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1、 第34講　細胞工程 [考綱要求]　1.植物的組織培養(yǎng)(Ⅱ)。2.動物細胞培養(yǎng)與體細胞克隆(Ⅱ)。3.細胞融合與單克隆抗體(Ⅱ)。 考點一　植物細胞工程 1．細胞工程的概念 2．細胞的全能性 (1)含義：具有某種生物全部遺傳信息的任何一個細胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能。 (2)物質基礎：細胞內含有本物種全部的遺傳信息。 (3)植物細胞全能性表達的條件：具有完整的細胞結構；處于離體狀態(tài)；提供一定的營養(yǎng)、激素和其他適宜外界條件。 3．植物組織培養(yǎng)技術 (1)原理：植物細胞具有全能性。 (2)過程 4．植物體細胞雜交技術 (1)概念：將不同種的植物體細胞，在

2、一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術。 (2)操作流程 ①過程a為去除細胞壁獲得具有活力的原生質體，用到的酶是纖維素酶和果膠酶。 ②過程b是原生質體的融合，其原理是細胞膜具有一定的流動性。人工誘導的方法有物理法，包括離心、振動、電激等；化學法一般用聚乙二醇(PEG)作為誘導劑來誘導細胞融合。 ③過程c是原生質體融合后再生出細胞壁，這是原生質體融合成功的標志。 ④過程d是植物組織培養(yǎng)，其原理是植物細胞的全能性。 (3)意義：克服了遠緣雜交不親和的障礙。 深化拓展　植物體細胞雜交后的遺傳物質分析 (1)遺傳特性：雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質，故雜種植

3、株具備兩種植物的遺傳特性。 (2)染色體組數(shù) ①染色體組數(shù)＝兩種植物體細胞內染色體組數(shù)之和。 ②植物體細胞雜交形成的雜種植株，有幾個染色體組就稱為幾倍體。 ③若一植物細胞含有2x條染色體，2個染色體組，基因型為Aabb，另一植物細胞含有2y條染色體，2個染色體組，基因型為ccDd，則新植株應為異源四倍體，其體細胞中染色體數(shù)為(2x＋2y)條，4個染色體組，基因型為AabbccDd。 5．植物細胞工程的應用 (1)微型繁殖：優(yōu)點是能夠保持親本的優(yōu)良性狀。 (2)作物脫毒：利用莖尖、根尖等無毒組織進行微型繁殖。 (3)培育人工種子：可以解決某些植物結實率低、繁殖困難的問題。 (4

4、)作物新品種的培育 (5)細胞產物的工廠化生產：即利用植物組織培養(yǎng)技術生產蛋白質、脂肪、糖類、藥物、香料和生物堿等。 1．有關細胞全能性與組織培養(yǎng)的判斷 (1)棉花根尖細胞經誘導形成幼苗能體現(xiàn)細胞的全能性(　√　) (2)植物的每個細胞在植物體內和體外都能表現(xiàn)出細胞的全能性(　×　) (3)在誘導離體菊花莖段形成幼苗的過程中，不會發(fā)生細胞的增殖和分化(　×　) (4)愈傷組織是外植體通過脫分化和再分化后形成的(　×　) (5)經植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體用人工薄膜包裝后可得到人工種子(　√　) 2．有關植物體細胞雜交技術的判斷 (1)利用物理法或化學法可以直接將兩個

5、植物細胞進行誘導融合(　×　) (2)用纖維素酶和果膠酶水解法獲得的植物原生質體失去了全能性(　×　) (3)再生出細胞壁是原生質體融合成功的標志(　√　) (4)培養(yǎng)草莓脫毒苗所采用的主要技術是細胞雜交(　×　) 據(jù)圖分析植物體細胞雜交過程 (1)植物體細胞雜交依據(jù)的生物學原理是什么？ 提示　細胞膜的流動性、植物細胞的全能性。 (2)如何根據(jù)細胞膜表面熒光判斷該原生質體是由番茄和馬鈴薯融合而成的？ 提示　融合的細胞表面既有紅色熒光又有綠色熒光。 (3)若番茄細胞內有m條染色體，馬鈴薯細胞內有n條染色體，則“番茄—馬鈴薯”細胞在有絲分裂后期含有多少條染色體？ 提示　

6、2(m＋n)條。 (4)若雜種細胞培育成的“番茄—馬鈴薯”植株為四倍體，則此雜種植株的花粉經離體培育得到的植株屬于幾倍體植株？ 提示　單倍體植株。 命題點一　植物組織培養(yǎng)過程的分析 1．某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關敘述錯誤的是(　　) A．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害 B．在愈傷組織培養(yǎng)中加入細胞融合的誘導劑，可獲得染色體加倍的細胞 C．出芽是細胞再分化的結果，受基因選擇性表達的調控 D．生根時，培養(yǎng)基通常應含α－萘乙酸等生長素類調節(jié)劑 答案　B 解析　植物組

