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1、浙江大學(xué)2001年攻讀碩士學(xué)位研究生入學(xué)考試題 考試科目:生物化學(xué),編號(hào)555 注意:答題必須寫(xiě)在答題紙上,寫(xiě)在試卷或草稿紙上均無(wú)效 一 是非題1/30 1 酶反應(yīng)的專一性取決于其輔助因子的結(jié)構(gòu) 2 肽酰轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)合成中催化肽鍵的生成和酯鍵的水解 3 E.coli 連接酶摧化兩條游離單鏈DNA分子形成磷酸二酯鍵 4 通過(guò)檸檬酸途徑將乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至胞液中,同時(shí)可使NADH上的氫傳遞給NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比纈氨酸強(qiáng) 6 必需氨基酸是指合成蛋白質(zhì)必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破壞者 8 維系蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)最重要的作用

2、力是氫鍵 9 在DNA變性過(guò)程中總是G-C對(duì)豐富區(qū)先解鏈 10 真核細(xì)胞中DNA只存在于細(xì)胞核中 11 DNA雙螺旋的兩條鏈方向一定是相反的 12 酶影響其催化反應(yīng)的平衡 13 酶促反應(yīng)的米氏常數(shù)與催化的底物無(wú)關(guān) 14 維生素E是一種天然的抗氧化劑 15 維生素B1的輔酶形式是TPP 16 ATP是體內(nèi)能量的儲(chǔ)存形式 17 糖酵解過(guò)程無(wú)需氧氣的參與 18 膽固醇是生物膜的主要成分,可調(diào)節(jié)生物膜的流動(dòng)性 19 蛋白質(zhì)的生理價(jià)值主要取決于必需氨基酸的種類,數(shù)量和比例 20 磷酸吡哆醛只作為轉(zhuǎn)氨酶的輔酶起作用 21 DNA復(fù)制時(shí),后滯鏈需多個(gè)引物

3、 22 絕緣子和增強(qiáng)子一樣都屬于順式作用元件 23 PCR是包括變性,復(fù)性和延伸三個(gè)步驟的循環(huán)反應(yīng) 24 Sanger曾兩獲諾貝爾獎(jiǎng) 25 核糖體上有三個(gè)與tRNA有關(guān)的位點(diǎn):A位點(diǎn),P位點(diǎn),E位點(diǎn) 26 生長(zhǎng)激素釋放抑制因子是一個(gè)14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反應(yīng)是脂肪酸-β氧化反應(yīng)的逆反應(yīng) 28 鐮刀型貧血癥患者血紅蛋白與正常人的血紅蛋白在氨基酸組成上只有2個(gè)殘基有差別 29 地球上所有生物中存在的蛋白質(zhì)和核酸的種類總數(shù)都超過(guò)1億種 30 中國(guó)科學(xué)家在今年完成了人類基因組1%的測(cè)序任務(wù) 二 寫(xiě)出下列物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)式1/6 1 Thr 2 D-核糖

4、 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三 名詞解釋4/24 1 反密碼子 2 操縱基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折疊酶 5 共價(jià)調(diào)節(jié) 6 Humen Genome Project 四 綜合題10/40 1 試表述Glu經(jīng)脫氨基,有氧氧化等途徑徹底分解成NH3 , CO2, 和H2O 時(shí)的代謝路線,要 求用箭頭表示所經(jīng)過(guò)的主要中間產(chǎn)物.計(jì)算1摩爾Glu共可產(chǎn)生多少摩爾的NH3,CO2,ATP? 2 以血紅蛋白為例說(shuō)明蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)的含義,比較血紅蛋白與肌紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能的異 同 3 請(qǐng)對(duì)中心法則加以闡述

5、4 凝膠過(guò)濾是分離蛋白質(zhì)混合物最有效的方法之一,請(qǐng)說(shuō)明其工作原理并簡(jiǎn)述用該法分離 蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作步驟 浙江大學(xué)2002年攻讀碩士學(xué)位研究生入學(xué)考試題 考試科目:生物化學(xué),編號(hào)570 注意:答題必須寫(xiě)在答題紙上,寫(xiě)在試卷或草稿紙上均無(wú)效 一 是非題1/20 1 所謂肽單位就是指組成蛋白質(zhì)的氨基酸殘基 2在競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑存在的情況下,即使加入足夠量的底物,酶仍不能達(dá)到其催化的最大反應(yīng) 速度 3 一級(jí)結(jié)構(gòu)決定空間結(jié)構(gòu),所以蛋白質(zhì)合成中新生肽鏈的折疊無(wú)須其他蛋白質(zhì)的幫助. 4 Sanger反應(yīng)(二硝基氟苯法)用以鑒定多肽鏈羧基末端氨基酸,而Edman反應(yīng)

