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1、實驗十二實驗十二 維生素維生素C含量的測定含量的測定 提出問題：提出問題： 什么是維生素什么是維生素C？ 是性質(zhì)的檢測還是量的檢測？是性質(zhì)的檢測還是量的檢測？What is Vitamin C? Vitamin C (also called ascorbic acid 抗壞血酸) is a water soluble vitamin found abundantly in many plants. Vitamin C is essential to growth in the human body because it is required for making collagen膠原. Ho

2、wever, human cannot make Vitamin C. It has to be provided through diet. The disease that results from a severe deficiency in vitamin C is called scurvy壞血病. People with scurvy get bruises瘀傷 easily. Their skin and teeth also become very unhealthy. 維生素維生素C，又稱抗壞血酸，在植物的綠色部分及許多水果、蔬，又稱抗壞血酸，在植物的綠色部分及許多水果、蔬菜

3、中含量豐富，是一類對物質(zhì)代謝具有重要的作用的菜中含量豐富，是一類對物質(zhì)代謝具有重要的作用的水溶性水溶性維維生素。生素。 參與氧化還原反應(yīng)。（遞氫體）參與氧化還原反應(yīng)。（遞氫體） 參與體內(nèi)羥化反應(yīng)，參與體內(nèi)羥化反應(yīng)，VcVc是羥化酶的輔酶。是羥化酶的輔酶。 解毒作用解毒作用 維生素維生素C是具有是具有L系糖構(gòu)型的系糖構(gòu)型的不飽和多羥化合物不飽和多羥化合物，可分為，可分為還原型和氧化型兩種形式。根據(jù)它具有的還原型和氧化型兩種形式。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)還原性質(zhì)可測定其可測定其含量。含量。什么是什么是維生素維生素C C？生理特性：生理特性：1. 參與體內(nèi)羥化反應(yīng)，2. 參與氧化還原反應(yīng)，3. 促進鐵吸

4、收防止貧血，4. 解毒作用，5. 改善變態(tài)反應(yīng)，提高免疫力，6. 人體不能自己生產(chǎn)。物理特性：物理特性：水溶性化學(xué)特性化學(xué)特性:強還原性維生素維生素C的生物特性的生物特性 水溶性水溶性 強還原性強還原性l提取提取維生素維生素C C的的水溶液水溶液l通過通過氧化還原滴定法氧化還原滴定法來測定維生素來測定維生素C C。測定的思路測定的思路DCPIP The principle of this method is a titration with dichlorophenolindophenol (or phenol-indo-2:6-dichlorophenol, also known as DC

5、PIP). Ascorbic acid reacts with DCPIP, changing the color from blue to pink to colorless. They react in a 1:1 fashion, so if a known quantity of DCPIP solution reacts with the plant tissue extract, the quantity of DCPIP used gives a direct measure of the quantity of ascorbic acid present. 2, 6-二氯酚靛酚

6、二氯酚靛酚2, 6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚23當(dāng)溶液當(dāng)溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色從無色轉(zhuǎn)變成微紅色時時即表示溶液中的抗壞血酸剛剛即表示溶液中的抗壞血酸剛剛被全部氧化，此時即為滴定終被全部氧化，此時即為滴定終點。點。 粉紅色粉紅色藍色藍色無色無色DCPIP是性質(zhì)的檢測還是量的檢測？是性質(zhì)的檢測還是量的檢測？1.蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗2.蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)及等電點的測定 3.溶菌酶的提取4.蛋白質(zhì)含量的測定5.蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳 6.細菌DNA的提取 7.UV測定DNA含量和純度8.PCR9.DNA瓊脂糖凝膠電泳 10. 酶的動力學(xué)測定11. 血清SGPT酶活性的測定 用標(biāo)準(zhǔn)品來測定樣品1. 學(xué)習(xí)定量測定