7、織培養(yǎng)中消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對培養(yǎng)材料的傷害，A項正確；植物體細胞的雜交需先除去細胞壁得到原生質體，再在細胞融合誘導劑作用下獲得染色體加倍的細胞，B項錯誤；細胞分化的實質是基因的選擇性表達，C項正確；植物組織培養(yǎng)過程中，生根階段的培養(yǎng)基中通常應含有生長素類調節(jié)劑，D項正確。 2．(2018·濟南調研)如圖是通過植物細胞工程技術獲得紫杉醇的途徑，下列敘述正確的是 (　　) A．該途徑依據(jù)的原理是植物細胞具有全能性 B．過程①需控制好培養(yǎng)基中植物激素的比例 C．經過程①細胞的形態(tài)和結構未發(fā)生變化 D．過程③需使用固體培養(yǎng)基，有利于細胞增殖 答案　B

8、解析　細胞全能性以細胞發(fā)育成個體為標志，而圖中并沒有形成完整植物體，A項錯誤；過程①是脫分化，而決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是培養(yǎng)基中植物激素的種類和比例，因此該過程需控制好培養(yǎng)基中植物激素的比例，B項正確；過程①是脫分化，經該過程細胞的形態(tài)和結構發(fā)生了變化，成為高度液泡化的薄壁細胞，C項錯誤；過程③需使用液體培養(yǎng)基，有利于細胞增殖，D項錯誤。 植物組織培養(yǎng)中生長素和細胞分裂素的比值與效果 生長素/細胞分裂素的比值 作用效果 比值高時 促進根分化、抑制芽形成 比值低時 促進芽分化、抑制根形成 比值適中 促進愈傷組織形成 命題點二　植物細胞工程的綜合應用 3．為

9、了獲得植物次生代謝產物，先用植物外植體獲得愈傷組織，然后在液體培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。請回答下列問題： (1)外植體經誘導后形成愈傷組織的過程稱為_________________________________。 (2)在愈傷組織懸浮培養(yǎng)時，細胞干重、蔗糖濃度和pH的變化如下圖所示。細胞干重在12 d后下降的原因有________________________________；培養(yǎng)液中蔗糖的作用是________________、________________。 (3)多倍體愈傷組織細胞產生的次生代謝產物量常高于二倍體。二倍體愈傷組織細胞經________________處理，會產生

10、染色體加倍的細胞。為檢測愈傷組織細胞染色體數(shù)目，壓片前常用纖維素酶和________酶解離愈傷組織。若愈傷組織細胞(2N)經誘導處理后，觀察到染色體數(shù)為8N的細胞，合理的解釋是____________________________________、________________________________________________________________________。 答案　(1)脫分化　(2)蔗糖濃度下降，pH降低　提供能源　調節(jié)滲透壓　(3)秋水仙素(低溫)　果膠　經加倍到4N的細胞處于有絲分裂后期　經加倍到8N的細胞處于有絲分裂中期 解析　(1)外植體經誘導

11、形成愈傷組織的過程稱為脫分化。 (2)觀察圖示可知，12 d后蔗糖濃度和pH都下降到較低水平，影響能量的供應和酶的活性，導致細胞干重下降。另外，培養(yǎng)液中的蔗糖還具有調節(jié)滲透壓的作用。 (3)在細胞分裂過程中，用低溫或秋水仙素處理，都可抑制紡錘體的形成，使染色體不能移向兩極，從而使細胞中染色體數(shù)目加倍。愈傷組織的細胞之間含有纖維素和果膠，欲將其分散成單個細胞，壓片前需用纖維素酶和果膠酶處理。愈傷組織細胞經誘導處理后，有的細胞染色體數(shù)目加倍(4N)，有的細胞染色體數(shù)目未加倍(2N)，也可能有的細胞在連續(xù)分裂中每次都因低溫或秋水仙素抑制了紡錘體的形成，導致細胞中染色體數(shù)目連續(xù)加倍，出現(xiàn)染色體數(shù)目

12、為8N的細胞。所以染色體數(shù)目加倍到4N的細胞處于有絲分裂后期時染色體數(shù)目為8N，染色體數(shù)目加倍到8N的細胞處于有絲分裂中期時染色體數(shù)目也為8N。 4．利用相關工程技術可以獲得抗黑腐病雜種黑芥—花椰菜植株，已知野生黑芥具有黑腐病的抗性基因，而花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，技術人員用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質體可使其染色體片段化，并喪失再生能力，再利用此原生質體作為部分遺傳物質的供體與完整的花椰菜原生質體融合，流程如下圖。據(jù)圖回答下列問題： (1)該過程用到的工程技術有________________和________________。 (2)過程①所需的酶是_________