6、(苯異硫氰酸 酯法)則用以鑒定多肽鏈氨基末端氨基酸. 5 與膽固醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)最相近的維生素是維生素B12. 6 在某些生物中,RNA也可以是遺傳信息的基本攜帶者 7 生長(zhǎng)激素釋放抑制因子是一個(gè)14肽 8 維生素B1的輔酶形式是TPP 9 地球上所有生物中存在的蛋白質(zhì)和核酸的種類總數(shù)都超過(guò)1億種 10 腎上腺素和胰高血糖素都通過(guò)cAMP很快地對(duì)機(jī)體組織發(fā)揮作用 11 呼吸鏈電子載體是按照其標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)能逐步下降而氧化還原電勢(shì)逐步增加的方向排列的 12 CO對(duì)氧化磷酸化的影響主要是抑制ATP的形成過(guò)程,但不抑制電子傳遞過(guò)程 13 花生四烯酸廣泛存在與植物中,它是哺

7、乳動(dòng)物的必需脂肪酸 14 即使在饑餓狀態(tài)下,肝臟也不利用酮體作為燃料分子,而大腦組織在血糖供應(yīng)不足時(shí)會(huì) 利用酮體作為燃料分子供能 15 不同生物對(duì)氨基氮的排泄方式不同,如魚(yú)類以氨的形式直接將氨基氮排出體外;鳥(niǎo)類以 尿酸形式,植物和動(dòng)物以尿素形式將氨基氮排出體外 16 紫外輻射引起的DNA損傷可通過(guò)光復(fù)活作用修復(fù). 光復(fù)活酶雖然在生物界分布很廣,從 低等單細(xì)胞生物直到鳥(niǎo)類都有,但高等哺乳類中卻沒(méi)有 17 逆轉(zhuǎn)錄酶存在與所有RNA病毒中,在RNA病毒復(fù)制中起作用 18 遺傳密碼字典在生物界并非完全通用,像原生動(dòng)物纖毛蟲(chóng)就有例外 19 糖基化是真核生物蛋白質(zhì)修飾的

8、一種重要方式,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體兩種亞細(xì)胞器都能 對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行糖基化修飾 20 真核生物中同一轉(zhuǎn)錄單位可以通過(guò)不同的拼接而產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)合成模板mRNA 二 用化學(xué)結(jié)構(gòu)式完成下列酶促反應(yīng)4/20 1異檸檬酸裂解酶 2 丙酮酸羧化酶 3 磷酸戊糖異構(gòu)酶 4 烯脂酰輔酶A水化酶 5 丙氨酰tRNA合成酶 三 綜合題10/60 1 什么是蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)?穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要作用力是什么?多肽鏈中存在的脯氨酸 對(duì)α螺旋的形成有何影響,為什么?哪種蛋白質(zhì)完全由α螺旋構(gòu)成? 2 電泳是分離生物大分子的主要方法之一,簡(jiǎn)述其原理;SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可以測(cè)定 蛋白質(zhì)

9、的分子量,其原理是什么? 分子量不同的蛋白質(zhì)在SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷 移率與其分子量有什么關(guān)系? 3 何謂酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)?底物濃度,溫度和PH值對(duì)酶促反應(yīng)速度各有什么影響?試分析之. 如果希望反應(yīng)初速度達(dá)到其最大速度的90%,底物濃度應(yīng)為多大? 4 何謂核酸變性?引起核酸變性的因素有哪些?何謂DNA的熔解溫度(Tm)?其大小與哪些因 素有關(guān)? 5從結(jié)構(gòu)和功能兩大方面比較E.coli DNA 聚合酶III和RNA聚合酶 6 Jacob 和Monod在上個(gè)世紀(jì)60年代初提出乳糖操縱子模型,開(kāi)創(chuàng)了基因表達(dá)調(diào)節(jié)研究的 新領(lǐng)域,具有劃時(shí)代意義.請(qǐng)你試述乳糖操縱子理

