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鄰二氮雜菲分光光度計測定鐵

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1、單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,2015/12/15,#,單擊此處編輯母版標題樣式,主講人:王留勇,鄰二氮雜菲分光光度法測定鐵,1.,通過分光光度法測定鐵的條件實驗,學會如何選擇分光光度分析的條件。,2.,掌握鄰二氮雜菲分光光度法測定鐵的原理和方法。,3.,了解,7220,型分光光度計,的構造和使用方法。,一、實驗目的,鄰,二氮雜菲是測定微量鐵的一種較好的試劑。在,pH 2-9,的范圍,內(nèi),與,鄰二氮雜菲反應生成極穩(wěn)定的橘紅色配合,物,其,反應式,如下:,該,配合物的最大吸收峰在,510,nm,處,,摩爾,吸收系數(shù),二、實驗原理,與,鄰二氮雜,菲能生成,3:1,的,淡

2、藍色配合,物,因此,在顯色之前應預先,用鹽酸羥,氨,將,離子還原成 離子,其反應式如下,:,二價鐵離子與鄰二氮雜菲在,pH,為,2-9,的范圍內(nèi)都能顯色,但酸度高,反應較慢,酸度太低,二價鐵水解。所以一般在,pH,在,5-6,的微酸性溶液中顯色較為適宜。,本,測定方法不僅靈敏度,高、穩(wěn)定性,好,而且選擇性,高。,實驗原理,分光光度法測定物質(zhì)含量時,通常要經(jīng)過取樣、顯色,及測量,等步驟。為了使測定有較高的靈敏度和,準確度,必須,選擇適宜的顯色反應的條件和,測量吸光度,的條件。,通常所,研究的顯色反應條件有溶液的,酸度、顯色劑用量、顯,色,時間、溫度、溶劑,以及共存離子干擾,及其消除,方法等。,測

3、量吸光度,的,條件主要,是測量,波長、吸光度,范圍和參比溶液的選擇。,實驗原理,100,ug/mL,的鐵,標準溶液 準確,稱取,0.864,g,分析純,置于,一燒杯,中,以,30,ml,2,mol/LHCL,溶液,溶解,后轉入,1000,mL,容量瓶中,以,水稀釋至,刻度,搖,勻,。,10,ug/mL,的,鐵,標準溶液,由,100,ug/mL,的,鐵標準溶液用水準確稀釋,10,倍而成,。,100,g/mL,鹽酸羥胺溶液(因,其不穩(wěn)定,需臨用時,配制),1,g/mL,鄰,二氮雜菲,溶液,1,mol/L,溶液,2,mol/L HCL,溶液,7220,型分光光度計,50,mL,容量瓶,8,只,,,1

4、00,mL,容量瓶,1,只,吸量管,1mL 1,支、,2,mL 1,支、,5,mL,4,支。,三、實驗儀器和試劑,1.,條件實驗,:,吸收,曲線,的測繪:準確,吸取,10,ug/mL,鐵標準溶液,5.0,mL,于,50,mL,容量瓶,中,加入,100,g/mL,鹽酸,羥,胺溶液,1.0,mL,搖勻,加入,1,mol/L,溶液,5.0,mL,和,1,g/L,鄰,二氮雜菲,溶液,3.0,mL,,,以水稀釋至刻度,搖勻,。放置,10,min,在,7220,型分光光度計,上,,用,2,cm,比,色皿,以水為參比溶液,波長從,570,nm,開始,到,430,nm,為止,,每隔,10,或,20,nm,測定

5、,一次,吸光度,(,其中,從,530,490,nm,,,每隔,10,nm,測,一,次,),,,然后以波長為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制出吸收曲線,從吸收曲線,上確定,該測定的適宜,波長,(,最大吸收波長,),。,四、實驗步驟,2.,鐵,含量的,測定,:,(1),標準曲線的測繪:取,50,mL,容量瓶,6,支,編號,。分別吸取,10,ug/mL,的,鐵,標準溶液,2.0,mL,、,4.0,mL,、,6.0,mL,、,8.0,mL,和,10.0,mL(,務必,準確量,取,),于,5,只容量瓶中,另一容量瓶中不加鐵標準溶液,(,配置空白溶液,作參比,),。然后,各,加,1.0,mL,100,g/mL,

6、鹽酸,羥胺溶液,搖勻,,經(jīng),2,min,后,,再各,加,5.0,mL,1,mol/L,的 溶液及,3.0,mL,1,g/mL,鄰二,氮雜菲,溶液,以,水稀釋至,刻度,搖,勻。,放置,10,min,在,分光光度計,上,用,2,cm,比,色,皿,在,最大吸收,波長,(,510,nm),處,測定,各,溶液的吸光度。以鐵含量為,橫坐標,吸光度,為,縱坐標,繪制標準曲線。,實驗步驟,(2),未知,液中鐵含量的,測定,:,吸取,10,mL,未知,液代替,標準溶液,其他,步驟均,同上,測定,吸光度。由未知液的吸光度在標準曲線上,查出,10,mL,未知,液中的鐵,含量,以,mg/L,表示,結果,。,實驗步驟,