13、___________________，過程②PEG的作用是________________，經過②操作后，需篩選出融合的雜種細胞，顯微鏡下觀察融合的活細胞中有供體的葉綠體存在可作為初步篩選雜種細胞的標志。 (3)原生質體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是________________。原生質體經過細胞壁再生，進而分裂和脫分化形成________________________________________________________________________。 (4)若分析再生植株的染色體變異類型，應剪取再生植株和雙親植株的根尖，制成裝片，然后在顯

14、微鏡下觀察比較染色體的__________________；將雜種植株栽培在含有________________的環(huán)境中，可篩選出具有高抗性的雜種植株。 答案　(1)植物體細胞雜交　植物組織培養(yǎng)　(2)纖維素酶和果膠酶　促進原生質體的融合　(3)保持原生質體完整性　愈傷組織　(4)形態(tài)和數(shù)目　黑腐病菌 解析　(1)據(jù)圖可知，該流程圖表示先去掉兩種植物細胞的細胞壁，然后誘導融合獲得雜種細胞，通過植物組織培養(yǎng)獲得雜種植株，該過程是植物體細胞雜交。(2)植物細胞細胞壁的成分是纖維素和果膠，因此采用纖維素酶和果膠酶去掉植物細胞的細胞壁；聚乙二醇(PEG)的作用是促進原生質體的融合。(3)去掉細胞壁

15、后獲得的原生質體需要放在適宜濃度的甘露醇溶液中，保持原生質體完整性，避免失水或吸水；在植物組織培養(yǎng)中，經過脫分化后形成愈傷組織。(4)由于染色體在顯微鏡下能看見，因此可以制作臨時裝片，觀察染色體的形態(tài)和數(shù)目，以確定是否發(fā)生染色體變異；對雜種植物進行鑒定最簡單的方法是從個體水平上進行檢測，即接種黑腐病菌，觀察植物的性狀。 植物體細胞雜交過程中雜種細胞類型及檢測方法 (1)誘導產生的細胞(假設用于雜交的兩種植物細胞分別為A、B) ①未融合的細胞：A和B。 ②兩兩融合的細胞：AA、BB和AB。 ③多細胞融合體。 (2)檢測方法：對誘導產生的細胞進行植物組織培養(yǎng)，然后根據(jù)得到的植物性狀

16、進行判斷。 ①若得到的是一種植物的性狀，說明是未融合細胞。 ②若得到的是具有兩種親本性狀的植物，說明是雜種植株。 ③若得到的是具有兩種親本性狀的植物，且一種植物的性狀得到加強，則是多細胞融合體。 ④若得到的是一種植物的性狀且效果得到加強，則是同種細胞融合的結果。 考點二　動物細胞培養(yǎng)與核移植技術 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1．動物細胞培養(yǎng) (1)原理：細胞增殖。 (2)培養(yǎng)條件 ①無菌、無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理，添加抗生素，定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產物。 ②營養(yǎng)：除正常的有機和無機營養(yǎng)外，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。 ③適

17、宜的溫度和pH：溫度為36.5±0.5_℃(哺乳動物)，pH為7.2～7.4。 ④氣體環(huán)境：含95%空氣加5%CO2的混合氣體。 (3)動物細胞的培養(yǎng)過程 (4)應用：生物制品的生產、檢測有毒物質、醫(yī)學研究。 小貼士　關于動物細胞培養(yǎng)的兩組概念辨析 (1)細胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制。 (2)原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng) ①原代培養(yǎng)：細胞懸液第一次在瓶中培養(yǎng)，沒有分瓶培養(yǎng)之前的細胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞核型正常。 ②傳代培養(yǎng)：進行分瓶后的擴大培養(yǎng)，即傳代培養(yǎng)。一般情況

18、下，細胞傳至10～50代后，增殖會明顯減緩，甚至完全停止，部分細胞出現(xiàn)核型異常。 2．動物體細胞核移植技術和克隆動物 (1)原理：動物體細胞核具有全能性。 (2)過程 (3)結果：產生新個體。 (4)應用：①加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育；②保護瀕危物種；③生產醫(yī)用蛋白；④作為異種移植的供體；⑤用于組織器官的移植。 深化拓展　植物組織培養(yǎng)與動物細胞培養(yǎng)的比較 比較項目 植物組織培養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng) 理論基礎 植物細胞的全能性 細胞增殖 前處理 無菌、離體 無菌；用胰蛋白酶處理，使組織細胞相互分散開 取材 植物較幼嫩的部位或花藥等 動物胚胎或出生不久

