《飼料中添加亞麻籽對蛋雞蛋黃富集DHA和EPA的影響碩士畢業(yè)論文》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《飼料中添加亞麻籽對蛋雞蛋黃富集DHA和EPA的影響碩士畢業(yè)論文（52頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、 分類號： 密 級： U D C： 導師郵箱：yanghuanmin@ 2011屆攻讀碩士學位研究生學位（畢業(yè)）論文 飼料中添加亞麻籽對蛋雞蛋黃富集DHA和EPA的影響 The Effect of Supplemental Linseed into Diet on DHA and EPA in Chickens 學科、 專業(yè)： 基礎獸醫(yī)學 研 究 方 向： 動

2、物營養(yǎng)生理學 研 究 生： 指 導 教 師： 完 成 日 期： 2011年4月 中國 大慶 42 獨 創(chuàng) 性 聲 明 本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得黑龍江八一農墾大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。 研究生簽名： 時間：

3、 年 月 日 關于論文使用授權的說明 本人完全了解黑龍江八一農墾大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意黑龍江八一農墾大學可以用不同方式在不同刊物上發(fā)表，傳播學位論文的全部或部分內容。 (保密的學位論文在解密后應遵守此協議) 研究生簽名： 時間： 年 月 日 導師簽名： 時間： 年 月 日

4、 摘 要 本研究以550只海藍粉蛋雞為實驗對象，探討日糧中添加不同含量亞麻籽對蛋雞生產性能及蛋黃內DHA和EPA含量的影響，并確定蛋雞飼料中亞麻籽的最佳添加劑量。 本試驗采用單因素兩水平試驗設計，以海藍粉蛋雞為試驗對象，隨機選取550只的海藍粉蛋雞，分成3組。對照組飼喂基礎日糧，試驗Ⅰ組在基礎日糧中添加6%亞麻籽，試驗Ⅱ組在基礎日糧中添加10%亞麻籽。預飼3天，正飼30天，以5天為1個試驗期，共6個試驗期。正飼開始后每隔5天，隨機在每個處理組中取20枚雞蛋，用做蛋黃中DHA、EPA變化過程的研究。另從5個不同雞蛋銷售點購買不同商品雞蛋各10枚，與試驗雞場雞蛋蛋黃中DHA、EPA

5、含量進行對比檢測。 研究結果表明：①全期飼養(yǎng)試驗中，添加6%和10%亞麻籽功能性飼料可以顯著提高蛋雞蛋雞的每天的平均總蛋重（P<0.05），而對其它生產性能均沒有明顯的影響（P>0.05）。6%亞麻籽添加組在不同試驗期，可不同程度地提高蛋雞的生產性能，效果較10%亞麻籽添加組好。②在整個試驗期間，飼喂普通飼料生產的雞蛋蛋黃中DHA和EPA含量沒有顯著變化（P>0.05）。飼喂含有6%亞麻籽的飼料可以提高蛋黃中DHA含量，降低EPA含量，且DHA沉積量呈現逐漸增加的趨勢。飼喂含有10%亞麻籽飼料后蛋黃中DHA沉積量呈現迅速提高的趨勢，隨飼喂時間的延長對DHA的蓄積能力逐漸減弱；而EPA呈現先提

6、高后降低的趨勢。隨著飼喂亞麻籽時間的延長，DHA與EPA總量呈現降低的趨勢。③與5個不同產地市售雞蛋相比，試驗雞場雞蛋蛋黃中DHA和EPA含量差異不顯著，飼喂亞麻籽飼料有提高蛋黃中DHA含量，降低EPA含量的趨勢，但總量沒有顯著差異（P>0.05）。 飼喂含有粉碎的亞麻籽的飼料可以提高蛋黃中DHA的含量，降低EPA的含量，但對兩者總量無明顯影響，6%亞麻籽組效果較10%亞麻籽組好。 關鍵詞：亞麻籽；蛋雞；生產性能；DHA；EPA Abstract 550 laying hens were divided in to 3 groups randomly

7、, to study the effect of different dose of linseeds in diets on growth performance, DHA and EPA concentration in egg yolk, and to assure the best dose of linseeds in diet of laying hens. The control group were fed with basial diets, trial groupⅠ were fed with basial diets plus 6% linseeds, trial gr

8、oupⅡ were fed with basial diets plus 10% linseeds. Prefeeding was 3 d, formal feeding was conducted till 30d, each trial was 5d, total of 6 trial terms were performed. 20 eggs were picked up in every 5 days from each group randomly, to study the changing process of DHA and EPA in egg yolk. As while,

9、 10 eggs were bought from each of other 5 commercial store, to compare the concentration of DHA and EPA with trial eggs. The results showed: ① In the whole trial period, average total egg weight in trial groupⅠand trial groupⅡ were significantly increased compared with the control group (P<0.05), w

10、hilease, there were no significant changes happened in other performance (P>0.05). In differ trial term, growth performances of laying hens fed with diets plus 6% linseeds were raised in differenct level, better than laying hens fed with diets plus 10% linseeds. ② In the whole trial period, concentr

11、ation of DHA and EPA in egg yolk in control group was not changed notably (P>0.05). DHA in egg yolk in group fed with 6% linseeds was increased gradually as long as the trial went, and were raised significantly in several trial terms comparable with the control group (P<0.05); at the same time, EPA

12、in egg yolk was reduced. DHA in egg yolk in group fed with 10% linseeds were increased quickly in the first 2 trial terms and reduced gradually as long as the trial went; while, EPA in egg yolk was increased first and reduced later. The total concentration of DHA plus EPA were reduces in the whole t

13、rial period. ③ Comparable with the eggs from other 5 commerical stores, DHA and EPA concentration in control group did not show significant difference, but DHA was increased and EPA was reduced in trial group with linseed, the total concentration of DHA and EPA was not changed significantly (P>0.05)

14、. Generally, linseed could raise DHA concentration but reduce EPA concentration in egg yolk, and did not change the total concentration of DHA plus EPA. 6% linseed was better than 10% linseed to get a good result. Key words: Linseed, laying hen, growth performance, DHA, EPA 目 錄 摘 要 II

