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1、文件編號：LAB— OP- MY020 第1頁，共4頁 版本：A/0 生效日期：2008-02-01 XXXXXX 醫(yī)院 檢驗科免疫室 分析項目作業(yè)指導書 Elecsys E 170/E 411 肌紅蛋白(Myoglobin) 1. 分析原理 采用雙抗夾心法原理，整個過程 18分鐘完成。 ?第1步：15『標本、生物素化的抗肌紅蛋白單克隆抗體和釘（ Ru）標記的抗肌紅蛋白單克隆抗體混勻，形成夾心復合物。 ?第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應結(jié)合到微粒上。 ?第3步：反應混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)

2、合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光， 通過光電倍增管進行測定。Elecsys自動將標本產(chǎn)生的光電信號與從肌紅蛋白定標液得出的 Cutoff值相比較。 2. 標本要求 血清：使用標準取樣試管或含分離膠的試管采集。 血漿：肝素（鋰、鈉、銨）、 EDTA-K3、枸櫞酸鈉抗凝均可。 標本在2— 8度可穩(wěn)定1周，-20度可穩(wěn)定3個月。只可凍融一次。含沉淀的標本使用前需離心。 標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前的溫度應與室溫平衡；放入儀器后應在 2小時內(nèi)測定以避免 蒸發(fā)的影響。 3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料 采用羅氏原裝配套試劑。 試劑：

3、 M 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋）， 1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，含防腐劑。 R1:生物素化的抗肌紅蛋白單克隆抗體（灰蓋）， 1瓶，10ml,濃度1.75mg/l，磷酸緩沖液85mmol/l，pH6.5,疊氮鈉＜0.1%, 含防腐劑。 R2： Ru（bpy）32+標記的抗肌紅蛋白單克隆抗體（黑蓋）， 1瓶，10ml。濃度1.75mg/l，磷酸緩沖液85mmol/l，pH 8.5,疊氮 鈉＜0.1%,含防腐劑。 校準品： Cal 1陰性定標液（白蓋），2*1ml血清,含防腐劑 Cal 2陽性定標液（黑蓋），2*1ml血清，含防腐劑 質(zhì)控品： Elecsys

4、 肌紅蛋白質(zhì)控品 1 和 2 （PreciControl Cardica II ）貨號 03530477 其他所需材料： Elecsys2010/cobas e 411 分析儀需要 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell ）貨號 11662988 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell ）貨號 11662970 Elecsys 添加劑液（SysWash 貨號 11930346 Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（Adapter for SysClean） ）貨號 11933159 Elecsys 2010 反應杯（Assay Cup）貨號 11706802 Elecs

5、ys 2010 吸樣頭（Assay Tip）貨號 11706799 E170 /cobas e 601 分析儀需要 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell M ）貨號 12135019 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell M ）貨號 12135027 Elecsys系統(tǒng)緩沖液/測量池清洗液預熱杯（PC/CC-Cup貨號03023141 探針沖洗液，12x70ml,用于最終保養(yǎng)及完成試劑吸樣后沖洗，貨號 03005712 Elecsys 反應杯 / 吸樣頭盒（AssayCups/AssayTips Combimagazine M） 貨號 12102137 Elec

6、sys E 170/E 411 Elecsys 廢物盒（wasteliner）貨號 03023150 Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（SysClean Adapter M）） 貨號 03027651 各種分析儀均適用的材料 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號 11298500 4. 儀器和校準 使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn) Elecsys 2010/E 170/E 411 全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀 儀器校準：每批肌紅蛋白試劑盒必須用新鮮試劑和肌紅蛋白 Cal 1,Cal 2 定標一次。另外，以下情況需要再次定標： Elecsys2010 : ? 一個月

7、（同一批號試劑） ? 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時；根據(jù)規(guī)定進行多次標定。 5. 操作步驟（以E 170為例） 5.1校準操作步驟： 在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在 Application — Calib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時， 只需在定標菜單Calibration 中進行即可。3.2進入Calibration —Status菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點 定標（BLANK建）或兩點定標（TWGPOINT鍵）、跨距定標（SPAN建）、多點定標（FULL鍵），再選擇其它

8、項目進行相應選擇，最 后點SAVE將定標物放入在 Calibration — Calibrator 中定義好的位置，點 Start，再點Start，儀器開始定標。 在Calibration —Status菜單中看定標結(jié)果，點 Calibration Result 鍵看定標結(jié)果，點 Reaction Monitor 鍵看每個定標 物的反應曲線。 5.2樣本檢測程序： 單個樣本輸入，在主菜單下選擇 Workplace- Testslection ，在Sequenee No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個 項目或組合項目點 SAVE建，樣本號自動累加。 批量常規(guī)標本的輸入，在主菜