19、的幼齡動物的器官或組織 培養(yǎng)基性質 固體 液體 培養(yǎng)基成分 水、礦質元素、蔗糖、維生素、植物激素、瓊脂等 糖、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素、動物血清等 結果 最終產生新個體，體現(xiàn)了細胞的全能性 細胞培養(yǎng)產生大量細胞，不形成新個體，不能體現(xiàn)細胞的全能性 相同點 ①都需人工條件下的無菌操作；②都需要適宜的溫度、pH等條件；③都進行有絲分裂，都不涉及減數(shù)分裂 1．有關動物細胞培養(yǎng)的判斷 (1)制備肝細胞懸液時先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理(　×　) (2)肝細胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2刺激細胞呼吸(　×　) (3)在25 ℃的實驗條

20、件下可順利完成大鼠神經細胞的培養(yǎng)(　×　) (4)培養(yǎng)保留接觸抑制的細胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細胞(　×　) (5)克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過程中多數(shù)細胞的基因型會發(fā)生改變(　×　) (6)二倍體細胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無限的(　×　) 2．有關動物細胞核移植的判斷 (1)動物細胞核移植的受體細胞必須是卵細胞(　×　) (2)克隆動物的性狀與供體動物完全相同(　×　) (3)與“多利”羊等克隆哺乳動物相關的技術有胚胎移植、細胞培養(yǎng)和核移植(　√　) (4)用于核移植的供體細胞一般都選用10代以內的培養(yǎng)細胞(　√　) 如圖為動物細胞培養(yǎng)過程中細胞增殖情況的變化曲線，圖中B、E兩點表示

21、經篩選、分裝后繼續(xù)培養(yǎng)。據(jù)圖分析： (1)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的分界點是哪個？ 提示　B點之前的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，之后的培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。 (2)AB段和DE段繁殖速度緩慢的原因是什么？ 提示　AB段發(fā)生了接觸抑制；DE段細胞大部分衰老失去分裂能力。 (3)E點后的細胞大多數(shù)具有異倍體核型，這樣的細胞有什么特點？ 提示　E點后的細胞屬于細胞系，能無限增殖。 命題點一　動物細胞培養(yǎng)過程的分析 1．下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　) A．動物細胞培養(yǎng)過程中，可用胃蛋白酶處理使細胞分散開 B．通過動物細胞培養(yǎng)獲得大量細胞，可證明動物細胞具有全能性 C．動物細胞培

22、養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎 D．動物細胞培養(yǎng)選用的培養(yǎng)材料大多是動物的受精卵 答案　C 解析　動物細胞培養(yǎng)過程中，應用胰蛋白酶處理使細胞分散開，A項錯誤；通過動物細胞培養(yǎng)獲得大量細胞，沒有獲得完整個體，不能證明動物細胞具有全能性，B項錯誤；動物細胞培養(yǎng)選用的培養(yǎng)材料大多是幼齡動物的組織或細胞，D項錯誤。 2．(2018·六安一中質檢)回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題： (1)在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面______________時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的____________。此時，瓶壁上形成的細胞是________層。要使貼壁的細胞從

23、瓶壁上分離下來，需要用酶處理，用到的酶是____________。 (2)隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)__________________現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而獲得________，該種細胞的黏著性________，細胞膜表面蛋白質(糖蛋白)的量________。 (3)現(xiàn)用某種大分子染料對細胞進行染色時，觀察到死細胞被染色，而活細胞不被染色，原因是________________________________________________________________________ _____________

24、___________________________________________________________。 (4)檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用分裂________期的細胞在顯微鏡下進行觀察。 (5)在細胞培養(yǎng)過程中，通常在________條件下保存細胞。因為在這種條件下，細胞中________的活性降低，細胞______________速率降低。 答案　(1)相互接觸　接觸抑制　單(或一)　胰蛋白酶 (2)衰老甚至死亡　不死性　降低　減少　(3)活細胞的細胞膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入活細胞內(或死細胞的細胞膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進

25、入死細胞內而著色)　(4)中　(5)冷凍(或超低溫、液氮)　酶　新陳代謝 解析　(1)細胞接觸抑制是指細胞表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖的現(xiàn)象?；谏鲜鎏匦裕勘谏闲纬傻募毎菃螌优帕械?。需要用胰蛋白酶將貼壁的細胞從瓶壁上分離下來。(2)隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)衰老甚至死亡現(xiàn)象，但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而變成不死性細胞。該種細胞由于細胞表面糖蛋白減少，其黏著性降低。(3)活細胞的細胞膜具有選擇透過性，大分子染料不能通過，所以活細胞不被染色；死細胞的細胞膜失去了選擇透過性，大分子染料可以通過，所以死細胞能被大分子染料染色。(