15、 Abstract III 符號說明 VIII 引 言 1 第一章 文獻綜述 2 1.1 多不飽和脂肪酸的命名 2 1.2 DHA和EPA的生物學功能 2 1.3 DHA和EPA的來源 6 1.4 DHA和EPA產品的開發(fā) 6 1.5 亞麻籽的飼用價值 9 1.6 研究目的與意義 10 第二章 亞麻籽中營養(yǎng)成份分析 11 2.1 材料 11 2.2 方法 11 2.3 結果 13 2.4 討論 13 第三章 亞麻籽飼料對蛋雞生產性能影響研究 15 3.1 材料與方法 15 3.2 結果和分析 16 3.3 討論 20 第四章 亞麻籽飼料對雞蛋DHA和E

16、PA含量影響研究 22 4.1 材料與方法 22 4.2 結果和分析 23 4.3 討論 28 第五章 結 論 31 參考文獻 32 致 謝 38 附 錄 39 作者簡介 42 發(fā)表論文 43 Contents Chinese abstract II English abstract III Symbolic description VIII Introduction 1 Chapter one Liter

17、ature summarize 2 1.1 Denomination of polyunsaturated fatty acid 2 1.2 Biological function of DHA and EPA 2 1.3 Resource of DHA and EPA 5 1.4 Product of DHA and EPA 6 1.5 Feeding value of linseed 8 1.6 Objective and purpose 9 Chapter two Composition analysis of linseed nutriment 11 2.1 Mat

18、erials 11 2.2 Methods 11 2.3 Results 13 2.4 Discussion 13 Chapter three Effect of linseed in diets on growth performance of laying hens 15 3.1 Methodology 15 3.2 Results 16 3.3 Discussion 20 Chapter four Effect of linseed in diets on concentration of DHA and EPA 22 4.1 Methodology 22 4.2 R

19、esults 23 4.3 Discussion 28 Chapter five Conclusion 31 Reference 32 Acknowledgment 38 Appendix 39 Author resume 42 Publication paper 43 符號說明 縮略語 英文 中文 BW Body weight 體重 BWG Body weight gain 體增重 DG Daily gain 日增重 F

20、/G Feed:gain ratio 料重比 DFI Daily feed intake 日采食量 CP Crude protein 粗蛋白 EE Ether extract 粗脂肪 EPA(C20:5ω-3) 5,8,11,14,17-Eicosapentaenoic acid 二十碳五稀酸 DHA(C22:6ω-3) 4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid 二十二碳六稀酸 PA (C16:0) Hexadecanoic acid 棕櫚酸 SA (C18:0) Octadecanoic acid 硬脂酸 LA

21、 (C18:2ω-6) Linolenic acid/9,12-Octadecaenoic 亞油酸 AA (C20:4ω-6) 5,8,11,14-Eicosatetraenic 花生四稀酸 ALA(C18:3ω-3) α-linoleniccid/9,12,15-Octadecatrienoic α-亞麻酸 OA (C18:1ω-9) Petroselinic acid 油酸 PUFA Polyunsaturated fatty acid 多不飽和脂肪酸 MUFA Monounsaturated fatty acid 單不飽和脂肪酸 SFA Satura

22、ted fatty acid 飽和脂肪酸 EFA Essential fatty acid 必需脂肪酸 黑龍江八一農墾大學碩士學位論文 引言 引 言 1978年，在流行病調查中，Dyerberg發(fā)現，生活在格陵蘭島的愛斯基摩人的冠心病和心肌梗塞等心血管疾病機率比丹麥人低7倍[1，2]，而愛斯基摩人食物中的膽固醇含量卻是丹麥人的3倍。原來在愛斯基摩人的食物中含有較多的ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3不飽和脂肪酸），這些ω-3不飽和脂肪酸都來自北冰洋的海魚、海狗和海豹等

23、海產品中。因此，人們推斷大量攝取ω-3不飽和脂肪酸能夠降低心血管疾病的發(fā)病率。 在日常生活中，大多數人不能象愛斯基摩人那樣每日都能吃到深海魚類，這極大地限制了人們從海類產品中攝取ω-3不飽和脂肪酸?？亢ｎ惍a品不能滿足人們對ω-3不飽和脂肪酸的需要，尤其像我國這樣深海產品相對缺乏、同時心血管疾病高發(fā)的國家。因此，挖掘和開發(fā)新的ω-3不飽和脂肪酸資源就顯得更為必要和迫切。在眾多資源中，亞麻籽成為我國開發(fā)新的ω-3不飽和脂肪酸的重要資源。在我省，亞麻籽資源豐富且成本較低。亞麻籽中含有α-亞麻酸，約占總脂肪酸的57%以上；α-亞麻酸在體內可以轉化成為更長鏈的多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸（DHA）和二十

24、二碳六烯酸（EPA）[3，4]，DHA和EPA俗稱“腦黃金”。同時，亞麻籽中蛋白質含量和能量水平都較高，當與其它原料配合時，能明顯提高飼料的整體營養(yǎng)水平。因此，亞麻籽可作為較好和較經濟的資源以開發(fā)和生產富含DHA和EPA的產品。 在我國，禽類產品比較常見，尤其是雞蛋，可謂家常食品，且被認為是高品質的食品。隨著人們生活水平的不斷提高，人們越來越重視通過食補提高人體的健康水平，因此食物的需求已不是數量上的要求，而是在質量上有更多的要求。生產優(yōu)質的雞蛋已經成為蛋雞產業(yè)中的一個熱點問題。人的心腦血管疾病的發(fā)生率與膳食中DHA和EPA含量密切相關。當缺乏DHA和EPA時，心腦血管疾病的發(fā)生率就會明顯提

25、高。從降低心血管疾病的發(fā)病率方面，研究和開發(fā)富含DHA和EPA的營養(yǎng)保健雞蛋具有重大的經濟效益和社會效益。 Cruikshank[5]指出，改變日糧脂肪酸的組成和含量可以影響雞蛋中脂肪酸的組成，且日糧高水平的不飽和脂肪酸會影響蛋黃中脂肪酸的比例。本課題通過向飼料中添加亞麻籽，使DHA和EPA能夠在禽蛋中富集，從而使雞蛋成為繼深海產品之后富含DHA和EPA的產品。因此，研究開發(fā)這種富含DHA和EPA的雞蛋在我國具有非常廣闊的市場前景。 黑龍江八一農墾大學碩士學位論文 第一章

