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1、
實驗一 紅細(xì)胞計數(shù)
一、實驗?zāi)康模?
掌握紅細(xì)胞計數(shù)原理及技術(shù)。
二、實驗原理:
用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),充入計數(shù)池中,于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù),經(jīng)過換算示得每升血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。
三、實驗器材及試劑:
顯微鏡、血紅蛋白吸管、計數(shù)板、蓋玻片、生理鹽水。
四、實驗操作:
1、取試管1支,加稀釋液3.98ml或1.99ml。
2、用清潔干燥的微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、輕輕注入紅細(xì)胞稀釋液底部,再吸取上層稀釋液清洗吸管2-3次,立即搖勻。
4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈,將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。
5、用吸管吸取混勻的紅細(xì)胞
2、懸液,充入計數(shù)池中。
6、靜止2-3分鐘,待經(jīng)紅細(xì)胞下沉后,用高倍鏡或低倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中五個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。
五、計算
N(五個中方格內(nèi)RBC數(shù))×5×10×106×200=N×1012個/升
×5:表示5個中方格內(nèi)RBC數(shù)換算為1個大方格內(nèi)RBC數(shù)
× 10:1個大方格容積、0.1ul、換算為1ul內(nèi)RBC數(shù)
× 106:1ul換算為1升內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)
× 200:稀釋倍數(shù)
六、正常參考值
正常參考值: 成年男性:4.00-5.50×1012/升
成年女性:3.50-5.00×1012/升
新生兒: 6.00-7.00×1012/升
實驗二
3、血紅蛋白測定
一、實驗?zāi)康模?
掌握氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術(shù)。
二、實驗原理:
血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后,除SHb外各種血紅蛋白可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白,再與CNˉ結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋(HicN)。
HicN最大吸收峰540nm,最小吸收波谷504nm,在特定的條件下,毫摩爾消光系數(shù)為44L.mmol-1 .cm-1 ,因此根據(jù)標(biāo)本的吸光度,即求得血紅蛋白濃度。
三、實驗操作:
1、取指血20ul,加到5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中,混勻,靜止5分鐘。
2、用分光光度計比色,波長540nm,以蒸餾水或空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零,測定吸光度。
3、用血紅蛋白濃度為5
4、0g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度計上測定吸光度分別為0.13,0.27,0.405,0.54.
四、計算:血紅蛋白(g/L)=測定管吸光度×367.7
正常參考值: 成年男性:120-160g/L
成年女性:110-150g/L
新生兒: 170-220g/L
實驗三 白細(xì)胞計數(shù)
一、實驗?zāi)康模?
掌握白細(xì)胞計數(shù)顯微鏡計數(shù)法原理及技術(shù)。
二、實驗原理:
用稀醋酸液將血液稀釋并破壞紅細(xì)胞,混勻后充入計數(shù)池中,于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù),經(jīng)過換算求得每升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。
三、實驗器材及試劑:
顯微鏡、微量吸管、計數(shù)板、蓋
5、玻片、白細(xì)胞稀釋液。
四、實驗操作:
1、取試管1支,加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。
2、用清潔干燥的微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。
3、擦去管尖外部余血、輕輕注入稀釋液底部,再吸取上清液清洗3次,搖勻。
4、將計數(shù)板與蓋玻片用軟布擦凈,將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上,再用微量吸管吸取懸液,充入計數(shù)池與蓋玻片間的細(xì)縫隙中,靜止2-3分鐘,待白細(xì)胞下沉。
5、用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。
五、計算
(四個大方格內(nèi)WBC數(shù)/4)×10×20× 106 = WBC數(shù)/升
六、正常參考值
正常參考值: 成 人:(4-10)×109/升
新生兒:(15-
6、20)×109/升
6月-2歲:(11-12)×109/升
實驗室四 白細(xì)胞分類計數(shù)
一、實驗?zāi)康模?