10、論. 浙江大學(xué)2003年攻讀碩士學(xué)位研究生入學(xué)考試題 考試科目:生物化學(xué) 注意:答題必須寫(xiě)在答題紙上,寫(xiě)在試卷或草稿紙上均無(wú)效 一 是非題1/20 1 氧化磷酸化作用是ATP的生成基于與相偶聯(lián)的磷酸化作用.( ) 2 酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì).( ) 3 多肽鏈結(jié)構(gòu)中,一個(gè)氨基酸殘基就是一個(gè)肽單位.( ) 4 FMN和FAD的組成中有核黃素.( ) 5 在細(xì)菌的復(fù)制中起主要作用的是DNA聚合酶I( ) 6 DNA變性后其粘度增大( ) 7乙醛酸循環(huán)在所有的高等植物中都存在.( ) 8 EMP途徑本身只產(chǎn)生還原劑,而不產(chǎn)生高能中間產(chǎn)物.( ) 9酶促反應(yīng)的能量效應(yīng)

11、是降低反應(yīng)的活化能.( ) 10 與膽固醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)最相近的維生素是維生素B12.( ) 11 CoQ只能作為電子傳遞的中間載體.( ) 12 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性主要來(lái)自堿基對(duì)之間的氫鍵( ) 13 組成蛋白質(zhì)的所有氨基酸中,由于含有的α-碳原子屬于不對(duì)稱碳原子,因此都具有旋 光性.( ) 14 mRNA的3`端polyA結(jié)構(gòu)是由DNA的非編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄的.( ) 15 糖酵解的限速酶為丙酮酸激酶.( ) 16 乙酰輔酶A是進(jìn)入TCA循環(huán)還是生成酮體,主要由草酰乙酸濃度調(diào)控.( ) 17 E.coli RNA 聚合酶的 σ亞基與轉(zhuǎn)錄的終止識(shí)別有關(guān).( ) 18 氧化還原電

12、對(duì)中,電子從電勢(shì)較低的電對(duì)流向電勢(shì)較高的電對(duì),這是自由能降低的現(xiàn)象 .( ) 19 葡萄糖和果糖都具有還原性.( ) 20 如果加入足夠量的底物,即使有競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑存在,酶催化的最大反應(yīng)速度Vmax是可以 達(dá)到的( ) 二 寫(xiě)出下列物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式2/10 1 Ser 2 U 3 草酰乙酸 4 ATP 5 D-glucose 三 寫(xiě)出下列酶催化的生化反應(yīng)式( 不要求寫(xiě)結(jié)構(gòu)式)3/30 1 磷酸果糖激酶 2 磷酸甘油變位酶 3 丙酮酸脫氫酶系 4 順烏頭酸酶 5 異檸檬酸裂解酶 6 脂酰輔酶A脫氫酶 7 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 8 鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶 9 DNA合成酶 10 氨酰tRNA合

13、成酶 四 綜合題15/90 1 簡(jiǎn)述SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理,你使用該技術(shù)分離和檢測(cè)過(guò)何種物質(zhì)?主要操作步驟有哪些? 2 質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體,為獲得某質(zhì)粒(如pUC18)DNA,請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)過(guò)程(步驟). 3 談?wù)勀闼私獾纳锘瘜W(xué)近年來(lái)的新進(jìn)展. 4 DNA雙螺旋模型是哪年由誰(shuí)提出的?簡(jiǎn)述其基本內(nèi)容.為什么說(shuō)該模型的提出是分子生物學(xué)發(fā)展史上的里程碑,具有劃時(shí)代的貢獻(xiàn)? 5 何謂變性,那些因素可以引起蛋白質(zhì)的變性?何謂別構(gòu)(變構(gòu))?舉一例說(shuō)明. 6 試述三羧酸循環(huán)是如何溝通糖類,脂類和蛋白質(zhì)三大有機(jī)物的代謝的? 浙江大學(xué)2004年攻讀碩士學(xué)位研

14、究生入學(xué)考試題 考試科目:生物化學(xué) 名詞解釋50) 1 埃德曼降解 2 抗體 3 誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō) 4 熱力學(xué)第二定律 5 補(bǔ)救途徑 6 荷爾蒙 7 競(jìng)爭(zhēng)性抑制 8 細(xì)胞膜 9 DNA聚合酶 10 基因表達(dá) 問(wèn)答題: 1 根據(jù)國(guó)際分類法將酶分成哪幾大類,分別敘述它們的酶反應(yīng)特征 (15) 2 對(duì)生物體轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的特征進(jìn)行說(shuō)明比較 (15) 還有幾份數(shù)學(xué)試卷,可不知道怎么上傳壓縮文件,如果想要,望告之方法 3 敘述基因文庫(kù)和cDNA文庫(kù)的制作步驟并進(jìn)行它們的特征比較 (20) 4 用圖表示說(shuō)明生物體內(nèi)三羧酸循環(huán)ATP產(chǎn)生的途徑和它們的調(diào)控機(jī)理 (20) 5 比