7、1.,記錄表格,:(1).,吸收曲線的測繪記錄,:,(2).,標準曲線的測繪記錄:,五、實驗數(shù)據(jù)記錄,波長,/nm,430,450,470,490,500,510,520,530,550,570,吸光度,序號,項目,1,2,3,4,5,6,7(,鐵試樣溶液,),取,10ug/mL,鐵標準溶液的體積,(mL),鐵含,(ug/mL),最大吸收波長,(nm),吸光度,A,2.(1),根據(jù)表格一繪制吸收曲線,(A-),(2),根據(jù)表格二繪制標準曲線,(,縱坐標為,A,橫坐標為鐵,的含量,單位為,ug/mL),3.,根據(jù)鐵樣品溶液的標準曲線,表示出標準曲線的方程,再將未知樣液的吸光強度代入,求得樣液中的

8、鐵的含量,單位為,mg/L,。,數(shù)據(jù)記錄:,參比溶液又稱空白溶液。測量時用作比較的、不含被測物質(zhì)但其基體盡可能是與試樣溶液相似的溶液。通常,用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線。有時,基體中雖不含被測物質(zhì),但含有別的物質(zhì),這時必須保證其不影響測試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測物質(zhì),此時必須經(jīng)過純化將其除去。否則將影響測定結果。在色譜分析中,有時基體中可能存在一個以上的和被測組分相距較遠的色譜峰,計算機在數(shù)據(jù)處理中不會計入它們,不影響測定。,參比溶液?,用分光光度計測量,被測的都為液體,通常是稀釋后的,要測的是溶質(zhì)吸光度,而溶劑也是有影響的,所以要有參比,以參比溶液調(diào)節(jié)零點,去除溶劑對溶質(zhì)吸

9、光度的影響。在進行光度測量時,利用參比溶液來調(diào)節(jié)儀器的零點,可以消除由于吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差,并扣除干擾的影響。參比溶液可根據(jù)下列情況來選擇。,A.,當試劑及顯色劑均無色時,可用蒸餾水作參比溶液。,B.,顯色劑為無色,而被測試液中存在其它有色離子,可用不加顯色劑 的被測試液作為參比溶液。,C.,顯色劑有顏色,可選用不加被測試液而加入顯色劑的溶液作為參比溶液。,D.,顯色劑和試液均有顏色,可將一份試液加入適當掩蔽劑,將被測組分掩蔽起來,使之不再與顯色劑作用,而顯色劑及其它試劑均按試液測定方法加入,以此作為參比溶液,這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。,E.,改變加入

10、試劑的順序,使被測組分不發(fā)生顯色反應,可以把此溶液作為參比溶液消除干擾。,參比溶液的選擇:,7220,型分光光度計的構造:,分光光度計的原理:,分光光度計的基本原理:溶液中的物質(zhì)在光的照耀下,發(fā)生了對光的特定吸收的效應,而且物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)具有其各自的吸收光譜,因此當某種光透過溶液時,其能量就會被吸收而減弱,光能減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關系,既符合朗伯,-,比爾定律:,A,吸光度,入射光強度,吸收系數(shù),透射光強度,b,比色,皿池長度,c,溶液的濃度,T,透射比 由上式可以看出當吸收系數(shù),a,與光程長度,b,不變時,吸光度與溶液濃度成正比。本儀器正是依據(jù)這一

11、原理而設計的。,1.,開機安裝好儀器后,檢查樣池位置,使其處在光路中(拉動拉手應感應到每擋的定位),關好樣品室門,打開儀器電源開關,預熱,10,分鐘,即可進行測量。,2.,打開樣品室門,將方式定于透過率檔,按,0%T,進行機械調(diào)零。,3.,從蒸餾水中取出比色皿擦干,注意拿比色皿的時候拿毛玻璃面。向比色皿內(nèi)注入少量試液,潤洗三次,然后注入,3/4,至,4/5,的試液,用濾紙片擦干外壁所掛水珠。將比色皿按順序放入樣品池。注意光面對光源。,4.,在樣品池中放置空白液與樣品。,5.,按需要調(diào)節(jié)波長按鈕。,6.,使空白溶液位于光路中,按方式選擇鍵使吸光度指示燈亮,按,100%T,鍵調(diào),100%,,至窗口

12、顯示,100%,。,7.,打開樣品室門,將功能調(diào)于透射比檔,觀察顯示是否為,0.0,,若否則按,0%T,鍵調(diào)零。調(diào)零后再放回吸光度檔。,8.,重復上兩步,直至儀器穩(wěn)定。,9.,將樣品置入光路,從顯示屏上讀取吸光度,。,7220,型分光光度計的使用方法:,1.,鹽酸羥胺溶液配制已久對測定結果帶來什么影響?,答:羥胺是用來將 還原成 的,如果配制已久,還原能力減弱,就會使部分鐵離子得不到還原,造成分析結果偏小。,2.,用分光光度計測量顯色劑量不同時的吸光度時應注意什么?,答,:,應用分光光度計測量顯示劑量不同時的吸光度時,應保持用一個比色皿測量,這樣可以減小比色皿自身對實驗產(chǎn)生的影響,3.,為什么要用鄰二氮雜菲顯色后再測量?,六,.,思考,答:因為水中微量組分較少,對光的吸收很小,無法測出其吸光光度,加入顯色劑后,與被測組分形成絡合物,摩爾吸收系數(shù)較高,吸光明顯,容易測定。,4.,顯色時,加入還原劑,緩沖劑,顯色劑的順序是否可以顛倒?為什么?,答:不可以,若在加還原劑前先加顯色劑鄰二氮菲,鄰二氮菲會與 絡合,再加入還原劑,已絡合的三價鐵無法還原成二價鐵,不能準確得出鐵的含量。還原劑是為了把 還原為,,緩沖溶液是調(diào)節(jié)一定的,PH,值范圍,謝謝,觀看!,

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