26、4)有絲分裂中期時染色體的著絲點排列在赤道板上，染色體形態(tài)固定、數(shù)目清晰，是觀察染色體數(shù)目的最佳時期。(5)在細胞培養(yǎng)過程中，通常在冷凍(或超低溫、液氮)條件下保存細胞。因為在這種條件下，細胞中酶的活性降低，細胞新陳代謝的速率降低。 動物細胞培養(yǎng)的2個易錯點 (1)動物細胞培養(yǎng)時選用幼齡動物組織或胚胎進行細胞培養(yǎng)，因為其分化程度低，增殖能力強，更易于培養(yǎng)。 (2)動物細胞培養(yǎng)時加入CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH；O2 的作用是促進細胞有氧呼吸。 命題點二　動物體細胞核移植過程的分析 3．如圖是某克隆羊培育過程模式圖，試分析獲得該克隆羊的生殖方式、該克隆羊的基因型以及該克隆

27、羊發(fā)育成熟時所分泌的性激素依次是(　　) A．無性生殖、Aa、雌性激素 B．無性生殖、aa、雄性激素 C．有性生殖、aa、雄性激素 D．有性生殖、AA、雌性激素 答案　B 解析　克隆羊是利用了細胞核移植技術，其生殖方式為無性生殖；該克隆羊繼承了B羊的全部的細胞核基因和A羊的細胞質基因，因此其基因型為aa；由于B羊為雄性，因此該克隆羊亦為雄性，故該克隆羊發(fā)育成熟時分泌的性激素是雄性激素，故B項正確。 4．克隆羊的成功轟動世界，它不僅奠定了疾病克隆性治療的基礎，又解決了器官移植中供體不足的問題，同時也給人類帶來了一些過去尚未遇到的問題。下圖為人類對克隆羊技術的拓展和應用，請據(jù)圖回

28、答： (1)圖中所涉及的現(xiàn)代生物技術有_______________________________________________ 和____________________等。若讓動物1能夠產生出人體胰島素，還需要的技術是________________________________________________________________________。 (2)圖中兩個克隆動物長大后，各方面特征與雄性動物相同，這說明____________具有全能性。 (3)使用培養(yǎng)基進行胚胎干細胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中除了加入一些必要的營養(yǎng)成分外，通常要加入____________等天

29、然成分，除了保證被培養(yǎng)細胞處于無菌、無毒及充足氧氣的環(huán)境中，還需要保證細胞生活所需的____________。 (4)圖中“從內細胞團到胚胎干細胞”的培養(yǎng)過程中，一般用____________處理內細胞團，使之分散成單個細胞。 答案　(1)動物細胞核移植　胚胎移植(或胚胎分割)　基因工程(或DNA重組技術)　(2)體細胞核　(3)血清、血漿　溫度和pH　(4)胰蛋白酶 解析　(1)將細胞核與去核的卵母細胞構建成重組細胞，采用了動物細胞核移植技術；將重組細胞培養(yǎng)成早期胚胎，采用了早期胚胎培養(yǎng)技術；將早期胚胎移植到代孕母體，采用了胚胎移植技術；從早期胚胎中分離出內細胞團，進而培育成胚胎干細胞

30、，離不開動物細胞培養(yǎng)技術和胚胎干細胞培養(yǎng)技術的支持；早期胚胎分為胚胎1和2，運用了胚胎分割技術。若讓動物1能夠產生出人體胰島素，需要借助基因工程技術將人的胰島素基因導入相應的受體細胞，進而培育成轉基因動物1。(2)克隆動物的培育成功，說明動物體細胞核具有全能性。(3)使用培養(yǎng)基進行胚胎干細胞培養(yǎng)時，由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，所以培養(yǎng)基中除了加入一些必要的營養(yǎng)成分外，通常要加入血清、血漿等一些天然成分。除了保證被培養(yǎng)細胞處于無菌、無毒及充足氧氣的環(huán)境中，還需要保證細胞生活所需的溫度和pH。(4)從“內細胞團到胚胎干細胞”的培養(yǎng)過程中，會出現(xiàn)細胞的“接觸抑制”現(xiàn)象，因此常用胰蛋