掌握白細(xì)胞分類計數(shù)、原理及技術(shù)。
二、實驗原理:
把血液制成細(xì)胞分布均勻的薄膜涂片,經(jīng)wright染色后,顯微鏡下觀察,根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)。得出各種白細(xì)胞的相對比值,并注意觀察其形態(tài)和質(zhì)量的變化。
三、實驗器材及試劑:
顯微鏡、染色缸和架,載玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。
四、實驗操作:
1、取末梢血1滴。置于載玻片的一端,以邊緣平滑的推片制成血涂片,空氣干燥。
2、用蠟筆在血膜兩端劃線,以防染液溢出,然后將血片放于染色架上。
3、先加瑞氏染液數(shù)滴,
7、使其覆蓋整個血膜,固定染色細(xì)胞0.5-1分鐘。
4、按1:1或1:2加緩沖液與染料混勻,染色10分鐘左右。
5、在血膜染10分鐘后,用緩沖液或接近中性的水沖去洗液,待自然干燥或濾紙吸干后,用鏡油觀察。
五、計數(shù)方法:
1、先用低倍鏡觀察血片染色情況,白細(xì)胞多少和細(xì)胞分布情況。
2、選擇血涂片的體尾交界處,染色良好的區(qū)域,在油鏡下計數(shù)100-200個白細(xì)胞,按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計數(shù),求出各自白細(xì)胞所占數(shù)值(百分率)。
3、白細(xì)胞分類計數(shù)方法很多,常用的有,完全記錄法、半記錄法、分類計數(shù)器計數(shù)法。
4、每個病人應(yīng)分類白細(xì)胞數(shù),視白細(xì)胞總數(shù)多少而定。
5、各類細(xì)胞所占的百分率乘以白細(xì)
8、胞總數(shù)/升,既得每升血液中各類白細(xì)胞的濃度。
實驗五 血小板計數(shù)
一、實驗?zāi)康模?
掌握血小板計數(shù)原理及技術(shù)。
二、實驗原理:
尿素液能溶解紅細(xì)胞及白細(xì)胞而保存完整形態(tài)的血小板,經(jīng)稀釋后在血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)直接計數(shù)以求得每升容積血液內(nèi)的血小板數(shù)。
三、實驗操作:
1、取試管1支,加血小板稀釋液0.38ml。
2、先讓手指溫暖充血,皮膚消毒待干后深刺使血液流出擦去剛出現(xiàn)的少量血。
3、用微量吸管迅速準(zhǔn)確地吸取自然流出的第一滴血液20微升,取血時避免產(chǎn)生氣泡或多次上下吹吸,取好后立即將血輕輕注入已盛稀釋液的試管底部,吸上清液漱洗吸管三次,輕輕混勻。
4、擦凈并放好計數(shù)板和蓋玻片
9、,將試管輕輕震蕩1分鐘,用吸管吸懸液一滴,注入計數(shù)池,避免產(chǎn)生氣泡或溢出,放置10-15分鐘,待血小板下沉。
5、先用低倍鏡找到中央大方格,換高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)的血小板數(shù),各中格內(nèi)的血小板差異不得超過10個,如每中格內(nèi)血小板數(shù)小于1個時,應(yīng)將全大格數(shù)完或另滴計數(shù)板,再數(shù)一大格作對照。
四、計算
五個中方格內(nèi)所得的血小板數(shù)× 109 /L
五、參考值
正常參考值: 100~300×109/L
實驗六 尿沉渣定性檢查
一、實驗操作:
1、取新鮮尿液10ml于試管內(nèi)1500r/min5分鐘。
2、待離心機停后,取出離心管,棄去上清液。留下 0.2ml,輕輕離心使尿沉渣有形
10、成分混勻。
3、取沉淀于玻片上鏡檢。
二、結(jié)果判斷:
用10×10倍,觀察其中有形成分管型,10×40倍觀察細(xì)胞成分和計數(shù),觀察10個視野管型計數(shù)20個視野。
參考值:
1、細(xì)胞成分:最低-最高值/HP