15、較說(shuō)明SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺電泳)和瓊脂糖凝膠電泳的物質(zhì) 分離原理和特點(diǎn) (30) 2004浙江大學(xué)分子試題 1 闡述PCR技術(shù)原理 (15) 2 描述一種研究基因表達(dá)的方法 (15) 3 闡述蛋白質(zhì)生物合成途徑 (25) 4 闡述一條真核細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(從信號(hào)接受到調(diào)控基因表達(dá)) (25) 5 闡述一條反向遺傳克隆功能基因的途徑 (20) 6 A,B和C三個(gè)基因都決定矮牽?；ǖ幕ㄉ?當(dāng)基因型為A-B-C-時(shí)表型為紅色,其余為白 色.AaBbCc的個(gè)體與三種純系(系1系2和系3)雜交.分別的紅色:白花1:3,1:7 和1:1的分離比.問(wèn):系1和系2雜交,F1

16、基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何 系3和系2雜交,F1基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何 (要寫(xiě)出分離比) (25) 7 什么是染色體重排和基因重排 它們?cè)诎l(fā)育中有和作用 它們?cè)谶M(jìn)化中有和作用(25) 06浙江大學(xué)分子生物學(xué)試卷 一、名詞解釋：(25%) 1、RFLP:限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，是由DNA變異(產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)或消除原有的酶切位點(diǎn))導(dǎo)致在限制性核酸內(nèi)切酶酶切時(shí)產(chǎn)生不同的長(zhǎng)度片段?？山柚鶶outhern Blotting或PCR的方法進(jìn)行檢測(cè)。 2、SSR：簡(jiǎn)章序列重復(fù)多態(tài)性，引物是根據(jù)微衛(wèi)星DNA重復(fù)序列兩翼的特定短序列設(shè)計(jì)，用來(lái)擴(kuò)增重復(fù)序列本身。

17、由于重復(fù)的長(zhǎng)度變化極大，所以是檢測(cè)多態(tài)性的一種有效方法。其特點(diǎn)包括：一般檢測(cè)到的是一個(gè)單一的多等位基因位點(diǎn)，共顯性遺傳，故可鑒別雜合子與純合子；得到的結(jié)果重復(fù)性很高。 3、EST：表達(dá)序列標(biāo)簽，是指從不同的組織構(gòu)建的cDNA文庫(kù)中，隨機(jī)挑選不同的克隆，進(jìn)行克隆的部分測(cè)序所產(chǎn)生的cDNA序列。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步，使人們?cè)絹?lái)越相信，大規(guī)模地產(chǎn)生EST，結(jié)合生物信息學(xué)的手段，將為人們提供一種快速有效的發(fā)現(xiàn)新基因的方法。 4、STS：序列標(biāo)簽位點(diǎn)，是由特定引物序列所界定的一類標(biāo)記的統(tǒng)稱，短的在基因組上是可以被唯一操作的序列，因而可以確定在物理圖譜上的特定位置。 5、CAP: CAP即分解代

18、謝物基因活化蛋白是一種激活蛋白，因?yàn)榧?xì)菌的許多啟動(dòng)子為弱啟動(dòng)子，本身與RNA聚合酶的作用較弱，在有CAP蛋白這類激活蛋白存在下，可使RNA聚合酶與啟動(dòng)子的親和力增強(qiáng)，CAP蛋白的活性強(qiáng)烈依賴cAMP。 6、AFLP：擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性，其特點(diǎn)是把RFLP和PCR結(jié)合了起來(lái)。其基本步驟是：把DNA進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切，然后選擇特定的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增(在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補(bǔ)的但3?端有幾個(gè)隨機(jī)選擇的核苷酸的引物進(jìn)行特異PCR擴(kuò)增，只有那些與3?端嚴(yán)格配對(duì)的片段才能得到擴(kuò)增)，再在有高分辨力的測(cè)序膠上分開(kāi)這些擴(kuò)增產(chǎn)物，用放射性法、熒光法或銀染染色法均可檢