9、單下選擇 Workplace- Testslection ，在Sequenee No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所 需做的單個項目或組合項目點 REPEAT輸入該批標本的最后一個標本號，點 0K即可。 進樣分析，將標本按在 Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi) ，按START鍵，輸入該批上機標 本的起始標本號，再點 START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。 6. 質(zhì)量控制 用Elecsys肌紅蛋白質(zhì)控品1和2 （PreciControl ）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔 期應適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在

10、確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應采取校正措施。 7. 計算方法 儀器會自動根據(jù)Cal 1和Cal 2的測定值計算Cut-off值。每一個標本的結(jié)果以有反應性或無反應性以及 Cutoff指數(shù)形式（標 本信號/ Cutoff ）報告。 8. 參考范圍 數(shù)目 2.5-97.5 百分位數(shù) 男性 1030 28-72ng/ml 女性 1132 25 — 58ng/ml 如有必要，各實驗室應自己測定一個參考值 。 9. 分析性能 準確性： 以下列出了此試劑盒在Elecsys儀器上的表現(xiàn)。每個實驗室結(jié)果會不同 Elecsys E 170/E 411 重復

11、性測定采用的是美國臨床化學實驗室標準委員會修訂稿 EP5-A標準方法進行評估，使用了 Elecsys試劑及人血清池、質(zhì) 控進行測定：連續(xù)測定10天，每天測定6次（n = 60次）; E170的批內(nèi)重復性共測定了 21次。結(jié)果如下： Elecsys 1Q1Q/2Q1Q lritr?-a$$3y precision Tptsi precision Sample Mean n^ml so ng/ml %CV SO 強CV Human serunt 1 366 931 0.65 1.fl Human serum 2 81.1 1.50 1,8 4.37 5

12、.4 Human serum 3 1558 52.9 3.4 76.0 PreciControl Care 1 91 0 1.21 1.3 3.96 4.3 PreciControl Card 2 739 14.0 1.9 31.7 4.3 E170 Intra-assay precision Tatal precisinn Sample Mean ng

13、uman serum 2 314 5.S1 IS 317 16.5 5.2 Human serum 3 23S9 62.1 26 2390 169 7,1 PreciContml Card 1 91 5 1.5fi 1.7 92 fi 3R1 3.9 PreciConlrol Card 2 1212 1.6 1266 55.2 4.4 分析靈敏度（最低檢測限）：＜ 21ng/ml,分析靈敏度代表了能與零區(qū)別的最低的肌紅蛋白值 10. 干擾因素 該方法不受黃疸（膽紅素 ＜65mg/dl ）、溶血（血紅蛋白＜1.4g/dl ）、脂血

14、（脂質(zhì)＜2200mg/dl ）和生物素＜50ng/ml干擾。 接受高劑量生物素（＞5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素 8小時后才能采血。不受類風濕因子干擾 （1500U/ml ）。50種常用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾作用。肌紅蛋白濃度高到 30, 000ng/ml也不出現(xiàn)鉤狀效應。接受過 小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人可能會出現(xiàn)假陽性反應。肌紅蛋白測定結(jié)果應結(jié)合病人的病史、臨床癥狀和其他檢查結(jié)果 進行診斷。 11. 臨床意義 肌紅蛋白是一種細胞漿蛋白質(zhì)，存在于心臟和骨骼的橫紋肌中，具有轉(zhuǎn)運氧氣和貯存氧氣的功能，分子量 17.8kD，由于分 子量較小，當肌細胞受損時，肌紅蛋

15、白很快被釋放進入血循環(huán)中。檢測血清肌紅蛋白是診斷急性心肌梗死，早期再度梗死 以及觀察溶栓治療后成功再灌注的重要指標。癥狀發(fā)生后約兩小時，肌紅蛋白水平即可升高，因此肌紅蛋白被認為是心肌 梗死很早期的標志物。梗死發(fā)生后 4-12小時，肌紅蛋白的血濃度達到最高值。 24小時后恢復到正常值水平。肌紅蛋白升 高也可見于骨骼肌損傷和腎功能極度衰竭的病人。 Elecsys肌紅蛋白采用雙抗夾心法原理和兩種不同的抗肌紅蛋白單克 隆抗體。 12. 參考文獻 XXXXXX 醫(yī)院 檢驗科免疫室 分析項目作業(yè)指導書 Elecsys E 170/E 411 文件編號：LAB— OP- MY020 第4

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