26、文獻綜述 第一章 文獻綜述 1.1 多不飽和脂肪酸的命名 多不飽和脂肪酸（polyunsatursted fatty acid，PUFA），又稱為多烯酸，是一類含有2個及以上雙鍵（-C=C-），碳原子數為16-22的直鏈脂肪酸。PUFA主要包括了ω-3、ω-6和ω-9系列脂肪酸，其中ω-3和ω-6具有重要生物學意義。α-亞麻酸（α-LNA）和亞油酸（LA）分別是ω-3和ω-6系列脂肪酸的前體，在體內經過一系列的碳鏈延長與脫飽和作用后衍生為其它的多不飽和脂肪酸[6]。人體內不能合成多不飽和脂肪酸，必須從食物中攝入，或由膳食提供一些富含脂肪酸前體的物質，像深海魚油、植物油等，以用于衍生為PU

27、FA。 ω-3，6，9是根據ω編號系統(tǒng)來命名的[7]，將脂肪酸碳鏈的遠羧基端的甲基碳原子稱為ω-1碳原子，則前面的碳原子依次稱為ω-2、ω-3、ω-4…碳原子。ω-3脂肪酸就是指第一個雙鍵在甲基端的ω-3碳原子上，其余類推。ω-3脂肪酸有時也用n-3表示，這兩種命名規(guī)則相同。脂肪酸通常用縮寫符號來表示，即第一個數字表示?；湹奶荚訑?，然后是一個冒號，其后的數字代表不飽和雙鍵數，之后是一個ω或n，最后的數字表示從甲基端數起的第一個雙鍵的位置。例如，18：3ω-3亞麻酸，指的是它有18個碳原子，有三個雙鍵，靠近甲基端的第一個雙鍵在ω-3的位置[8,9]（如圖1-1所示）。ω-3系列脂肪酸在ω-

28、3位有不飽和雙鍵，包括亞麻酸及其衍生的二十二碳六烯酸（Docosaheiaenoic acid，DHA）和二十碳五烯酸（Eicosapentaenoic acid，EPA），DHA和EPA俗稱“腦黃金”。 圖1-1ω-3脂肪酸結構圖 1.2 DHA和EPA的生物學功能 自1978年Dyerberg發(fā)現愛斯基摩人攝入大量的深海魚類可以大大降低他們得冠心病、血栓等心腦血管疾病機率之后，關于DHA和EPA的研究迅猛發(fā)展，研究者不斷發(fā)現DHA和EPA更多的生物學功能。 1.2.1 降低心腦血管疾病的發(fā)病率 （1）抗血小板凝集 血小板合成的血栓素TAX2具有極強的血小板凝集作用，可使

29、血管收縮，血壓升高；血管內皮產生的前列環(huán)素PGI2具有抑制血小板凝集、舒張血管和降低血壓的作用。血栓素TAX2和前列環(huán)素PGI2之間存在一定的平衡，隨著年齡增長，前列環(huán)素PGI2合成能力降低，血栓素TAX2量增多，平衡受到破壞。 血栓素和前列環(huán)素是以花生四烯酸為前體，通過磷酸化酶的作用從細胞膜磷酸甘油酯中釋放出來。EPA是花生四烯酸的競爭性抑制劑，可競爭性抑制花生四烯酸向血栓素和前列環(huán)素轉化而生成TXA3和PGI3，TXA3幾乎沒有生物活性，而PGI3與前列環(huán)素PGI2的生理功能和活性相似，因而減少了血小板凝集并增加了血管舒張作用，使血栓形成減少[10]。Woodman等通過人體實驗發(fā)現，D

30、HA和EPA可以減少血栓素的形成，且高純化的DHA效果明顯優(yōu)于EPA。因此食用DHA和EPA有助于抑制血小板凝集，防止心肌梗死和腦梗塞的發(fā)生[11]。 （2）降血脂，防動脈硬化 動脈粥樣硬化是中老年人的常見病和多發(fā)病，也是世界上死亡率最高的疾病之一。高血脂是導致動脈粥樣硬化的重要致病因素。膽固醇以低密度脂蛋白（LDL）的形式存在于血液中時，容易沉積在血管壁上，而以高密度脂蛋白（HDL）形式存在于血液中時，則使血管疏通。因此，人體血清中HDL是心腦血管疾病的保護因子，而LDL則是導致動脈粥樣硬化的原因之一。實驗表明，DHA和EPA能增加膽固醇的排泄，抑制內源性膽固醇合成；提高血液中的HDL，

31、降低血液中中性脂質、總膽固醇、LDL和極低密度脂蛋白（VLDL）含量；并改變脂蛋白中脂肪酸的組成，增加其流動性；降低血清中甘油三酯，抑制人單核細胞產生血小板活性因子（PAF）[12]。 Balk等在對21個油脂實驗評價后發(fā)現，不同的魚油攝入量可改變總甘油三酯、HDL膽固醇和LDL膽固醇水平，但對魚油中總膽固醇含量沒有影響[13]。DHA和EPA可增加LDL的易氧化性，降低LDL凝血酶的產生[14]，可抑制氧化型LDL的表達以及與人體冠狀內皮細胞相聯的單核細胞，并有預防動脈粥樣硬化的功效[15]。 （3）預防冠心病 膽固醇雖然是細胞膜的組成部分，在細胞生長發(fā)育過程中是必需的，但是血清中膽固

32、醇含量過高，會堆積在冠狀動脈血管壁上引起冠心病。DHA和EPA可以促進膽固醇代謝，防止膽固醇的堆積。當膳食中存在DHA和EPA時，膽固醇便與之結合形成膽固醇酯，促其形成膽酸而從腸道排出[16,17]。因此，在膳食中適當地攝入一定量的多不飽和脂肪酸，對促進人體膽固醇代謝，降低血清中總膽固醇含量，防止脂質在肝臟和動脈壁沉積，對預防心腦血管疾?。ㄖ饕枪谛牟。┦怯幸娴摹? 1.2.2 維護大腦和視網膜功能 （1）促進嬰幼兒大腦和視網膜的發(fā)育 ω-3脂肪酸在大腦中主要存在于灰質部分，是人腦中神經細胞膜的主要脂質成分，也是大腦細胞優(yōu)先吸收利用的脂肪酸成分。DHA是神經系統(tǒng)細胞生長及維持的一種主要元

