《高中生物《第二章 第二節(jié) 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)》課件 新人教版選修1》由會員分享,可在線閱讀,更多相關《高中生物《第二章 第二節(jié) 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)》課件 新人教版選修1(19頁珍藏版)》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、專題專題2 2 微生物的培養(yǎng)與應用微生物的培養(yǎng)與應用 研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,進行微研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,進行微生物數(shù)量的測定。生物數(shù)量的測定。 土壤中能分解尿素的細菌土壤中能分解尿素的細菌(1)從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌)從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌(2)統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這)統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細菌樣的細菌課題背景 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但是尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氮之后,才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素,是因為它們能合成脲酶。 尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的。 1828年,德國化學家維勒
2、成功地通過無機物的化學反映合成了尿素,揭開了歷史上人工合成有機物的新篇章。尿素課題2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)(一)篩選菌株(一)篩選菌株原理:原理:有選擇作用,常用方法常用方法:稀釋涂布平板法、顯微鏡:稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法,直接計數(shù)法, 還可以用過濾膜法還可以用過濾膜法:當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基:當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果的準確,一般選擇
3、菌落數(shù)在為了保證結(jié)果的準確,一般選擇菌落數(shù)在3030300300的平板進的平板進行計數(shù),若設置的重復組中結(jié)果相差太遠,意味著操作有誤,行計數(shù),若設置的重復組中結(jié)果相差太遠,意味著操作有誤,需重新實驗需重新實驗。 :設置重復組,目的是增強實驗的說服力與準確性。將待測樣設置重復組,目的是增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列品經(jīng)一系列1010倍稀釋,然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取倍稀釋,然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上,然后用無菌涂布器將菌液涂接種到已制備好的平板上,然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面,放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是布在
4、整個平板表面,放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)2、顯微鏡直接計數(shù)法(1)原理:此法利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。(2)方法:用計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是特制的載玻片,其上有特定的面積為1mm2,高為0.1mm的計數(shù)室,一個計數(shù)室又被分成25個(或16個)中格,每個中格再被分成16個(或25個)小格,每個計數(shù)室都由400個小格組成。 (3)操作:將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上,蓋上
5、蓋玻片,然后在顯微鏡下計數(shù)45個中格中的細菌數(shù),并求出每個小格所含的細菌數(shù),再按計數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細菌數(shù)。 (4)計算公式 每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù) (5)缺點:不能區(qū)分死菌與活菌。3過濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上,大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色。可以根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。 1. 1.想一想,如何從平板上的菌落數(shù)推測出想一想,如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?每克樣品中的菌落數(shù)?答:統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),答:統(tǒng)計
6、某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),最好能統(tǒng)計最好能統(tǒng)計3 3個平板,計算出平板菌落數(shù)的平個平板,計算出平板菌落數(shù)的平均值,然后按課本旁欄的公式進行計算。均值,然后按課本旁欄的公式進行計算。A A同學的結(jié)果與其他同學不同,可能同學的結(jié)果與其他同學不同,可能的解釋有兩種。的解釋有兩種。一是由于土樣不同一是由于土樣不同;二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。 (三)設置對照(三)設置對照究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。另一種方案另一種方案:將將A A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培
7、養(yǎng)基是下進行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結(jié)否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結(jié)果要有說服力,對照的設置是必不可少的。果要有說服力,對照的設置是必不可少的。實驗方案有兩種實驗方案有兩種一種方案一種方案:可以由其他同學用與可以由其他同學用與A A同學一樣的土樣進同學一樣的土樣進行實驗,如果結(jié)果與行實驗,如果結(jié)果與A A同學一致,則證明同學一致,則證明A A無無誤;如果結(jié)果不同,則證明誤;如果結(jié)果不同,則證明A A同學存在操作失同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。誤或培養(yǎng)基的配制有問題。四、實驗案例四、實驗案例 實驗的具體操作步驟如下實驗的具體操作步
8、驟如下: : 1.1.土壤取樣土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土鏟去表層土3 cm3 cm左右,再取樣,將左右,再取樣,將樣品裝入事先準備好的信封中。樣品裝入事先準備好的信封中。土壤中某樣品細菌的分離與計數(shù)土壤中某樣品細菌的分離與計數(shù)2.2.設置重復組,目的是增強實驗的說服力設置重復組,目的是增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列1010倍稀釋,倍稀釋,然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上,然后用接種到已制備好的平板上,然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面,無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面,放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),到三個或三個以上的平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)計算出菌落平均數(shù) :3.3.為了保證結(jié)果的準確,一般選擇菌落為了保證結(jié)果的準確,一般選擇菌落數(shù)在數(shù)在3030300300的平板進行計數(shù),若設置的的平板進行計數(shù),若設置的重復組中結(jié)果相差太遠,意味著操作有重復組中結(jié)果相差太遠,意味著操作有誤,需重新實驗誤,需重新實驗。