19、測(cè)之。 7、SNP：?jiǎn)魏塑账岫鄳B(tài)性，是一種較為新型的分子標(biāo)記，其依據(jù)的是一位點(diǎn)的不同等位基因之間常常只有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的差異，因此在分子水平上對(duì)單個(gè)核苷酸的差異進(jìn)行檢測(cè)是很有意義的。 8、FISH：熒光原位雜交技術(shù)，是一種利用非放射性的熒光信號(hào)對(duì)原位雜交樣本進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。它將熒光信號(hào)的高靈敏度、安全性，熒光信號(hào)的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來(lái)，通過(guò)熒光標(biāo)記的DNA探針與待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行辨別和計(jì)數(shù)，從而對(duì)染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)和診斷，為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依據(jù)。 9、Genome：基因組，有機(jī)體或細(xì)

20、胞中的所有DNA，包括核中的染色體和線粒體中的DNA。 10、RNA in situ hybridization：RNA原位雜交，是利用cDNA為探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的mRNA鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置，是檢測(cè)基因組織特性表達(dá)的常用方法。 11、單克隆抗體：每個(gè)B淋巴細(xì)胞有合成一種抗體的遺傳基因。動(dòng)物脾臟有上百萬(wàn)種不同的B淋巴細(xì)胞系，含遺傳基因不同的B淋巴細(xì)胞合成不同的抗體。當(dāng)機(jī)體受抗原刺激時(shí)，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個(gè)具有不同基因的B細(xì)胞。被激活的B細(xì)胞分裂增殖形成該細(xì)胞的子孫，即克隆由許多個(gè)被激活B細(xì)胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多種抗體。如果能選出一個(gè)制造一種專一抗體的細(xì)胞

21、進(jìn)行培養(yǎng)，就可得到由單細(xì)胞經(jīng)分裂增殖而形成細(xì)胞群，即單克隆。單克隆細(xì)胞將合成一種決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。 12、基因芯片：所謂基因芯片，是指將大量探針?lè)肿庸潭ㄓ谥С治铮?，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。由于用該技術(shù)可以將極其大量的探針同時(shí)固定于支持物上，所以一次可以對(duì)大量的DNA分子或RNA分子進(jìn)行檢測(cè)分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交，技術(shù)復(fù)雜、自動(dòng)化程度低、檢測(cè)目的分子數(shù)量少、效率低，等不足，而且，通過(guò)設(shè)計(jì)不同的探針陣列，，用一定的分析方法，還可以用于序列分析，稱作雜交測(cè)序。 二、描述cDNA文庫(kù)構(gòu)建原理與方法（25%）：（1）cDNA

22、獲得方法，（2）克隆方法，（3）文庫(kù)質(zhì)量定義。 答： cDNA：以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)的DNA(complementary DNA，cDNA)，再?gòu)?fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受菌體，擴(kuò)增為cDNA文庫(kù)(cDNA library)，然后再采用適當(dāng)方法從cDNA文庫(kù)種篩選出目的cDNA。與基因組DNA文庫(kù)類似，由總mRNA制作的cDNA文庫(kù)包括了細(xì)胞全部mRNA信息，自然也含有我們感興趣的編碼cDNA。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)蛋白質(zhì)的編碼基因幾乎都是這樣分離的。 （1） cDNA獲得方法：①Total RNA的提取；②mRNA的分離；③cDNA雙鏈合成：Su

23、perscipt II—RT合成第一鏈，cDNA第二鏈的合成，雙鏈cDNA末端補(bǔ)平，EcoR I adaptor 加接，雙鏈cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切，膠回收cDNA。 （2） 克隆方法：①載體制備：pBlueScriptII的提取，pBlueScriptII的雙酶切消化，載體去磷酸化，載體效率檢測(cè)；②cDNA雙鏈和載體的連接：連接，檢測(cè)（PCR方法）；③電轉(zhuǎn)化：電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備，連接產(chǎn)物純化，電轉(zhuǎn)化；④快速鑒定、菌落PCR⑤pBlueScript cDNA文庫(kù)擴(kuò)增。 （3） 文庫(kù)質(zhì)量定義：評(píng)價(jià)一個(gè)文庫(kù)是否有實(shí)用價(jià)值主要在于文庫(kù)的含量和插入片段的大小兩個(gè)方面。所構(gòu)建