33、素，是大腦和視網膜的重要構成成分，在人體大腦皮層中含量高達20%，主要以磷脂的形式存在，在視網膜中所占比例最大，約占50%，人體不能合成DHA，因此人類依賴飲食中獲得DHA以促進大腦的發(fā)育[18]。 DHA在腦細胞形成過程中起重要作用，有利于腦細胞突起的延伸和重新產生。胎兒自身并不能合成DHA，必須通過胎盤從母體中獲得。DHA是惟一可以通過胎盤的ω-3不飽和脂肪酸，可促進胎兒腦細胞分裂，健全胎兒腦組織。胎兒DHA補充不足，可導致其腦細胞生長發(fā)育不正常；嚴重缺乏DHA，可能導致胎兒無法正常進行由自身中樞神經系統(tǒng)控制的代謝[19]。在胎兒時期，從受精卵在母親子宮內分裂開始就需要DHA，因此，妊娠

34、婦女需外源補充DHA，以確保妊娠后期為胎兒大腦的快速發(fā)育提供充足的脂肪酸。婦女在懷孕期間，如果飲食中缺少DHA，會影響胎兒大腦及神經系統(tǒng)的正常發(fā)育，以及其后天的智商指數[20]。有研究顯示，懷孕期間接受DHA補充的女性，懷孕期較長，嬰兒出生體重較高。臨床實驗也證實，處于懷孕及哺乳期的婦女，如果提高DHA的攝取量，可降低產后抑郁癥的發(fā)生[21]。 研究表明，DHA有利于嬰兒中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育、視網膜的發(fā)育，智力、認知能力和解決問題能力的發(fā)育，脈管系統(tǒng)的發(fā)育和免疫系統(tǒng)發(fā)育[22]。如果DHA缺乏將會對迅速發(fā)育的中樞神經系統(tǒng)造成損害，會導致兒童（尤其是嬰幼兒）的學習能力下降，同時患神經系統(tǒng)疾病（如

35、神經官能癥）的機率也較高。在早產兒的體內DHA的濃度偏低，需要特別補充DHA，才可使其體內DHA濃度回升到正常水平[23]。 （2）延緩腦的衰老 對成年人來講，DHA也是維持大腦機能正常發(fā)揮不可缺少的物質，DHA對延緩腦衰老也起重要作用。對老年人來講，DHA有防止老年癡呆的作用。因而，有人稱DHA為“腦黃金”。 如果缺乏DHA，已形成的腦突觸會逐漸萎縮，腦細胞間信息的傳遞能力就會下降，同時還會使感觀的功能衰退。DHA在一定程度上可以提高腦的柔軟性，抑制腦的老化，對由于年齡增長而萎縮死亡的腦細胞有明顯的修復作用[12]。另外，隨著年齡的增加，體內各種自由基的數目不斷增多，而谷胱甘肽過氧化物

36、酶（GSH-Px）及超氧化物歧化酶（SOD）數量逐漸降低，活性逐漸減弱，因此自由基代謝產物丙二醛（MDA）的生成增多，使細胞受到損傷，組織器官功能下降。服用α-亞麻酸后，GSH-Px及SOD活性增加，MDA的生成減少，揭示α-亞麻酸代謝產物DHA與EPA有抗衰老作用。Bartsch（1999）在研究EPA對小雞腦發(fā)育時發(fā)現，EPA能迅速在腦中轉化成DHA并蓄積，這也說明EPA是通過DHA對腦發(fā)育起重要作用的物質[24]。 1.2.3 抗癌抗炎作用 （1）抗癌作用 DHA和EPA有抑制乳腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮癌等的作用。臨床及實驗證據表明，ω-3不飽和脂肪酸對癌癥有較好的抑制作用[25]

37、。英國阿斯頓大學的一個研究小組發(fā)現EPA能使固態(tài)腫瘤縮小，還能改變一些腫瘤產生的類激素蛋白，并抑制其合成過程，表明EPA有抗癌的作用。劉艷（2004）對DHA和EPA的抗癌機制進行了專門論述，認為其抗癌機制涉及許多因素，如惡病因子、免疫功能、脂質過氧化等 [26]。趙麗等（2003）以昆明小鼠制作荷瘤鼠模型，研究了DHA對小鼠肝癌細胞、肉瘤細胞和艾氏腹水瘤細胞的抑制作用，并測定DHA對神經膠質瘤細胞、卵巢癌細胞及胃腺癌細胞的半數抑制濃度，結果顯示DHA復合物在體內和體外對癌細胞均有抑制作用[27]。 腫瘤在體內能產生某些促進分解代謝的因子，如脂肪動員因子和蛋白水解誘導因子，這是各類癌癥病人晚

38、期脂肪和骨骼肌肌肉組織大量分解，出現惡病質的主要原因。EPA能夠下調脂肪動員因子的表達，并通過抑制脂肪細胞中cAMP的升高阻止蛋白水解誘導因子的作用，從而控制體重的下降，避免惡性循環(huán)，很好地改善了患者的生活質量。在許多腫瘤組織中，前列腺素的含量明顯高于正常組織。前列腺素也能促進細胞外基質降解，產生血栓烷促進血小板聚集，有利于癌細胞的侵襲和轉移。DHA和EPA能夠抑制前列腺素的活性，從而發(fā)揮對腫瘤的抑制作用。 （2）抗炎作用 流行病學調查發(fā)現，以攝食魚類為主的愛斯基摩人很少患氣管炎、風濕性關節(jié)炎等慢性疾病。用DHA和EPA喂養(yǎng)小鼠，其實驗性炎癥的水腫程度降低[28]。臨床試驗表明，風濕性關節(jié)

39、炎患者攝入含DHA和EPA的抗炎癥飲食可減輕急慢性炎癥反應程度，可使關節(jié)腫脹程度顯著降低，體內T淋巴細胞增殖減少，而攝入普通飲食者則無此變化[29,30]。用DHA和EPA防治某些炎性疾病，如類風濕性關節(jié)炎，已取得良好的效果[31]。烷類及細胞活素是重要的炎癥介質，許多抗炎藥物有賴于DHA、EPA起到抑制烷類及細胞活素的生成[32]，故有應用EPA為抗炎藥物的嘗試。自20世紀80年代起，在治療慢性炎癥有效藥物的研究工作中，DHA和EPA已逐漸得到重視。近年來醫(yī)學工作者用DHA和EPA防治某些炎性疾病，如類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬和哮喘病等，已取得良好的效果，此外DHA和EPA對紅斑狼瘡也有一定的治

40、療效果[33]。 （3）免疫調節(jié)功能 有研究表明[34]，富含DHA和EPA的魚油可調節(jié)細胞免疫功能，增強患有免疫性疾病的動物模型抵抗內毒素的能力，并延長移植器官的存活時間。還有研究顯示[35,36]，脂肪酸的攝入對自體免疫疾病動物模型的影響取決于動物模型和攝入脂肪酸的種類及數量。富含DHA和EPA的魚油飲食可減輕自身抗體介導的疾病的嚴重程度，和提高動物生存能力；而富含ω-6型多不飽和脂肪酸的亞油酸食物則增加疾病的嚴重程度。先天性和后天性免疫均可被DHA和EPA所影響。在實驗誘導的T細胞介導的自身免疫疾病中，補充DHA和EPA可加重疾病，補充ω-6型多不飽和脂肪酸則阻止或減輕疾病的嚴重化。

41、DHA和EPA的某些免疫調節(jié)作用，一方面可通過調節(jié)烷類的量和種類而實現，同時又可誘發(fā)烷類的獨立作用機制，而實現免疫調節(jié)效應，而它們的這些誘導效應可用于治療某些免疫疾病[37]。 長期堅持食用DHA或EPA，可抑制T細胞的自身激活或過度激活，也就是可以使炎性、免疫性疾病發(fā)生率下降，健康人群可以通過補充DHA和EPA來降低自體免疫性疾病的患病率[36]。DHA對控制人體變態(tài)反應有積極作用，補充魚油對失調的免疫系統(tǒng)激活所致的急性、慢性疾病可能特別有利。還有些臨床研究表明，DHA和EPA對牛皮癬、多發(fā)性硬化結節(jié)有療效[38]。較長期適量的DHA和EPA可減慢甚至阻止IgA腎病的進展，魚油對進展期Ig

42、A腎病有治療效果[39]。 1.3 DHA和EPA的來源 深海魚油是DHA和EPA的重要來源。大量流行病學、干預試驗和基礎性生物化學研究已經證實魚油（DHA+EPA）有降低血漿中甘油三酯、減少血栓形成趨勢、降低心血管發(fā)病危險的作用。但由于魚油資源有限且價格高，同時魚油中的ω-3不飽和脂肪酸的構成和含量隨著魚的種類、季節(jié)和地理位置等不同而變化[40]，利用海洋魚油作為ω-3不飽和脂肪酸來源受到了很大的限制。另外，利用魚油生產的DHA和EPA產品有無法去除的魚腥味，大大的影響了產品的質量[41]。 DHA的另一個重要來源是藻油。藻油中含DHA，但不含EPA。實際上很多深海魚之所以擁有DHA，

43、都是因為深海魚吃了海藻后在體內殘存的。相比較于魚油DHA，藻油不含EPA，更適合嬰幼兒服用[42]。日糧中添加海藻比魚油更有利，首先能避免魚油產生的魚腥味，另外價格也優(yōu)于魚油，但不同種類的海藻DHA和EPA含量差別很大，即使同一種類的不同品系之間也存在很大差別。 海洋魚類和藻類都會受到海洋重金屬等污染的影響。魚油產品中的重金屬殘留，尤其是汞殘留問題一直受到廣泛關注。上世紀五十年代日本熊本縣發(fā)生的“水俁病”，是由于海水魚的甲基汞中毒引發(fā)的[43]。原來海水中的汞，被海藻類等浮游生物吸收后，轉變成有機汞，海魚采食海藻后，有機汞在魚體內積累，人再食用了這些魚類，人體內的汞毒性是原來的幾十倍，對人體

44、神經系統(tǒng)，尤其是對兒童產生破壞作用。 另外，采用某些單細胞生物（例如藻類、真菌）為原料，經過選擇性萃取方法可獲得DHA和EPA。早期研究報道，利用脂微生物來合成多不飽和脂肪酸是開發(fā)新油源的良好途徑[44,45]。但這一途徑也存在一些問題，在研究產脂微生物的菌種篩選和發(fā)酵過程中，檢測油脂肪酸的工作量很大[46]，且微生物生產脂肪酸的含量有限。 α-亞麻酸是DHA和EPA的前體，在動物體內經脫飽和和碳鏈延長生成DHA和EPA，也是DHA和EPA的主要來源。而α-亞麻酸主要來源于一些植物油，其中以亞麻籽油為代表，富含α-亞麻酸高達57％，其次是菜籽油、大豆油、小麥胚芽油等。亞麻籽也是α-亞麻酸的

45、重要來源，實際上目前應用較廣的就是利用富含α-亞麻酸的植物籽（油）生產多不飽和脂肪酸產品[47]。但是，現有α-亞麻酸攝入量的不足影響到人體所需代謝轉換為的DHA的含量，同時α-亞麻酸的代謝轉換率也直接影響了人體內DHA的含量。根據近些年國內外的醫(yī)學研究和動物試驗，證實青少年和嬰幼兒體內缺乏“碳鏈加長酶”和“減飽和化酶”這些酶的幫助，不能把α-亞麻酸轉化成DHA。一般成人體內才有少量這些酶，幫助1%-5%的α-亞麻酸轉化成DHA，平均的轉化率在3%左右[48]。因此，直接生產含有DHA和EPA，而不需要轉化的產品，才能夠完全解決DHA和EPA及相關α-亞麻酸轉化酶缺乏的問題。 1.4 DHA

46、和EPA產品的開發(fā) 由于DHA和EPA的有益作用，及深海魚價格昂貴和資源有限等原因，近年來，開發(fā)和研究深海魚以外的富集DHA和EPA的產品日漸增多。其中以嬰幼兒配方奶中添加DHA和EPA偏多，牛奶[49]、豆奶[50]及奶片[51]都有所研究。但考慮到我國日常飲食消費仍以肉和蛋為主，研發(fā)富集DHA和EPA的肉制品和蛋制品仍是研究熱點和開發(fā)趨勢。 1.4.1 DHA和EPA肉產品的開發(fā) 開發(fā)富含多不飽和脂肪酸的肉類產品多以雞肉為主，在豬肉[52]和牛羊肉[53]上研究開發(fā)的較少。因為肉仔雞脂肪中含飽和、不飽和與多不飽和脂肪酸分別為 33.5%、30.5%、32%，與牛肉多不飽和脂肪酸比例低

47、、飽和脂肪酸比例高相比，雞肉中脂肪酸的這種結構更適合人類消費。日糧對體脂的結構影響很大，其飽和、不飽和與多不飽和脂肪酸的結構近似于飼料中的，可能增加雞肉中ω-3多不飽和脂肪酸的富集[54]。 開發(fā)含DHA和EPA的雞肉產品，國外在這方面做了很多研究。有研究標明，肉雞日糧中添加5%步魚油可提高肉雞體組織中的ω-3多不飽和脂肪酸的總沉積量，但利用魚油生產的DHA和EPA產品帶有無法去除的魚腥味，大大的影響了產品的質量。因此，人們開始尋找和開發(fā)新的富含ω-3多不飽和脂肪酸的資源。后有研究顯示，給肉雞飼喂亞麻籽后，雞肉中ω-3多不飽和脂肪酸及亞油酸的水平都增高了，而油酸的水平降低了[55]，且多不飽

48、和脂肪酸多以磷脂的形式沉積在肌肉中，而不沉積在脂肪組織中，因此長鏈多不飽和脂肪酸只儲存在瘦肉中，另外脂肪酸沉積量與亞麻籽攝入量成正比，說明亞麻籽可以作為增加雞肉中多不飽和脂肪酸富集的重要原料加以研究。 在國內，有關富含多不飽和脂肪酸雞肉的研究很少，近幾年才有所關注。劉利曉等（2009）研究發(fā)現肉雞日糧中使用亞麻籽油可增加肌肉中ω-3不飽和脂肪酸含量，降低n-6/n-3比值，生產出對人類健康有益的功能性雞肉產品，且5%亞麻籽油添加量較3%添加量效果好[56]。黃玉蘭等（2006）研究發(fā)現在肉仔雞日糧中添加30g/kg的亞麻籽可使肉雞胸肉ω-3不飽和脂肪酸沉積達39.42%，腿肉沉積達39.19

49、%。由此認為，通過飼糧中添加不同脂肪酸組成的油脂可生產富含ω-3不飽和脂肪酸的雞肉[57]。 1.4.2 DHA和EPA雞蛋的開發(fā) （1）ω-3脂肪酸雞蛋的開發(fā) 由于人們日常食用的植物油主要含有飽和脂肪酸和 ω-6 PUFA，使得 ω-3 PUFA攝入相對缺乏，進而影響機體脂類代謝、生物活性物質合成及免疫功能。Naber等（1979） 研究發(fā)現，盡管飼料途徑不可以改變雞蛋中的總蛋白和脂肪的含量，但可以改變雞蛋的脂肪酸組成、礦物質和維生素的含量[58]。但由于人們擔心雞蛋的膽固醇水平過高，致使上世紀80年代以來雞蛋的消費量一直呈下降趨勢，還不到WHO推薦的最低需要量183枚/年人。后經研究

50、表明，膽固醇并不產熱，對于一個體重70kg的成年人來說，其體內約含140g膽固醇，且大部分存在于大腦中，而他每天膽固醇的需要量為1200mg，一個雞蛋僅能提供200mg的膽固醇。將ω-3多不飽和脂肪酸導人雞蛋中，不僅可以解決人類ω-3多不飽和脂肪酸攝人的不足，同時還可以降低膽固醇的增脂效應，成為有降低血脂作用的保健食品[59]。 近年來的研究表明，蛋雞日糧中添加富含ω-3不飽和脂肪酸的魚油等，可使全蛋的營養(yǎng)特性改善，為消費者提供一種較為經濟的富含ω-3不飽和脂肪酸食品，且雞蛋中的 ω- 3PUFA表現出相當的穩(wěn)定性。因此，生產和開發(fā)DHA和EPA雞蛋多不飽和脂肪酸產品成近些年的研究熱點。張欣

51、欣和錢凱先（1998），以含魚油1%- 8%的飼料飼喂商用蛋雞9周，結果顯示，在1-4周內，雞蛋蛋黃中EPA 含量有明顯下降，而DHA 含量則上升1-4倍，其中尤以添加8%的魚油組最為顯著；在5-9周內，蛋黃中EPA 含量在較低濃度范圍內波動，而DHA 則仍呈上升趨勢，說明雞蛋中DHA富集隨著魚油添加量的增加，飼喂時間的延長，而正向上升[60]。麻麗坤等（2006）分別在蛋雞日糧中添加菜油和魚油，研究日糧不同水平ω-3不飽和脂肪酸在蛋黃中的富集效應及對蛋品質的影響，結果顯示，各試驗組ω-3不飽和脂肪酸在蛋黃中的沉積量隨魚油添加時間延長而顯著提高，且魚油效果較菜油效果好[61]。以往研究多數以添

52、加魚油增加雞蛋中多不飽和脂肪酸的富集。但魚油價格昂貴且在雞蛋中產生不可去除的魚腥味，因此利用其他資源生產多不飽和脂肪酸雞蛋勢在必行。 （2）ω-3脂肪酸雞蛋代替海產品的優(yōu)越性 雞蛋作為海魚的代用品為人們提供DHA和EPA有著重大的意義。首先，雖然海魚油富含ω-3不飽和脂肪酸，但由于海魚油資源有限，只有較大的海魚才能用來提取魚油，這樣造成了魚油的價格很高，限制了它作為人類健康食品添加劑的使用。 其次，魚油本身即可作為藥品和保健品直接供人使用，再經過飼料一雞蛋一人體這一循環(huán)便失去實用價值。第三，魚油需貯存于-20℃條件下，添加魚油的飼料需現配現用；而魚油的制備還需經蒸餾加熱，在熱處理前需加入

53、抗氧化劑，以防止ω-3不飽和脂肪酸的氧化。即使如此，喂給添加魚油飼料后的雞蛋中的過氧化物含量仍顯著高于對照組。ω-3不飽和脂肪酸含有多個不飽和鍵，很容易被氧化，產生過氧化物。過氧化物一旦進入人機體后，會氧化細胞膜中的脂質，破壞細胞的正常結構，進一步誘發(fā)心血疾病并加速機體的衰老過程[58]。即使在冷凍期間，海魚所含的ω-3不飽和脂肪酸仍發(fā)生氧化，氧化物的生成量與貯藏時間成正比，在-18℃冷凍條件下過氧化物的生成量高于-40℃條件下的生成量。而且烹調過程也會導致海魚中過氧化物的生成量增加。因此，當海魚的貯藏加工條件控制不當時，不僅會導致ω-3不飽和脂肪酸損失，所產生的過氧化物還會對人體有害。Pet

