《人教版高中生物選修一教材用書(shū)：專(zhuān)題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) Word版含答案》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《人教版高中生物選修一教材用書(shū)：專(zhuān)題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) Word版含答案（12頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 1.測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。 2．稀釋涂布平板法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目，但統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比活菌數(shù)目低。 3．為確保結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。 4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離該細(xì)菌。 5．鑒定分解尿素細(xì)菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，據(jù)是否變紅進(jìn)行判斷。 篩選菌株的思路及計(jì)數(shù) [自讀教材·夯基礎(chǔ)] 1．篩選菌株的思路 (1)自然界中目的菌株的篩選： ①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)

2、的環(huán)境中去尋找。 ②實(shí)例：PCR技術(shù)過(guò)程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來(lái)的Taq細(xì)菌中提取出來(lái)的。 (2)實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選： ①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。 ②方法：利用選擇培養(yǎng)基分離。 a．選擇培養(yǎng)基：允許特定微生物生長(zhǎng)，同時(shí)阻止或抑制其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。 b．實(shí)例：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基，以尿素作為唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 (1)常用方法：稀釋涂布平板法。 ①原理 ②計(jì)數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)

3、。 ③結(jié)果分析：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。 (2)其他方法：利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)。 1．閱讀教材P22第一段旁欄中的相關(guān)內(nèi)容，并思考回答下列問(wèn)題。 (1)從物理性質(zhì)上劃分，此培養(yǎng)基屬于哪類(lèi)培養(yǎng)基？從功能上劃分呢？ 提示：固體培養(yǎng)基，因?yàn)榧尤肓四虅┉傊?。從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。 (2)在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？ 提示：碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。 (3)該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？ 提示：該培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。該培養(yǎng)基以尿

4、素為唯一氮源，只允許能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。 2．閱讀教材P22中部楷體字部分，思考： 哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？他們的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？ 提示：第一位同學(xué)只涂布了1個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)值結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值，這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)都需要改進(jìn)。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致。結(jié)果不一致，意

5、味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。 3．閱讀教材P23上部的楷體字部分，請(qǐng)幫助A同學(xué)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以排除其他同學(xué)所質(zhì)疑的可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素。 提示： 可能原因 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 結(jié)　論 所取土樣不同 其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 若結(jié)果與A同學(xué)的一致，則說(shuō)明A無(wú)誤；若結(jié)果與A同學(xué)的不一致，則說(shuō)明A同學(xué)操作失誤或培養(yǎng)基配制有問(wèn)題 培養(yǎng)基污染或操作失誤 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作空白對(duì)照 若有菌落出現(xiàn)，則說(shuō)明培養(yǎng)基污染；若無(wú)菌落出現(xiàn)，則說(shuō)明未被污染 [跟隨名師·解疑難] 1．選擇培養(yǎng)基的類(lèi)型及作用 (1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。如加入青霉素可以

6、分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入指的是在培養(yǎng)基的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。 (2)改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。 (3)改變微生物的培養(yǎng)條件。如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。 2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 (1)稀釋涂布平板法： ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～30

7、0的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 ②注意事項(xiàng)： a．設(shè)置重復(fù)組：同一稀釋度下，至少涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。分析結(jié)果時(shí)，需考慮重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。 b．設(shè)置對(duì)照：目的是排除實(shí)驗(yàn)中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度。 ③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。 C：代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。 V：代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積。 M：代表稀釋倍數(shù)。 (2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法： ①原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。 ②缺點(diǎn)：不能區(qū)分細(xì)菌的死

8、活。 ③方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定的面積為1 mm2和高為0.1 mm的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(gè)(或16個(gè))中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個(gè)小格組成的。如下圖所示： ④計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及操作提示 [自讀教材·夯基礎(chǔ)] 1．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程 2．菌種鑒定 (1)原理：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。 (2)方法：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅

9、，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。 1．為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？ 提示：土壤中各類(lèi)微生物的數(shù)量不同，因此，為獲得不同類(lèi)型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。 2．當(dāng)?shù)谝淮螠y(cè)定時(shí)為什么要將稀釋的范圍放寬一些？ 提示：為確保能從中選擇出菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 3．為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果？ 提示：防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 [跟隨名師·解疑難] 1．操作中的注意事項(xiàng) (1)無(wú)菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。稱(chēng)取土壤、將稱(chēng)好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在酒精燈