31、白酶處理內細胞團，使之分散成單個細胞。 動物細胞核移植技術中的3個易錯點 (1)動物細胞核移植技術，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性而非細胞的全能性。 (2)克隆屬于無性繁殖，產生新個體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一致。 (3)核移植技術獲得的動物與供核動物性狀不完全相同的原因：①克隆動物線粒體中的DNA來自去核卵(母)細胞；②性狀受環(huán)境的影響；③在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變。 考點三　動物細胞融合與單克隆抗體的制備 1．動物細胞融合 (1)概念：兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，也稱細胞雜交。 (2)條件：需要用聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒或電激等誘導因

32、素。 (3)原理：細胞膜的流動性。 (4)結果：形成具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。 (5)意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。 深化拓展　植物體細胞雜交與動物細胞融合比較 植物體細胞雜交 動物細胞融合 培養(yǎng)條件 營養(yǎng)物質(水、無機鹽、蔗糖、氨基酸和有機酸等)、激素(細胞分裂素、生長素等)及其他條件(無菌、適宜的溫度和pH等) 葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、血清或血漿等天然成分 細胞融合原理 細胞膜的流動性、細胞的全能性

33、 細胞膜的流動性、細胞增殖 細胞融合方法 用纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質體融合 用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞后，誘導細胞融合 誘導手段 ①物理法：離心、振動、電激等 ②化學法：聚乙二醇(PEG) ①物理、化學法：與植物體細胞雜交的相同 ②生物法：滅活的病毒 結果 獲得雜種植株 獲得雜種細胞，以生產細胞產品 用途 克服不同生物遠緣雜交不親和的障礙 制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等 2.單克隆抗體 (1)制備過程 (2)優(yōu)點：特異性強、靈敏度高，可大量制備。 (3)用途：作為診斷試劑；用于治療疾病和運載藥物。 (1)植物原

34、生質體融合與動物細胞融合原理是相同的(　√　) (2)體細胞雜交技術可用于克隆動物和制備單克隆抗體(　×　) (3)小鼠骨髓瘤細胞的染色體數(shù)為40，B淋巴細胞的染色體數(shù)為46，融合后形成的雜交瘤細胞DNA分子數(shù)為86(　×　) (4)雜交瘤細胞進行體內培養(yǎng)，是為了獲得能產生單克隆抗體的胚胎(　×　) (5)B淋巴細胞和骨髓瘤細胞經細胞融合后有三種細胞類型(若僅考慮兩兩融合的情況)(　√　) 下圖為制備單克隆抗體和多克隆抗體的示意圖，據(jù)圖分析： (1)與多克隆抗體相比，單克隆抗體的優(yōu)點有哪些？ 提示　單克隆抗體的優(yōu)點是特異性強、靈敏度高，可大量制備。 (2)圖中第一次篩選

35、和第二次篩選的目的有何不同？ 提示　第一次篩選的目的是篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選的目的是篩選出能產生所需單克隆抗體的雜交瘤細胞。 命題點一　細胞融合的原理及過程分析 1．一系列實驗證明細胞膜具有流動性，熒光抗體免疫標記實驗就是其中的一個典型例子。下圖表示了人、鼠細胞融合的過程，研究中分別將帶有綠色熒光、能與人體細胞膜上HLA抗原特異性結合的抗體和帶有紅色熒光、能與小鼠細胞膜上H2抗原特異性結合的抗體放入細胞培養(yǎng)液中，對人、鼠細胞進行標記。下列有關該實驗的敘述不正確的是(　　) A．要使實驗現(xiàn)象明顯，可以適當提高細胞培養(yǎng)液的溫度 B．選取不同生物細胞進行融合是因為不同生物細胞

36、表面抗原差異較大 C．實驗表明不同種生物細胞可以雜交，而同種生物細胞不能進行融合 D．實驗結果可以直接證明細胞膜上的蛋白質分子可以運動 答案　C 2．(2017·合肥三模)下圖表示細胞工程的流程圖(a、b表示過程)，請據(jù)圖回答下列問題： (1)若圖示為動物細胞融合的過程，則a特有的誘導劑是______________________。以動物細胞融合為基礎發(fā)展起來的雜交瘤技術為制造單克隆抗體開辟了新途徑，通過把能產生抗體的____________細胞與能在體外大量增殖的________________細胞進行融合，得到既能迅速大量繁殖，又能產生專一抗體的雜交瘤細胞。 (2)若圖示