54、er（2002）研究表明，每枚富營養(yǎng)雞蛋中ω-3脂肪酸的含量與冷水魚中的含量相當，說明雞蛋可以替代海魚供給DHA和EPA。而且雞蛋中ω-3不飽和脂肪酸表現出較高的穩(wěn)定性[62]。 在蛋雞飼料中添加的步魚油，得到的富含ω-3不飽和脂肪酸的雞蛋在冷藏1-4周內，其過氧化物的含量保持恒定，表明ω-3不飽和脂肪酸沒有發(fā)生過氧化反應。關于雞蛋內ω-3不飽和脂肪酸之所以穩(wěn)定的機理有多種解釋。1）蛋黃中的卵黃高磷蛋白可鰲合蛋黃中的鐵離子，從而防止鐵離子作為電子傳遞介質促進ω-3不飽和脂肪酸的氧化。2）在蛋黃低密度脂蛋白的分子外部，蛋白質和磷脂構成交織結構，使得氧分子不能進入低密度脂蛋白分子內部，保護低密度

55、脂蛋白分子內部的多不飽和脂肪酸免遭氧化破壞。3）蛋黃中過氧化物的生成速度和分解速度相等，從而可保持蛋黃中過氧化物含量恒定。 由于魚油存在的一些弊端，采用非魚油添加到飼料中生產富含DHA和EPA雞蛋就顯得十分必要。亞麻籽是首選材料。亞麻籽中含有DHA和EPA的前體α-亞麻酸，可以通過蛋雞采食后，在雞體內α-亞麻酸酶作用下生成DHA和EPA，并沉積在蛋黃中。因此，利用亞麻籽添加于蛋雞飼料中，來生產富含DHA和EPA的雞蛋，對改善雞蛋品質，提高人類健康，具有一定的實際意義。 1.5 亞麻籽的飼用價值 亞麻亦稱胡麻，為一年生草本植物，是世界十大油料作物之一，居世界油料總產量的第7位，也是我國重要

56、的油料及纖維作物，主產于我國的山西、內蒙古、寧夏、東北等地，居我國油料總產量的第4位。 無論油用亞麻還是纖用亞麻都富含油脂和蛋白，油脂含量很高，一般在30%-45%，比大豆含油率高一倍多，因而其能量含量也很高，家禽代謝能為3.75 MJ/kg，豬消化能為4.60 MJ/kg[63]。亞麻籽（linseed）為亞麻的種子，呈扁卵形，前端稍尖銳，表面平滑有光澤，一般為褐色，有堅硬的外殼，亞麻籽粗蛋白含量約為22%，主要由白蛋白和球蛋白組成，是飼料中優(yōu)質植物蛋白的來源[64]。亞麻籽中必需氨基酸組成合理，含較多的天門冬氨酸、谷氨酸、精氨酸等。亞麻籽含豐富的礦物質，鉀含量最高，與維持動物體內正常血壓

57、有關；鋅含量也較多，鈣較少，磷較多，一部分以植酸磷的形式存在。亞麻籽中B族維生素和維生素E較高，維生素E以生育酚的形式存在，是天然抗氧化劑，但維生素A、D缺乏。脫粒后的碎果皮（亞麻糠）每千克含有20克消化蛋白，也是養(yǎng)豬的好飼料。過去，只是對亞麻籽榨油后的副產品亞麻仁餅和亞麻仁粕做為一種植物性蛋白補充飼料進行利用。 近十幾年來，飼料產業(yè)以亞麻籽做為配合飼料，看重的不是它的蛋白質，而是它的脂肪性質，亞麻籽含豐富的油脂，油脂以不飽和脂肪酸居多，約占92%，其中以α-亞麻酸（ALA）為代表的ω-3系列多不飽和脂肪酸約占83%[65]，ω-6多不飽和亞油酸含量較低，飽和脂肪酸（SFA）含量也低，這是大

58、豆、棉籽、玉米和葵花籽做添加飼料所無法取代的性質。由于大多數人缺少一些必需脂肪酸而影響人類健康，這類脂肪酸目前是由深海魚油、海狗油來滿足的，其主要成分是DHA和EPA。近三十年來，歐美科學家研究證明，油用亞麻種子中富含亞麻酸（十八碳三烯酸），而亞麻酸在人體或動物體中雖不能自然生成，但人體或動物體分泌的一些酶類，卻可以將其轉化成DHA和EPA。因此，目前開發(fā)亞麻籽作飼料原料的理由，主要是為了提高蛋、乳和肉等畜產品中ω-3多不飽和脂肪酸含量，提高食品的營養(yǎng)價值；其次是提高動物自身的健康水平。研究發(fā)現，亞麻籽中還含有多種活性成分，如木酚素、亞麻膠等，其中多種成分被證實有抗癌活性，現在許多國家將亞麻籽

59、直接加入保健食品或加入動物飼料中，提高動物產品價值。另外，亞麻籽中約含亞麻膠7%-9%，可通過酶技術和變溫等高新技術工藝提取為高級食品添加劑；由于具有黏性，利于動物飼料制粒。所以，亞麻籽在人類食品和動物飼料中的應用有很大的發(fā)展前景。 亞麻籽脫脂后的副產品亞麻籽餅（粕）亦是營養(yǎng)豐富的牲畜飼料[66]，含干物質89.0-91.1%，總能16.9-18.4MJ/kg，粗蛋白質35.9-36.2%，粗纖維8.9-9.2%，鈣0.39%，磷0.87%；賴氨酸1.10%、色氨酸0.47%、半胱氨酸0.56%、蛋氨酸0.47%；胡蘿卜素0.3mg/kg、硫胺素2.6mg/kg、核黃素4.1 mg/kg、煙

60、酸39.4 mg/kg、泛酸16.5 mg/kg、膽堿1672mg/kg。但是未完全成熟的亞麻種子及其所制成的麻籽餅粕中，含有抗營養(yǎng)因子，如亞麻籽膠、植酸、變應原、生氰糖苷、胰蛋白酶抑制因子、抗維生素B6因子等，特別是其中生氰糖苷的毒性，在動物飼料中受到關注。生氰糖苷存在于亞麻籽的殼和仁中，綠色的莖葉中也含少許。亞麻籽及其榨油后的餅粕中含有生氰糖甙，主要是亞麻苦甙和少量百脈根甙。生氰糖甙本身不呈現毒性，但被動物采食后，在pH2-8、40-50℃條件下，生氰糖甙經過水解酶作用，水解產生氫氰酸（HCN），容易引起動物中毒。所以，不能過多或長期飼喂亞麻籽。亞麻籽中亞麻苦甙的含量因亞麻的品種、種子成熟

61、程度及種子含油量的不同而有差異。據報道，完全成熟的種子極少或完全不含亞麻苦甙；油用亞麻是用成熟種子作油料，其種子中亞麻苦甙含量較少；纖維用亞麻品種由于其收獲較早，所以其種子中亞麻苦甙較多。從種子含油量來看，含油量越低，其亞麻苦甙含量越高，含油量越高，則亞麻苦甙含量越低。一般采用水浸泡，加熱蒸煮的方法，去除生氰糖甙，磨碎或發(fā)酵對去除氫氰酸也有一定效果。 飼喂亞麻籽對改變動物產品脂肪酸組成的效果已得到證實，但是這方面仍然具有很大潛力，如生產功能性肉、蛋、奶，為了更好地認識亞麻籽在動物日糧中的應用，還需要進行大量的研究。 1.6 研究目的與意義 亞麻資源的利用過去多集中在其餅粕上，而對亞麻籽的

62、應用研究較少，這方面的開發(fā)潛力很大，有許多研究工作有待完成。主要問題包括：（1）至今為止，給動物飼喂亞麻籽的研究很多，但形成產品推廣的的應用研究很少，應加強其產品附加值，研究具有實際應用價值的動物產品；（2）亞麻籽的加工方法會影響ω-3脂肪酸在畜產品中的沉積效果，選擇適宜的加工方法也是要研究的一個問題；（3）由于亞麻籽中有毒物質的存在，添加過多會影響動物的健康，所以確定不同動物日糧中的適宜添加量也是要解決的一個問題。 我國亞麻資源豐富，但亞麻籽主要作榨油用，經濟價值有限，未能引起足夠的重視。隨著亞麻籽活性成分的深入研究，人們認識的進一步深化和生活水平的提高，國內功能食品和保健品的消費群體將逐

63、步增大，亞麻籽保健功能食品商機無限。若把亞麻籽中的這些生理活性物質在藥品、保健品、食品及食品添加劑、飼料等方面開發(fā)利用，從中得到經濟價值、營養(yǎng)價值、藥用價值較高的保健品和藥用功能性產品，其經濟附加值可大大提高，也會產生巨大的經濟效益和社會效益。我國是亞麻生產大國，大力發(fā)展以亞麻籽為原料的深加工系列生產，提高產品附加值，有著重要的意義。 本研究的主要目的為：（1）在蛋雞飼料中添加不同比例的亞麻籽，探討不同含量亞麻籽對蛋雞生產性能的影響；（2）對雞蛋蛋黃內二十二碳六烯酸DHA和二十碳五烯酸EPA含量進行測定，研究不同劑量亞麻籽對蛋黃中不飽和脂肪酸含量的影響，并確定蛋雞飼料中亞麻籽的最佳添加劑量。

64、 黑龍江八一農墾大學碩士學位論文 第二章 亞麻籽營養(yǎng)成分分析 第二章 亞麻籽中營養(yǎng)成份分析 2.1 材料 亞麻籽，購自哈爾濱市呼蘭區(qū)。 脂肪酸甲脂化試劑，購自Sigma公司。 2.2 方法 2.2.1 亞麻籽基本營養(yǎng)成份的測定 (1)水分及干物質（DM）含量的測定 將折好的空濾紙包放入干凈鋁盒中，置于烘箱中1052℃烘2h，取出，在干燥器中冷卻30min，取出稱重，準確至0.0002g；再置于烘箱中1052℃烘30-60min，在干燥器中冷卻30min，稱重，直至兩次稱重之差小于0.000

65、5，為恒重。用已恒重的鋁盒中的紙包稱取試樣2g左右，準確至0.0002g，不蓋蓋，在1052℃烘箱中烘8h后取出，在干燥器中冷卻30min，稱重。遺失的重量即為水分含量。做平行分析，取平均值。 W1 - W2 W1- W0 水分（%）= 100 式中: W1——105℃烘干前試樣及鋁盒重量（g） W2——105℃烘干后試樣及鋁盒重量（g） W0——已恒重的鋁盒重量（g） (2)粗脂肪（EE）測定： 稱取試樣1g左右，準確至0.0002g，用濾紙包好，放在在1052℃烘箱中烘干2h，干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干

66、30min，冷卻稱重，兩次稱重之差小于0.0005g為恒重。將恒重后的樣品放入索氏抽提瓶中，加無水乙醚，淹沒濾紙包上1-2cm處，浸泡12h，60-75℃的水浴加熱，使乙醚回流，抽提6-8h結束，至從抽提管回流的乙醚無色。將抽提后的濾紙包取出，置干燥通風處揮發(fā)乙醚過夜，放回到原來的鋁盒中，1052℃烘干8h，至恒重，鋁盒與濾紙包的前后總重量之差即為粗脂肪的含量。 W1 - W2 W EE（%）= 100 W—— 風干試樣重量（g） W1——已恒重的測完水分的鋁盒濾紙包總重量（g） W2——已恒重的抽提完脂肪的鋁盒濾紙包總重量（g） (3)粗蛋白測定（CP）： 采用凱氏定氮法測定樣品中粗蛋白的含量，具體操作為：取試樣0.2g左右（準確至0.0002 g），倒入消化管底部，加入一勺催化劑（硫酸銅與硫酸鉀以1：15比例混合），加濃硫酸6mL，盡量使消化管壁無樣品殘留。同時用蔗糖代替試樣做空白。濃硫酸浸泡試樣過夜，然后在消煮爐上消化至透徹透明呈亮綠色。消化后樣品中含氮物質生成硫酸銨成為消化液