10、的火焰旁進(jìn)行。 (2)做好標(biāo)記：如在培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)基種類(lèi)、培養(yǎng)日期以及培養(yǎng)樣品的稀釋度等。 2．結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 內(nèi)　容 現(xiàn)　象 結(jié)　論 有無(wú)雜菌污染的判斷 未接種的培養(yǎng)基上無(wú)菌落生長(zhǎng) 未被雜菌污染 選擇培養(yǎng)基的篩選作用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù) 選擇培養(yǎng)基具有篩選作用 樣品的稀釋操作 得到2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板 操作成功 重復(fù)組的結(jié)果 若選擇同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近 選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)和應(yīng)用 　　[例1]　下表是某微生物培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題： 編號(hào) ① ② ③ ④ ⑤ 成分

11、 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)從培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用來(lái)培養(yǎng)的微生物同化作用類(lèi)型是________。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，微生物所需要的碳源來(lái)自__________________________。 (2)此表中含有的微生物的營(yíng)養(yǎng)成分包括________________________。 (3)若除去該培養(yǎng)基中的①后再加入不含氮元素的有機(jī)物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類(lèi)是________________________。 (4)培養(yǎng)基若加入氨

12、基酸，則它可充當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)成分是_________________________。 (5)若要觀察微生物的菌落的特點(diǎn)，培養(yǎng)基中還應(yīng)添加的成分是____________________。 [解析]　自養(yǎng)型微生物可以利用空氣中的二氧化碳作為碳源，故培養(yǎng)基中可以不含碳源；自生固氮微生物則可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，培養(yǎng)基中可以不含氮源；氨基酸中含碳元素和氮元素，可作為微生物的碳源和氮源，還可以滿(mǎn)足微生物對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求；若要觀察微生物的菌落特點(diǎn)，必須使用固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中還應(yīng)添加凝固劑，如瓊脂。 [答案]　(1)自養(yǎng)型　空氣中的CO2　(2)水、無(wú)機(jī)鹽、氮源　(3)自生固氮微生物　(

13、4)碳源、氮源和特殊營(yíng)養(yǎng)　(5)凝固劑(瓊脂) 歸納拓展　幾種常見(jiàn)微生物的分離方法 根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)，加入某種物質(zhì)或不加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。常見(jiàn)微生物的分離舉例如下： ①酵母菌、霉菌等真菌：用含青霉素的培養(yǎng)基分離； ②金黃色葡萄球菌：用含高濃度食鹽水的培養(yǎng)基分離； ③固氮微生物：用缺乏氮源的培養(yǎng)基分離； ④自養(yǎng)型微生物：用含無(wú)機(jī)碳源的培養(yǎng)基分離； ⑤厭氧型和兼性厭氧型微生物：用普通培養(yǎng)基在無(wú)氧條件下分離。 微生物的分離與計(jì)數(shù) [例2] 自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行

14、數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。 實(shí)驗(yàn)步驟： (1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。 (2)選用______________法接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結(jié)果分析： (1)測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是(　　) A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23 B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是22和26，取平均值24 C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26 D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25 (2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得

15、平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌株數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2 mL)____________。 (3)用這種方法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量________，因?yàn)開(kāi)_______________________________________________________________________。 (4)某同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？為什么？ [解析]　實(shí)驗(yàn)步驟：(2)若要對(duì)大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，常用稀釋涂布平板法接種樣品。 結(jié)果分析：(1)在選取樣品時(shí)，應(yīng)選取多個(gè)菌落數(shù)

16、相差不大的平板計(jì)數(shù)，取其平均值。 (2)每毫升樣品中菌株數(shù)＝×稀釋倍數(shù)， 即23.4÷0.2×106＝1.17×108。 (3)由于菌落可能由1個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起生長(zhǎng)而成的，所以實(shí)際活菌數(shù)量比測(cè)得數(shù)量多。 (4)污染的原因可能是菌種不純，也可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底或接種過(guò)程操作不當(dāng)。 [答案]　實(shí)驗(yàn)步驟：(2)稀釋涂布平板 結(jié)果分析：(1)D　(2)1.17×108　(3)多　當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落　(4)不能。因?yàn)椴荒芘懦s菌來(lái)自培養(yǎng)基或培養(yǎng)過(guò)程。 易錯(cuò)提醒　本題易錯(cuò)原因是不理解菌落數(shù)目的統(tǒng)計(jì)規(guī)則。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每一個(gè)濃度至少涂布三個(gè)平板，以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的

17、說(shuō)服力和準(zhǔn)確性。當(dāng)樣品的稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。計(jì)數(shù)時(shí)選擇菌落數(shù)在30～300的平板計(jì)數(shù)，若某兩個(gè)或多個(gè)稀釋濃度下獲得的菌落數(shù)符合條件時(shí)，再看兩者菌落數(shù)的比值：若小于2，則取兩者的平均值；若大于2，則取小者。 [隨堂基礎(chǔ)鞏固] 1．在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱(chēng)作(　　) A．鑒別培養(yǎng)基　　　　　　 　B．加富培養(yǎng)基 C．選擇培養(yǎng)基 D．基礎(chǔ)培養(yǎng)基 解析：選C　鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種特殊化學(xué)物質(zhì)，微生物的代謝產(chǎn)物與特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯特征變化；加富培

