于受控狀態(tài)， 除保持空調(diào)系統(tǒng)的良好運行狀態(tài)，對設(shè)施進(jìn)行良好維護(hù)，潔凈室內(nèi)人員應(yīng)嚴(yán)格遵守良好的行為規(guī)范，并定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)控。除保持空調(diào)系統(tǒng)的良好運行狀態(tài)，對設(shè)施進(jìn)行良好維護(hù)，潔凈室內(nèi)人員應(yīng)嚴(yán)格遵守良好的行為規(guī)范，并定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)控。 消毒劑和清潔劑的要求： 應(yīng)當(dāng)監(jiān)測消毒劑和清潔劑的微生物污染狀況， 并在規(guī)定的有效期內(nèi)使用，A/B 級潔凈區(qū)應(yīng)當(dāng)使用無菌的或經(jīng)無菌處理的消毒劑和清潔劑。 所采用的化學(xué)消毒劑應(yīng)經(jīng)過驗證或有證據(jù)表明其消毒效果， 其種類應(yīng)當(dāng)多

14、于一種， 并定期進(jìn)行更換以防止產(chǎn)生耐受菌株。不得用紫外線消毒代替化學(xué)消毒。必要時，可采用熏蒸等適宜的方法降低潔凈區(qū)的衛(wèi)生死角的微生物污染， 并對熏蒸劑的殘留水平進(jìn)行驗證。 各 潔 凈 級 別 的 轉(zhuǎn) 換 （ 約 相 當(dāng) ）GMP(2010) GB(50457-2008) GB(50073-2013)A級（動態(tài)）100級ISO 5級B級（靜態(tài)）B級（動態(tài)）100級10000級ISO 5級ISO 7級C級（靜態(tài)）C級（動態(tài)）10000級100000級ISO 7級ISO 8級D級（靜態(tài)）100000級ISO 8級 GB50457-2008 醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計規(guī)范GB50073-2013潔凈廠房設(shè)計

15、規(guī)范 四 、 9206無 菌 檢 查 用 隔 離 系 統(tǒng) 驗 證 指 導(dǎo) 原則 新軟艙體無菌檢查隔離器 無 菌 檢 查 用 隔 離 器 的 結(jié) 構(gòu) 1. 空氣處理系統(tǒng) 2. 傳遞接口及傳遞門 3.滅菌設(shè)備 4. 配套設(shè)備與輔助設(shè)施 汽化過氧化氫發(fā)生器無菌傳遞艙 隔 離 器 安 裝 位 置 的 選 擇無菌檢查用隔離器安裝環(huán)境的潔凈度要求 建議 不低于我國現(xiàn)行GMP 中 D 級空氣潔凈度要求，安裝隔離器的房間應(yīng)限制無關(guān)人員出入。 應(yīng)保證隔離器安裝地點周圍有足夠的空間， 以便于隔離器的移動、物品的輸送和正常維護(hù)。 隔 離 系 統(tǒng) 驗 證 1 操作驗證 2 隔離器完整性驗證 3 滅菌驗證 4 滅菌循環(huán)

16、驗證 5. 隔離器內(nèi)部潔凈度驗證 6. 儀器儀表的驗證 隔 離 器 的 應(yīng) 用 1. 包裝完整性驗證 2. 隔離器內(nèi)部環(huán)境的無菌維持 3. 無菌檢驗結(jié)果的解釋 4. 安全與培訓(xùn) 1101 無 菌 檢 查 法細(xì)菌培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基霉菌培養(yǎng)基：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基檢驗數(shù)量：除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表1規(guī)定；上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗按表2規(guī)定。表1、表2中最少檢驗數(shù)量不包括陽性對照試驗的供試品用量。 表2 上市抽驗樣品的最少檢驗數(shù)量供試品供試品最少檢驗數(shù)量（瓶或支）液體制劑固體制劑血液制品 V50ml V50ml 醫(yī)療器具 10 10 6 2 10注：1.若供試品每個容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基

17、，那么表中的最少檢驗數(shù)量應(yīng)增加相應(yīng)倍數(shù)。 2.抗生素粉劑（5g）及抗生素原料藥（5g）的最少檢驗數(shù)量為6瓶（或支）。桶裝固體原料的最少檢驗數(shù)量為4個包裝。 表3 供試品的最少檢驗量供試品供試品裝量每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量液體制劑1ml1mlV40ml40ml100ml全量半量，但不得少于1ml20ml10%但不少于20ml固體制劑M50mg50mgM300mg300mgM5gM5g全量半量150mg500mg半量（生物制品）生物制品的原液及半成品半量 醫(yī)療器具外科用敷料棉花及紗布縫合線，一次性醫(yī)用材料帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器具（如輸液袋）其他醫(yī)療器具取100mg或1cm3cm整個材料二分之一內(nèi)表面積整個器具（切碎或拆散開）