37、為植物體細胞雜交過程，則在甲、乙融合之前，需要用__________________(填酶)制備________。這項工程的意義是______________________________。 (3)由甲、乙融合得到丙細胞的基本原理是______________________。 答案　(1)滅活的病毒　B淋巴(漿)　骨髓瘤　(2)纖維素酶和果膠酶　原生質體　克服遠緣雜交不親和的障礙，擴大親本組合的范圍　(3)細胞膜的流動性 解析　(1)若a是誘導動物細胞融合，則特有的誘導劑是滅活的病毒。在單克隆抗體的制備過程中，利用已免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞，該細胞既可以迅速大

38、量增殖，又可以產生專一的抗體。(2)在植物體細胞雜交過程中，需要對甲、乙細胞先用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，然后再誘導甲、乙的原生質體融合。該技術可以克服遠緣雜交不親和的障礙，擴大親本組合的范圍。(3)甲、乙細胞融合形成丙細胞，利用了細胞膜的流動性。 命題點二　單克隆抗體制備過程的分析 3．關于下面制備單克隆抗體過程示意圖的敘述，不正確的是(　　) A．①表示已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均是從小鼠的脾臟中提取的 B．②促進細胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導 C．④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的 D．⑤可以無限增殖 答案　A 解析　已免疫的B淋巴細胞可以從小鼠的脾臟中

39、提取，也可以從血漿中提取，骨髓瘤細胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞得到的，融合方法可以用化學方法——聚乙二醇，生物方法——滅活的病毒等。如果要篩選能產生特定抗體的細胞群，可以通過檢測抗原—抗體反應，如果有反應說明產生了抗體。融合細胞具有雙親的特點，既能無限增殖又能產生單一抗體。 4．(2017·平羅中學第一次月考)類風濕性關節(jié)炎(RA)是一種自身免疫病，致殘性強。研究表明，該病的致病機理與腫瘤壞死因子－α(TNF－α)密切相關，而一種人鼠嵌合的抗TNF－α單克隆抗體能有效治療RA。如圖為該單克隆抗體制備過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題

40、： (1)單克隆抗體的制備涉及細胞工程中的____________、____________技術。 (2)圖中抗原A是______________，HAT培養(yǎng)基的作用是________________。將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞具有的特點是_______________________________。 (3)醫(yī)療上，把單克隆抗體與化學藥物或細胞毒素相結合制成“______________”，借助抗體的定向作用將藥物帶到病變細胞并將其殺死。 (4)克隆動物是指用______________方法得到的動物。 (5)單克隆抗體的特點是____________、_____

41、_______、____________。 答案　(1)動物細胞融合(或雜交瘤)　動物細胞培養(yǎng)　(2)腫瘤壞死因子－α(或TNF－α)　篩選出雜交瘤細胞　既能大量增殖，又能產生特異性抗體　(3)生物導彈　(4)(動物體細胞)核移植　(5)特異性強　靈敏度高　并可大量制備 解析　(1)單克隆抗體的制備涉及動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合技術。(2)圖中刺激免疫動物產生抗TNF－α單克隆抗體的抗原是腫瘤壞死因子－α(或TNF－α)。HAT培養(yǎng)基的作用是篩選出雜交瘤細胞。雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產生特異性抗體。(3)醫(yī)療上，把單克隆抗體與化學藥物或細胞毒素相結合制成“生物導彈”，借助抗體的定向作用

42、將藥物帶到病變細胞并將其殺死。(4)克隆動物是指用核移植方法得到的動物。(5)單克隆抗體的特點是：特異性強、靈敏度高，并可大量制備。 矯正易錯　強記長句 1．具有全能性≠體現(xiàn)(實現(xiàn))全能性 具有全能性：理論上，具有細胞核的活細胞都具有全能性；體現(xiàn)(實現(xiàn))全能性：只有發(fā)育成完整個體，才能說明體現(xiàn)(實現(xiàn))了細胞的全能性。 2．有關植物體細胞雜交的3個易錯點 (1)誤認為植物體細胞雜交的結果只是形成雜種細胞。植物體細胞雜交的結果最終要經過組織培養(yǎng)形成雜種植株。 (2)誤認為植物體細胞雜交屬于有性生殖。植物體細胞雜交過程中沒有有性生殖細胞的結合，因此不屬于有性生殖，應為無性生殖。 (

43、3)誤認為雜種植株的變異類型屬于基因重組。雜種植株的染色體數(shù)通常是兩親本細胞染色體數(shù)目之和，屬于異源多倍體，所以變異類型為染色體變異。 3．B淋巴細胞要經過免疫過程，才能產生相應的抗體，所以，與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞實際上是漿細胞。 4．在單克隆抗體制備過程中，有兩次篩選：第一次是篩選出雜交瘤細胞(用選擇培養(yǎng)基)；第二次是進一步篩選出能產生人們所需要抗體的雜交瘤細胞(用抗原—抗體結合法)。 1.植物組織培養(yǎng)的過程主要包括脫分化和再分化兩個階段，脫分化的結果是形成愈傷組織，再分化的結果是形成根和芽。 2．植物體細胞雜交需要用酶解法制備原生質體，所用的酶包括纖維素酶和果膠酶。 3