18、養(yǎng)基一般用來(lái)培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求比較苛刻的異養(yǎng)型微生物；基礎(chǔ)培養(yǎng)基是含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。 2．請(qǐng)選出下列正確的操作步驟(　　) ①土壤取樣　②稱(chēng)取10 g土壤，加入盛有90 mL無(wú)菌水的錐形瓶中　③吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布?、芤来蜗♂屩?01、102、103、104、105、106、107稀釋度 A．①→②→③→④ D．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③ 解析：選C　在分離土壤中某細(xì)菌時(shí)，應(yīng)先選取土樣(1

19、0 g)，然后加無(wú)菌水獲得土壤浸出液，并進(jìn)行不同倍數(shù)稀釋?zhuān)詈髮⑾♂屢和坎嫉脚囵B(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)，并分離和計(jì)數(shù)。 3．某研究小組欲研究被石油污染過(guò)的土壤中細(xì)菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列操作錯(cuò)誤的是(　　) A．稱(chēng)取和稀釋被污染的土壤時(shí)應(yīng)在火焰旁 B．用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選 C．分離菌種時(shí)可采用稀釋涂布平板法接種 D．對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)宜采用平板劃線法接種 解析：選D　微生物的分離和培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)是無(wú)菌操作，因此在微生物的分離和培養(yǎng)的過(guò)程中稱(chēng)取和稀釋土壤時(shí)應(yīng)在火焰旁進(jìn)行；閱讀題干可知實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選出能分解石油的細(xì)菌，培養(yǎng)基的配方應(yīng)以石油為唯一碳源；對(duì)微生物進(jìn)行

20、分離和計(jì)數(shù)，應(yīng)該用稀釋涂布平板法；分離菌種常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，但對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)常用稀釋涂布平板法而不能用平板劃線法。 4．(2014·新課標(biāo)Ⅱ)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是________________________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38

21、和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)_______________________________________________________________________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)________滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_________ ________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果

22、。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)_______的利用率。 解析：(1)為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。0.1 mL稀釋液中平均有38個(gè)活菌，可推測(cè)每升水樣中的活菌數(shù)＝38×10×100×1 000＝3.8×107(個(gè))。(2)接種環(huán)、接種針或其他金屬用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?。在第二?/p>

23、及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)比較兩圖可以看出，A是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，B是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)由于振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。 答案：(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107　(2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落　(3)B　(4)溶解氧　營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) [課時(shí)跟蹤檢測(cè)] (滿(mǎn)分50分　時(shí)間25分鐘) 一、選擇題(每小題3分，共24分) 1．下列關(guān)于土壤取樣

24、的敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．土壤取樣，應(yīng)選取肥沃、濕潤(rùn)的土壤 B．先鏟去表層土3 cm左右，再取樣 C．取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌 D．應(yīng)在火焰旁稱(chēng)取土壤 解析：選C　微生物的培養(yǎng)要注意無(wú)菌操作，土壤取樣用的小鐵鏟和信封在使用前需滅菌，后續(xù)稀釋等操作均需在火焰旁進(jìn)行。 2．可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是(　　) A．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 B．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑 C．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑 D．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 解析：選A　在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中，不能分解尿素獲得氮源的細(xì)菌

25、不能生長(zhǎng)，而分解尿素的細(xì)菌能以尿素為氮源，將尿素分解為氨，使pH升高。若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑將變紅。此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基，又屬于鑒別培養(yǎng)基。 3．用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是(　　) A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 C．接種了的選擇培養(yǎng)基 D．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 解析：選D　選擇的目的是為了分離、篩選，對(duì)照遵循的原則是單一變量，因此用接種了的普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目。 4．在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作中，對(duì)使用的平板和試管要進(jìn)

26、行標(biāo)記，以下說(shuō)法正確的是(　　) A．對(duì)培養(yǎng)皿僅需注明培養(yǎng)基的種類(lèi)即可 B．一般在使用之后進(jìn)行標(biāo)記 C．由于試管用得較多，只需對(duì)試管進(jìn)行標(biāo)記即可 D．標(biāo)記的目的主要是為了防止實(shí)驗(yàn)中平板、試管等的混淆 解析：選D　本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為避免混淆，應(yīng)在使用前就做好標(biāo)記。標(biāo)記時(shí)要注明培養(yǎng)基種類(lèi)、培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。 5．下列關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上 C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒

27、置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 h D．利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù) 解析：選D　檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板；取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上；將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48 h；用稀釋涂布平板法可以分離微生物也可以對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)。 6．通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述方

28、法能從混雜的微生物群體中分別分離出(　　) ①大腸桿菌?、诿咕、鄯啪€菌?、芄痰?xì)菌 A．④②③　　　　　 B．①②③ C．①③④ D．只有③④ 解析：選A　缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)，而固氮細(xì)菌能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌等原核生物細(xì)胞壁的合成，而霉菌屬于真核生物，故能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)，對(duì)放線菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。 7．分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是(　　) ①加尿素　②不加尿素?、奂迎傊、懿患迎傊? ⑤加葡萄糖?、薏患悠咸烟恰、呒酉跛猁} ⑧不加硝酸鹽 A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C

29、．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ 解析：選C　分離分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該以尿素為唯一氮源，不能加硝酸鹽來(lái)提供氮源。另外還要加葡萄糖提供碳源，加瓊脂作為凝固劑，制成固體培養(yǎng)基，利于細(xì)菌的分離、鑒定、計(jì)數(shù)等。 8．實(shí)驗(yàn)測(cè)定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂平板上畫(huà)3條等長(zhǎng)的平行線(3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸)，將平板置于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，以下敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長(zhǎng) B．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)霍亂菌更有效 C．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)傷寒菌更有效 D．鏈霉素可以用于治療傷寒病人 解析：選D　圖中細(xì)菌生長(zhǎng)

30、區(qū)離鏈霉素帶越遠(yuǎn)，說(shuō)明該菌對(duì)鏈霉素越敏感，即鏈霉素越能阻止該菌的生長(zhǎng)。讀題圖可知傷寒菌生長(zhǎng)區(qū)與鏈霉素帶相連接，說(shuō)明鏈霉素不能阻止傷寒菌的生長(zhǎng)。 二、非選擇題(共26分) 9．(12分)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂蒧_______色。 (2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、1

31、78和191。 該過(guò)程采取的接種方法是__________________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_(kāi)_______×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較________。 解析：(1)脲酶能夠催化尿素分解釋放出氨和二氧化碳，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，菌落周?chē)陌痹黾?，pH升高，酚紅指示劑將變紅。(2)該過(guò)程采取的接種方法為稀釋涂布平板法。利用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300的平板，因此平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156＋178＋191)÷3＝175個(gè)。每克土壤

32、樣品中的細(xì)菌數(shù)為175÷0.1×105＝1.75×108個(gè)。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法能將死細(xì)胞計(jì)算在內(nèi)，而稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法只能計(jì)數(shù)活細(xì)胞(只有活細(xì)胞才能在平板上生長(zhǎng))，故一般血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法要比稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果大。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)稀釋涂布平板法　1.75　少 10．(14分)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，不能直接被農(nóng)作物吸收，只有當(dāng)土壤中的微生物將尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，對(duì)土壤中分解尿素的微生物進(jìn)行分離和鑒定具有重要意義?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)對(duì)土壤中分解尿素的微生物的分離過(guò)程如下： 第一步：土壤取樣。取土樣用的工具和盛土樣的信封等在使用前都需要_

33、_________(填“消毒”或“滅菌”)。 第二步：樣品稀釋。通常分離不同種類(lèi)的微生物要采用不同的稀釋度，原因是________________________________________________________________________。 第三步：微生物的培養(yǎng)與觀察。將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，并在適宜的條件下培養(yǎng)。分解尿素的微生物能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，而______________________則不能生長(zhǎng)繁殖。 (2)若對(duì)土壤懸液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，未經(jīng)振蕩而直接取上層懸液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)孟♂尡稊?shù)為104的樣液涂布到平板上進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，統(tǒng)

34、計(jì)出的菌落數(shù)往往比正確操作統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)________。 (3)若要對(duì)上述初步篩選出的分解尿素的微生物作進(jìn)一步的鑒定，需在如表所示培養(yǎng)基配方中添加的物質(zhì)是________、________。若分離得到的是尿素分解菌，則培養(yǎng)基中pH升高使酚紅指示劑變?yōu)榧t色，pH升高的原因是____________________________________________________________________　。 成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O 酚紅 指示劑 尿素 蒸餾水 培養(yǎng)基 (含量) 1.4 g 2.1 g 0.2 g 0.01 g 1.0 g 1 000 mL 答案：(1)滅菌　土壤中各類(lèi)微生物的數(shù)量不同　不能利用尿素的微生物　(2)偏高　(3)葡萄糖　瓊脂　尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成氨