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1、專題八 生物技術實踐 第1講 微生物的利用和生物技術在食品加工中的應用 (時間：50分鐘　滿分：100分) 非選擇題(共100分) 1．(8分)(2011·濟南一模，47)白僵菌高孢粉是國家林業(yè)局推廣的高效生物殺蟲劑之一，應用于多種林木和農(nóng)作物害蟲的防治。白僵菌分生孢子附著在寄主表皮、氣孔或消化道上，遇適宜條件開始萌發(fā)，生出芽管。同時產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶、幾丁質(zhì)酶等溶解昆蟲的表皮，通過芽管入侵蟲體，在蟲體內(nèi)生長繁殖，消耗寄主體內(nèi)養(yǎng)分，產(chǎn)生各種毒素，形成大量菌絲和孢子，布滿蟲體全身。請回答下面的問題： (1)從自然菌樣中篩選較理想生產(chǎn)用菌種的一般步驟是：采集菌樣―→富集培 養(yǎng)

2、―→________―→性能測定。白僵菌的菌樣應從________處采集。 (2)分離白僵菌菌種的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。在配制白僵菌培養(yǎng)基時常加入蔗糖、 硫酸銨、硝酸鉀等成分，蔗糖屬于________營養(yǎng)物質(zhì)。 (3)白僵菌純培養(yǎng)常用的接種方法是________和________。 (4)分離與培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和接種工具都要進行________處理，利用高溫可以使微生 物的________等物質(zhì)發(fā)生變性。 解析　(2)選擇培養(yǎng)基用于選擇分離菌種。蔗糖屬于微生物的碳源。(4)微生物分離培養(yǎng)過 程中，培養(yǎng)基、接種工具都要進行滅菌處理，其原理是高溫使蛋白質(zhì)、核酸變性而使細

3、 胞失去活性。 答案　(1)純種分離　感病昆蟲　(2)選擇　碳源　(3)平板劃線法　稀釋涂布平板法(或稀 釋混合平板法)　(4)滅菌　蛋白質(zhì)和核酸 2．(10分)(2011·濰坊質(zhì)檢)腐乳是我國古代勞動人民創(chuàng)造出的一種經(jīng)過微生物發(fā)酵的大豆 食品。下面是腐乳制作的流程示意圖： (1)現(xiàn)代科學研究表明，多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉 是一種________狀真菌。 (2)腐乳制作的原理是______________________________________________________。 (3)傳統(tǒng)的制作過程中，豆腐塊上生長的毛霉來自____

4、_____________________________。 而現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴格的無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，這樣可以 ________________________________________________________________________。 (4)加鹽的作用是________和________。 (5)鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的，鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱 酒等，含量一般控制在12%左右，加酒的作用是________。 解析　豆腐發(fā)酵有多種微生物參與，其中毛霉起主要作用，毛霉是一種絲狀真菌。傳統(tǒng) 制作中，豆腐上的毛

5、霉來自空氣中的毛霉孢子；現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)是在無菌條件下，將優(yōu)良 的毛霉菌種接種在豆腐上，避免了其他菌種污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量。 答案　(1)絲　(2)毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和 氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸　(3)空氣中的毛霉孢子　避免其他菌種的 污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量　(4)析出豆腐中的水分，使豆腐變硬　抑制微生物的生長，避免 豆腐變質(zhì)　(5)可以抑制微生物的生長，能使腐乳具有獨特的香味 3．(10分)下圖所示是果酒和果醋制作的實驗流程以及某同學設計的果酒和果醋的發(fā)酵裝置。根據(jù)圖示回答下列問題。 (1)完成圖1中的制作流程。 (2)沖洗

6、的主要目的是________，沖洗應特別注意不能________，以防止菌種的流失。 (3)圖2裝置中的充氣口在________過程中要關閉，某同學在實驗時為了密閉裝置特意將 瓶塞使勁塞緊，并將充氣口和排氣口用夾子夾緊，以便于發(fā)酵。但第二天觀察時，發(fā)現(xiàn) 瓶塞松了，他不明白其中的原因，請幫助解釋說明其原因。 ____________________________________________________________________________ ________________________________________________________________

7、___________。 (4)在醋酸發(fā)酵時，排氣口排出的氣體的來源是____________________________________ ___________________________________________________________________________。 (5)若在果汁中含有醋酸菌，在酒精發(fā)酵旺盛時期，醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋 酸？說明理由。_______________________________________________________________ __________________________________

8、______________________________________。 解析　本題主要考查了果酒、果醋制作的基本過程和原理。因酵母菌是兼性厭氧菌，在 發(fā)酵初期需要氧氣，進行大量繁殖，等酵母菌繁殖到一定數(shù)量時，關閉充氣口，讓其進 行無氧呼吸；酵母菌無氧呼吸除產(chǎn)生酒精外，還產(chǎn)生CO2，所以瓶塞會松；醋酸菌是需 氧型細菌，醋酸發(fā)酵過程中，充氣口要連接充氣泵不停地充氣，排氣口則不停地排氣， 排出的氣體成分不僅有空氣，還有醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生的CO2；酒精發(fā)酵與醋酸發(fā)酵的 條件不同，酒精發(fā)酵時是無氧環(huán)境，而在無氧狀態(tài)下，醋酸菌受到抑制。 答案　(1)醋酸發(fā)酵　(2)洗去浮塵　反復沖洗

9、　(3)酒精發(fā)酵　酵母菌進行無氧呼吸產(chǎn)生 的二氧化碳使瓶中氣體壓強增大(答細胞呼吸或有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳不可)　(4)剩余的 空氣、醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生的二氧化碳　(5)不能。因為酒精發(fā)酵時缺氧，會抑制醋酸菌 的生長，醋酸菌的發(fā)酵條件是氧氣充足 4．(12分)酵母菌是一種真菌，與人們的日常生活密切相關，也是現(xiàn)代生物技術研究中常用的模式生物。果酒、面包的制作需要酵母菌，酵母菌可以用液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)液)來培養(yǎng)，培養(yǎng)液中酵母菌種群的增長情況與發(fā)酵食品的制作有密切關系。 (1)土壤中富含各種微生物，將土壤浸出液接種到特定培養(yǎng)基上，可得到酵母菌。這一過 程叫做________；為提高果酒的品質(zhì)

10、，發(fā)酵時常采用人工培養(yǎng)的純凈菌種。實驗室中獲 取純凈菌種的方法有________。 (2)果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用________來檢驗，在酸性條件下，該物質(zhì)與酒精 反應呈________色。 (3)突變菌往往帶有一些特殊的基因。在獲得這些基因的過程中，PCR技術相當重要。PCR 擴增反應中加入引物的作用是________________________________________________， 加入DNA聚合酶的作用是__________________________________________________。 (4)酵母細胞固定化可大大提高生產(chǎn)效率。固

11、定酵母細胞時首先需要將干酵母放入 ________中活化，若制得的凝膠珠顏色過淺，可能是因為___________________________ ___________________________________________________________________________。 解析　從近幾年的高考看，在有限的題量中，命題往往以一個中心事例為切入點，綜合 考查幾項技術的應用。本題以酵母菌為主線，綜合考查了酵母菌的分離培養(yǎng)、酒精發(fā)酵、 PCR技術、酵母細胞固定化技術等內(nèi)容。第(1)小題考查了微生物的分離技術和接種方法。 在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要

12、的微生物的生長，促進需要的微生物的生 長，目的是從眾多微生物中分離出所需要的微生物。微生物的純化培養(yǎng)(兩種接種方法) 是平板劃線法和稀釋涂布平板法。第(2)小題考查發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生的鑒定方法。發(fā) 酵后取樣，可通過嗅味和品嘗進行初步鑒定，用重鉻酸鉀檢驗酒精的存在，其基本原理 是酒精可使重鉻酸鉀的濃硫酸溶液顏色由橙色變?yōu)榛揖G色。第(3)小題考查PCR技術的 基礎知識。PCR技術中的引物可以是RNA或單鏈DNA分子片段，PCR技術需要設計 兩種引物，分別與模板DNA兩條鏈相結合，使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連 接脫氧核苷酸。DNA聚合酶催化合成DNA子鏈。第(4)小題，在缺

13、水的狀態(tài)下，微生物 會處于休眠狀態(tài)?；罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)。剛形成 的凝膠珠應在CaCl2溶液中浸泡一段時間，以便形成穩(wěn)定的結構。觀察凝膠珠的顏色和 形狀：如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細 胞數(shù)目較少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉的濃度偏高，制作 失敗，需要再作嘗試。 答案　(1)酵母菌的分離　平板劃線法和稀釋涂布平板法 (2)重鉻酸鉀　灰綠　(3)使 DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸　催化DNA子鏈的合成　(4)蒸餾 水　海藻酸鈉濃度過低 5．(8分)圖1為胡蘿卜素粗品

14、鑒定裝置示意圖，圖2為葉 綠體中的色素分離裝置示意圖，請據(jù)圖回答下列問題。 (1)圖1中b的名稱是______；a的作用是________，e為 ________，對于e實驗時應注意________，f為________， 常用________，如果層析液沒及e會導致______________________________________。 (2)請指出圖2的三處錯誤____________________________________________________。 解析　對胡蘿卜素提取粗品進行鑒定采用的是紙層析法，其原理是色素在濾紙上的運動 速度不同，從而使濾液各成分

15、分開。因?qū)游鲆阂讚]發(fā)，故應在色譜容器上方用玻璃蓋嚴。 在進行點樣時，應注意點樣要快速細致，并保持濾紙干燥。葉綠體色素分離過程中，層 析液不得超過濾液細線，否則點樣處的有機成分會溶于層析液中。 答案　(1)色譜容器　防止層析液揮發(fā)　樣品原點　點樣應該快速細致并保持濾紙干燥　 溶劑(層析液)　石油醚　胡蘿卜素溶解在層析液中，致使鑒定失敗　(2)①未蓋培養(yǎng)皿蓋； ②層析液太多；③層析液沒及了濾液細線 6．(12分)(2010·全國新課標)下列是與芳香油提取相關的問題，請回答問題。 (1)玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取，其理由是玫瑰精油具有____________的性質(zhì)。蒸 餾時收集的

16、蒸餾液________(是、不是)純的玫瑰精油，原因是______________________。 (2)當蒸餾瓶中的水和原料量一定時，蒸餾過程中，影響精油提取量的主要因素有蒸餾時 間和________。當原料量等其他條件一定時，提取量隨蒸餾時間的變化趨勢是 ________________________________________________________________________。 (3)如果蒸餾過程中不進行冷卻，則精油提取量會________________________________， 原因是______________________________

17、________________________________________ ___________________________________________________________________________。 (4)密封不嚴的瓶裝玫瑰精油保存時最好存放在溫度________ 的地方，目的是________________。 (5)某植物花中精油的相對含量隨花的不同生長發(fā)育時期的變 化趨勢如圖所示。提取精油時采摘花的最合適時間為 ________天左右。 (6)從薄荷葉中提取薄荷油時________(能、不能)采用從玫瑰花 中提取玫瑰精油的方法，理由是_

18、______________________________________________。 解析　(1)由于玫瑰精油的化學性質(zhì)穩(wěn)定(耐一定程度高溫)、易揮發(fā)(水蒸氣可以將精油攜 帶出來)、難溶于水(冷卻后油水會重新分層)，所以玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取。 (2)當水和原料量一定時，影響精油提取量的主要因素有蒸餾時間和蒸餾溫度，在一定的 時間內(nèi)隨著蒸餾時間的延長提取量不斷增加，一定時間后不再增加。如果蒸餾溫度過高， 提取量也會減少。(3)如果蒸餾過程中不進行冷卻，部分精油會隨水蒸氣揮發(fā)，則精油提 取量會下降。(4)玫瑰精油具有揮發(fā)性，瓶裝精油時若密封不嚴，則需要低溫保存，以減

19、 少揮發(fā)。(5)分析圖示可知，在該植物花的蓓蕾期與開放期之間(即a時期)精油含量最高。 (6)由于薄荷油與玫瑰精油的化學性質(zhì)相似，易揮發(fā)、難溶于水、化學性質(zhì)穩(wěn)定，故可以 用水蒸氣蒸餾法提取。 答案　(1)易揮發(fā)、難溶于水、化學性質(zhì)穩(wěn)定　不是　玫瑰精油隨水蒸氣一起蒸餾出來， 所得到的是油水混合物　(2)蒸餾溫度　在一定的時間內(nèi)提取量隨蒸餾時間的延長而增 加，一定時間后提取量不再增加　(3)下降　部分精油會隨水蒸氣揮發(fā)而流失　(4)較低　 減少揮發(fā)(或防止揮發(fā))　(5)a　(6)能　薄荷油與玫瑰精油的化學性質(zhì)相似 7．(12分)生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應用在一定程度上能夠