44、．無論是植物體細胞雜交還是動物細胞融合，都需要誘導。 4．植物組織培養(yǎng)需要各種營養(yǎng)成分和植物激素，動物細胞培養(yǎng)也需要各種營養(yǎng)成分及血清。 5．植物體細胞雜交可用于作物育種，動物細胞融合可用于單克隆抗體的制備。 6．產生單克隆抗體的細胞是雜交瘤細胞，它既能產生單克隆抗體又能無限增殖。 重溫高考　演練模擬 1.如圖為細胞融合示意圖(只考慮細胞兩兩融合)，若A、B分別是基因型為Hhrr、hhRr兩個煙草品種的花粉，兩對基因獨立遺傳，由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于800 lx時，都不能生長。下列敘述正確的是(　　) ①誘導細胞融合的方法是用滅活病毒處理，原理是

45、細胞膜的流動性　②實驗開始時必須用纖維素酶和果膠酶除去不利于原生質體融合的結構?、墼诖笥?00 lx光照下培養(yǎng)，可淘汰5種融合細胞，篩選出基因型為HhRr的雜種細胞　④利用植物組織培養(yǎng)技術可將融合細胞培養(yǎng)成雜種煙草植株，原理是細胞具有全能性 A．①②③④ B．①②③ C．②④ D．②③④ 答案　D 解析　誘導植物原生質體融合的方法沒有滅活的病毒，滅活的病毒只能誘導動物細胞的融合，①錯誤；實驗開始時必須用纖維素酶和果膠酶除去不利于原生質體融合的結構——細胞壁，②正確；根據(jù)基因的自由組合規(guī)律可以看出，A的花粉即配子的基因型為Hr、hr，B的花粉基因型為hR、hr，誘導融合產生的雜種

46、細胞(只考慮兩個原生質體的融合)共有6種基因型，即HHrr、hhrr、hhRR、HhRr、Hhrr、hhRr，在大于800 lx光照下培養(yǎng)，其中HHrr、hhrr、hhRR、Hhrr、hhRr的個體不能生長，只有同時具備了H和R基因才能夠生長，可淘汰5種融合細胞，篩選出基因型為HhRr的雜種細胞，③正確；利用植物組織培養(yǎng)技術可將融合細胞培養(yǎng)成雜種煙草植株，原理是細胞具有全能性，④正確。 2．(2017·武漢調研)應用植物組織培養(yǎng)技術，不僅可實現(xiàn)種苗的快速繁殖、培育無病毒植株，也可加快作物及苗木育種。下面是培育柑橘耐鹽植株的實驗流程： 回答下列問題： (1)愈傷組織是由離體的莖段經__

47、__________過程形成的，此時愈傷組織細胞________(填“具有”或“不具有”)細胞的全能性。 (2)對愈傷組織進行了兩次處理，處理1中γ射線照射的目的是________________，用γ射線不直接處理莖段而是處理愈傷組織，原因是 __________________________________________；處理2中添加的物質X為___________________________________________________。 (3)植物組織培養(yǎng)技術也被廣泛應用于其他作物的育種中。在培育白菜—甘藍、三倍體無子西瓜、農桿菌轉化法獲得的抗

48、蟲棉中，必須用到植物組織培養(yǎng)技術的是____________________。 答案　(1)脫分化　具有　(2)誘發(fā)基因突變　愈傷組織細胞分裂能力強，易誘發(fā)基因突變　NaCl(或鹽)　(3)白菜—甘藍、抗蟲棉 解析　(1)離體的莖段經過脫分化過程可形成愈傷組織，此時愈傷組織具有未分化的特點，細胞依然具有較高的全能性。(2)圖中對愈傷組織進行了兩次處理，第一次處理是用γ射線照射誘發(fā)愈傷組織細胞發(fā)生基因突變。愈傷組織細胞分裂能力強，易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而發(fā)生基因突變；第二次處理是抗鹽接種實驗，即在培養(yǎng)基中加入NaCl，適應一定濃度鹽的愈傷組織才可以生長，不適應的愈傷組織死亡。(3)作

49、物育種研究中常用農桿菌轉化法將含抗蟲基因的Ti質粒導入到植物體細胞中，再利用植物組織培養(yǎng)技術獲得抗蟲的農作物。運用細胞工程培育白菜—甘藍雜種植株，需要采用植物組織培養(yