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1、
第二部分 酶的應用 實驗6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測
一、酶與固定化酶
1.酶:活細胞產(chǎn)生的具有催化作用的一類有機物,它是生物體內各種化學反應的催化劑。
2.固定化酶:將________的酶用________或________方法________,使之成為________而又有________。
3.將酶改造成固定化酶的原因是:
由于酶________,且不利于________,所以要將酶改造成固定化酶。
4.酶固定化的方法有:
________法、________法、________法和________法等。本實驗用的是________法。
5.固定化酶作用
2、的機理:
將固定化酶________,當________時,在________的作用下________。
答案:2.水溶性 物理 化學 固定在某種介質上 不溶于水 酶活性的制劑
3.在水溶液中很不穩(wěn)定 工業(yè)化使用
4.吸附 共價偶聯(lián) 交聯(lián) 包埋 吸附
5.裝柱 底物經(jīng)過該柱 酶 轉變?yōu)楫a(chǎn)物
二、淀粉水解的過程及其在淀粉指示劑下的顏色反應:
答案:糊精 藍 紅 不顯
三、α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用檢測的實驗
1.實驗目的:
(1)制備________。
(2)進行________的測試。
2.實驗原理:
將________酶固定在________上,一定
3、濃度的淀粉溶液經(jīng)過________后,可使淀粉水解成________。用________測試,若流出物呈________色,表明有________生成。
3.本實驗使用的酶及特性:
本實驗使用的酶是________酶,其作用的最適宜pH為________,最適宜溫度為________。
4.實驗設備及用品:
5 mL塑料注射器、50 mL燒杯、滴管、自行車用氣門芯及夾子、注射器架、試管或微量離心管3支。
5.實驗材料及其制備:
(1)材料:固定化的α淀粉酶、可溶性淀粉酶、5 mol/L KI—I2溶液。
(2)部分材料的制備:
▲α淀粉酶的固定化:
在燒杯中將5 mg____
4、____溶于4 mL蒸餾水中
(由于________,可能有些不溶物)
↓
再加入5g________,不時攪拌30 min
↓
30 min后將上述溶液裝入1支注射器中
(該注射器的下端接有________并用________封住)
石英砂體積約4 mL
↓
用________倍體積的蒸餾水________此注射器以
除去__________________,流速為1 mL/min
▲可溶性淀粉溶液:取________mg可溶性淀粉溶于100 mL________中,攪拌均勻。
▲可溶性淀粉溶液:稱取0.127 g________和0.83 g________。加蒸餾
5、水100 mL,完全溶解后裝入滴瓶中。
6.實驗步驟:
(1)淀粉溶液流經(jīng)固定化酶柱
將灌注了________的注射器放在注射器架上,用滴管加________溶液,使該溶液以________mL/min的流速過柱。
(2)接取流出物
待從固定化酶柱中流出________mL的溶液后,接收________mL流出液。
(3)流出物鑒定
在流出物中加入________溶液,觀察顏色。用水稀釋________倍后再觀察顏色。
(4)洗滌、保存固定化酶柱。
實驗后,用________倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱。放置在________℃冰箱中保存。
(5)幾天后取出冰箱中該固定化酶柱,
6、重復實驗,觀察結果。
7.實驗結果的比較:
答案:1.(1)固定化α淀粉酶 (2)淀粉水解
2.α淀粉 石英砂 固定化酶柱 糊精 淀粉指示劑
紅 糊精
3.枯草桿菌的α淀粉 5.5~7.5 50~75 ℃
5.實驗材料及其制備:
(2)α淀粉酶 酶不純 石英砂 氣門芯 夾子 10
洗滌 未吸附的游離淀粉酶 50 熱水 碘 碘化鉀
6.(1)固定化酶 淀粉 0.3 (2) 5 0.5 (3)KII2
1 (4)10 4
7.藍 紅 紅
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