20、減緩人類對化學燃料的消耗。科學家發(fā)現(xiàn)，在微生物M產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應能夠合成生物柴油(如下圖)。 (1)用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，宜選用________、________方法從油料作物中 提取。 (2)篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供 ________，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是________法。 (3)測定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用________法直接計數(shù)；從微生物M分離提取的脂 肪酶通常需要檢測________，以確定其應用價值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用 ________技術使脂肪酶能夠重復使用。 (4

21、)若需克隆脂肪酶基因，可應用耐熱DNA聚合酶催化的________技術。 解析　(1)因為植物油不易揮發(fā)，不能選用蒸餾法，可以用壓榨法、萃取法從油料作物中 提取。(2)微生物的生長需要水、碳源、氮源和無機鹽等，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為 微生物生長提供碳源。分析灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等實驗室常用滅菌方法 的特點可知，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是高壓蒸汽滅菌法。(3)測定培養(yǎng)液中微生物的 數(shù)量，可選用顯微鏡直接計數(shù)法直接計數(shù)。提取的脂肪酶在應用于實驗或生產(chǎn)之前，要 先檢測其活性，以確定其應用價值。固定化酶技術可以實現(xiàn)酶的反復利用，降低了生產(chǎn) 成本。(4)在應用PCR技術擴增

22、DNA片段時，DNA合成(延伸)時溫度要控制在72 ℃， 需要具有較強的耐熱性的DNA聚合酶催化。 答案　(1)壓榨　萃取(注：兩空順序無先后)　(2)碳源　高壓蒸汽滅菌　(3)顯微鏡直接計 數(shù)　酶活性(或酶活力)　固定化酶(或固定化細胞)　(4)PCR(或多聚酶鏈式反應，聚合酶 鏈式反應) 8．(8分)(2010·重慶理綜)炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過實驗確診。 (1)細菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。 (2)細菌鑒定：實驗流程如圖所示 ①對配

23、制的液體培養(yǎng)基等需采取________方法滅菌；實驗所用液體培養(yǎng)基的碳源為 ________(填“無機碳”或“有機碳”)。 ②挑選可疑菌落制片后，用________觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。 ③接種可疑菌后，35 ℃培養(yǎng)24 h，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是________________。對照 組試管中應加入________，與實驗組同時培養(yǎng)6 h后，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比 對照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。 ④對排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機體產(chǎn)生相應抗體，與產(chǎn) 生抗體相關的細胞除T細胞、B細

24、胞外，還有________。 解析　(2)①微生物的培養(yǎng)基配制后常用高壓蒸汽法滅菌；由于炭疽桿菌是異養(yǎng)型微生 物，培養(yǎng)基中應加有機碳作碳源。②炭疽桿菌呈竹節(jié)狀排列，需借助顯微鏡觀察。③接 種培養(yǎng)后，液體培養(yǎng)基由澄清變渾濁，應是炭疽桿菌大量繁殖的結果；實驗組與對照組 的設置應遵循單一變量原則和等量原則，實驗組加入生理鹽水配制的澄清噬菌體液，對 照組應加入等量的生理鹽水；若疑似患者被炭疽桿菌感染，則培養(yǎng)6 h后，實驗組中的 炭疽桿菌由于噬菌體侵染而大量裂解死亡，渾濁度會明顯低于對照組。④接種疫苗后， 機體通過體液免疫產(chǎn)生抗體，與此相關的細胞有吞噬細胞、T細胞、B細胞和效應B(漿)