7、維生素學(xué)習(xí)定量測定維生素C的原理和方法。的原理和方法。2. 進一步掌握滴定法的基本操作技術(shù)。進一步掌握滴定法的基本操作技術(shù)。3. 了解水果及蔬菜中維生素了解水果及蔬菜中維生素C的含量情況。的含量情況?！灸康暮鸵竽康暮鸵蟆浚ㄒ唬┨崛。ㄒ唬┨崛?稱取松針稱取松針2.0克克(或其他水果或其他水果210克克)，剪碎，放在研缽中；，剪碎，放在研缽中；【實驗方法實驗方法】加加 2%草酸草酸 5-10毫升，研磨成漿狀；毫升，研磨成漿狀；濾紙過濾，濾餅可用少量濾紙過濾，濾餅可用少量 2%草酸草酸 洗洗2-3次；次；置濾液于置濾液于50mL容量瓶中容量瓶中, 用用2%草酸草酸溶液定容并混勻。溶液定容并混勻。

8、 2mL 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)Vc 溶液（溶液（0.1mg /mL） 8ml 2%草酸草酸（二）標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸的滴定（二）標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸的滴定根據(jù)所用染料的體積，計算出根據(jù)所用染料的體積，計算出1ml染料相當(dāng)于多少毫克染料相當(dāng)于多少毫克(T)抗壞血酸?？箟难帷７謩e以分別以0.1% 2,6- 二氯酚靛酚鈉溶液滴定至淡紅色，二氯酚靛酚鈉溶液滴定至淡紅色，并保持并保持15秒不褪色，即達終點。秒不褪色，即達終點。10ml 2%草酸草酸（空白對照）（空白對照）2份份2份份（三）樣品的滴定（三）樣品的滴定 濾液濾液2份份，每份，每份10mL滴定方法同前。滴定方法同前。消耗消耗DCPIP的量的量(ml)12均值均值標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)

9、準(zhǔn)Vc (0.1 mg/ml)樣品濾液樣品濾液 (D )(VA)2%草酸草酸(VB)ml 染料相當(dāng)于染料相當(dāng)于 T mg Vc（四）計算（四）計算VA: 滴定樣品提取液所用染料的平均毫升數(shù)滴定樣品提取液所用染料的平均毫升數(shù)VB: 滴定空白對照所用染料的平均毫升數(shù)滴定空白對照所用染料的平均毫升數(shù)C: 樣品提取液總的毫升數(shù)樣品提取液總的毫升數(shù)D: 滴定時所取樣品提取液的毫升數(shù)滴定時所取樣品提取液的毫升數(shù)W: 待測樣品的重量（待測樣品的重量（g）T: 為為1ml染料能氧化抗壞血酸的毫克數(shù)染料能氧化抗壞血酸的毫克數(shù)Vc含量（含量（mg/100g樣品）樣品）（VAVB） T DC100 W1. 整個操作

10、過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。2. 滴定所用滴定所用2，6-二氯酚靛酚的量應(yīng)在二氯酚靛酚的量應(yīng)在1-4毫升之間，毫升之間，超出或低于此范圍，應(yīng)增減樣品液用量或改變提取超出或低于此范圍，應(yīng)增減樣品液用量或改變提取液稀釋度。液稀釋度?！咀⒁馐马椬⒁馐马棥?3. 微量滴定管要小心操作。微量滴定管要小心操作?！緦嶒瀳蟾鎸嶒瀳蟾妗?實驗標(biāo)題實驗標(biāo)題姓名，班級，學(xué)號 實驗原理實驗原理DCPIP (藍色) + H+ DCPIPH+ (粉紅色)DCPIPH+ (粉紅色) + Vc DCPIPH2+ (無色) 實驗方法及簡單步驟實驗方法及簡單步驟 實驗結(jié)果及計算實驗結(jié)果及計算實驗報告消耗消耗DCPIPDCPIP的量的量(ml)(ml)12均值標(biāo)準(zhǔn)Vc (X mg)樣品濾液(D D ml)VA2%草酸VBml 染料相當(dāng)于 T mg Vc實際測得每100g 松針 中的維生素C含量為 mg選材： 松針 樣品量: g討論討論1. 為了測得準(zhǔn)確的維生素C含量，實驗過程中都應(yīng)注意哪些操作步驟？為什么？2. 試簡述維生素C的生理意義。3. 實驗設(shè)計中有什么可以改進的地方？實驗報告