24、的文庫(kù)中必須有足夠多的克隆數(shù), 這樣才能確保基因組cDNA 中的每一個(gè)序列至少有一個(gè)拷貝存在于重組文庫(kù)中, 為達(dá)到這一要求, 文庫(kù)的容量應(yīng)不小于1.7×105 , 同時(shí)為保證cDNA片段的完整性, 插入片段的平均大小應(yīng)不小于1kb。 三、闡述基因突變的概念及引起突變的可能途徑(25%)：（1）化學(xué)誘變，（2）物理誘變，（3）T-DNA插入，（4）缺失、插入，（5）無(wú)意突變概念，（6）堿基修復(fù)概念 答：基因突變 屬分子水平上的變異,是指染色體上個(gè)別基因所發(fā)生的分子結(jié)構(gòu)的變化，基因突變?cè)谧匀唤缙毡榇嬖凇? 基因突變的方式很多，主要有：（1）化學(xué)誘變，基因突變可以由某些化學(xué)物質(zhì)所引起，這些化學(xué)物

25、質(zhì)稱為化學(xué)誘變劑。現(xiàn)已知很多的化學(xué)誘變劑，它們誘變的機(jī)制是不同的。在DNA復(fù)制過(guò)程由于堿基類似物的取代，堿基的化學(xué)修飾以及堿基的插入和缺失都會(huì)引起突變。（2）物理誘變，利用物理因素引起基因突變的稱物理誘變，如X射線、紫外線、電離輻射等物理因素可造成 （3）T-DNA插入，改變讀碼或變成假基因。（4）移碼突變：基因中插入或者缺失一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)，會(huì)使DNA的閱讀框架（讀碼框）發(fā)生改變，導(dǎo)致插入或缺失部位之后的所有密碼子都跟著發(fā)生變化，結(jié)果產(chǎn)生一種異常的多肽鏈。移碼突變誘發(fā)的原因是一些像吖啶類染料分子能插入DNA分子，使DNA復(fù)制時(shí)發(fā)生差錯(cuò)，導(dǎo)致移碼突變。（5）無(wú)意突變，由于一對(duì)或幾對(duì)堿基對(duì)的改變

26、而使決定某一氨基酸的密碼子變成一個(gè)終止密碼子的基因突變。（6）堿基修復(fù)：DNA損傷的修復(fù)系統(tǒng)主要有以下幾個(gè)：①損傷堿基的直接修復(fù)；②切除修復(fù)，包括堿基切除修復(fù)、核苷酸切除修復(fù)和DNA交鏈的切除修復(fù)；③錯(cuò)配修復(fù)；④重組修復(fù)，又稱復(fù)制后修復(fù)；⑤跨損傷DNA合成，這是一種利用損傷核苷酸為模板，通過(guò)DNA聚合酶I使堿基摻入到復(fù)制終止處進(jìn)行DNA合成，從而延長(zhǎng)DNA鏈的修復(fù)。 基因突變的特點(diǎn)為： 　　第一，基因突變?cè)谏锝缰惺瞧毡榇嬖诘摹? 　　第二，基因突變是隨機(jī)發(fā)生的。 　　第三，在自然狀態(tài)下，對(duì)一種生物來(lái)說(shuō)，基因突變的頻率是很低的。 　　第四，大多數(shù)基因突變對(duì)生物體是有害的，由于任何一種生

27、物都是長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程的產(chǎn)物，它們與環(huán)境條件已經(jīng)取得了高度的協(xié)調(diào)。 第五，基因突變是不定向的。 四、闡述一條反向遺傳克隆功能基因的途徑(25%) 答：反向遺傳學(xué)是相對(duì)于經(jīng)典遺傳學(xué)而言的。經(jīng)典遺傳學(xué)是從生物的性狀、表型到遺傳物質(zhì)來(lái)研究生命的發(fā)生與發(fā)展規(guī)律。反向遺傳學(xué)則是在獲得生物體基因組全部序列的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)靶基因進(jìn)行必要的加工和修飾，如定點(diǎn)突變、基因插入\缺失、基因置換等，再按組成順序構(gòu)建含生物體必需元件的修飾基因組，讓其裝配出具有生命活性的個(gè)體，研究生物體基因組的結(jié)構(gòu)與功能，以及這些修飾可能對(duì)生物體的表型、性狀有何種影響等方面的內(nèi)容。 比較典型的反向遺傳克隆功能基因的途徑如RNAi。 RNAi的機(jī)制可能是細(xì)胞內(nèi)雙鏈RNA在Dicer酶的作用下，可形成-22 bp大小的小干擾RNA(small interfering RNAs，siRNAs)，siRNAs可進(jìn)一步摻入多組分核酸酶并使其激活，從而精確降解與siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了該基因在細(xì)胞內(nèi)的翻譯和表達(dá)(下略)。