RBL 0-3/HP WBL 0-5個/HP
2、管型(透明):平均值/LP
3、尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍鏡視野(+)( 2+ )( 3+ )報告
三、注意事項:
1、清晨空腹第一次尿應(yīng)在1h內(nèi)送檢
2、準(zhǔn)備干凈,干燥尿杯,留取中段尿,尿液細(xì)胞及管型的計數(shù)。Addis 1h尿沉渣計數(shù)。
四、標(biāo)本收集:
患者先排尿棄去準(zhǔn)確收集3h尿液于清潔干燥器內(nèi)
11、
(標(biāo)本留取5:30-8:30)
五、實驗操作:
準(zhǔn)備側(cè)量3h尿量,充分混勻取尿液10ml,1500r/min 5分鐘,用吸管吸取上層尿液9ml留取1ml,吸取混勻尿液1滴注入計數(shù)盤中,cal計數(shù)10大方格,管型20個大方格。
六、計算:
1小時細(xì)胞=10個大方格細(xì)胞總數(shù)×(1000/10)×(3h尿量/3)
1小時Cost計數(shù)=(20個大方格管型數(shù)/2) ×(1000/10)×(3h尿量/3)
式中1000為微升換算成毫升數(shù),10為尿液濃縮倍數(shù)
七、實驗注意事項:
1、尿液新鮮PH值應(yīng)在6以下。
2、被檢尿SG在1.026以下如<1.016的為低滲尿易破壞cell。
3
12、、尿中有磷酸鹽時應(yīng)加少量冰乙酸,但勿加過多,使cell管型溶解。
實驗八 尿蛋白檢查
一、實驗原理:
加熱可使蛋白質(zhì)變性凝固,加酸可使蛋白質(zhì)接近等電點,促使蛋白質(zhì)沉淀。此外,加酸還可以溶解堿性鹽類沉淀。
二、實驗試劑:
冰乙酸溶液
三、實驗方法:
1、取約10ml新鮮清晰尿于一耐熱大試管內(nèi)。
2、將試管斜置在火焰上煮沸上部尿液。
3、滴加乙酸3-4滴,再煮,沸后立即觀察結(jié)果,如果渾濁或沉淀,提示尿內(nèi)含pr。
實驗結(jié)果判斷:陰性(-):不渾濁
微量(±): 輕微渾濁0.1-0.15g/L
弱陽性(+):
13、 明顯白霧狀0.2-0.5g/L
陽性(+ + ): 明顯渾濁有明顯顆粒0.6-2.0g/L
強陽性(+ + + ): 大量絮片狀沉淀渾濁2.0-5.0g/L
最強陽性(+ + + + ):出現(xiàn)凝塊并有大量絮片狀沉淀>5.0g/L
實驗九 尿葡萄糖定性檢查(班氏法)
一、實驗?zāi)康模?
掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
二、實驗原理:
葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中,能將班氏試劑的藍(lán)色硫酸銅還原為黃色的氫氧化銅,進(jìn)而形成紅色氧化亞銅沉淀。
三、實驗器材:
試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈
四、實驗試劑:班氏試劑
14、五、實驗操作:
1、鑒定班氏試劑質(zhì)量:取試管一支,加入班氏試劑2.0ml,搖動試管徐徐加熱至沸騰,觀察試劑有無顏色及性狀變化,若試劑仍為透明藍(lán)色,可進(jìn)行以下實驗。
2、加尿液:向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml(約4滴),混勻。
3、加熱沸騰:繼續(xù)煮沸1-2min,或置沸水浴5min,自然冷卻。
4、判斷結(jié)果:見下表
Benidict糖定性實驗結(jié)果判定
反應(yīng)現(xiàn)象 報告方式 葡萄糖含量(mmol/L)
藍(lán)色不變 - <5.6
藍(lán)色中略帶綠色,但無沉淀 ± 5.6-11.2
綠色,伴少許黃綠色沉淀 + <28
較多黃綠色沉淀,以黃為主 + + 28-56
土黃色渾濁,有大量沉淀 + + + 57-112
大量棕紅色或磚紅色沉淀 + + + + >112