25、細胞。 答案　(2)①高壓蒸汽(98 kPa蒸汽)　有機碳?、陲@微鏡?、奂毦罅糠敝场〉攘可睇} 水　低　④吞噬細胞、效應B(漿)細胞 9．(8分)(2011·濟南二模，34)生產(chǎn)實踐中應用的菌種主要來自土壤，從土壤中分離微生物的實驗流程如下： 土壤取樣―→選擇培養(yǎng)―→梯度稀釋―→鑒別培養(yǎng)。 請回答下列有關問題： (1)將土壤浸出液接種到特定培養(yǎng)基上，可以將酵母菌從混雜的微生物群體中分離出來， 獲得純種酵母菌，這一過程叫做________。在培養(yǎng)酵母菌的過程中，對培養(yǎng)基、接種環(huán) 常采用的滅菌方法分別是________________。 (2)在使用酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)酒精的

26、過程中，影響酵母菌酒精發(fā)酵的主要因素有_________， 常使用________的方法從發(fā)酵液中提取純酒精。 (3)從土壤中分離纖維素分解菌，最好選擇在________環(huán)境中采集土樣，所選擇的培養(yǎng)基 應以________作為唯一碳源。 (4)纖維素分解菌能夠合成纖維素酶，為了使纖維素酶反復使用，可以對纖維素酶進行 ________處理，處理的方法有吸附法、共價鍵結合法和________法。 解析　(1)在微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)常用灼燒滅菌。(2) 溫度、pH影響酶的活性，氧氣濃度影響發(fā)酵產(chǎn)物。因酒精沸點較低，故可用蒸餾法對酒 精進行提純。(3)纖維素

27、分解菌生活在富含纖維素的環(huán)境中，分離所用的培養(yǎng)基應以纖維 素作為唯一碳源，以抑制以其他有機碳為碳源的菌類生長。(4)對酶進行固定化處理可以 使酶重復使用，提高利用率。 答案　(1)純培養(yǎng)　高壓蒸汽滅菌、灼燒　(2)溫度、pH、氧氣濃度等　蒸餾　(3)富含纖 維素的　纖維素　(4)固定化　包埋 10．(12分)自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數(shù)量的測定。下面是對大腸桿菌進行數(shù)量測定的實驗，請回答有關問題。步驟如下： (1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。 (2)為了得到更加準確的結果，你選用____

28、____________(平板劃線法、稀釋混合平板法、 稀釋涂布平板法)接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結果分析： ①測定大腸桿菌數(shù)時，在對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結果，正 確可信的是 (　　)。 A．一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是23 B．兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是22和26，取平均值24 C．三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26 D．四個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25 ②一同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升 樣品中的大腸桿菌數(shù)是(

29、涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2 mL)________。 ③用這種方法測定密度，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量________，因為________________ ________________________________________________________。 ④某同學在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否據(jù)此肯 定該大腸桿菌的品系被污染了？為什么？______________________________________。 解析　平板劃線分離法是指由接種環(huán)以無菌操作蘸取少許待分離的材料，在無菌平板表 面進行平行劃線、扇形劃線或其他形

30、式的連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的 增加而減少，并逐步分散開來，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。稀釋倒平板法又 分為稀釋涂布平板法和稀釋混合平板法。稀釋涂布平板法就是將稀釋后的菌液分別涂布 在固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)；稀釋混合平板法就是將不同濃度的稀釋液與已溶化并冷 卻至45 ℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制 成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間后即可出現(xiàn)菌落。在稀釋度足夠高的菌液里， 聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。隨后挑 取該單個菌落，或重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。由于大腸桿菌屬于

31、兼性厭氧菌， 為了得到更加準確的結果，最好選用稀釋混合平板法。統(tǒng)計菌落數(shù)計算的平板越多，其 平均值越接近實際值。但是C選項中出現(xiàn)一個菌落數(shù)只有5個的結果，不可信，因此答 案選D。計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生 長的平均菌落數(shù)，V代表稀釋平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。用這 種方法測定密度，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量多，因為當兩個或多個細胞連在一起時， 平板上觀察到的是一個菌落。在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，其原因可能有多種，一 是大腸桿菌被污染了，二是培養(yǎng)基被污染了，三是培養(yǎng)過程中被污染了。 答案　(2)稀釋混合平板法　(3)①D?、?.17×108?、鄱唷‘攦蓚€或多個細胞連在一起 時，平板上觀察到的是一個菌落?、懿荒?。因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過 程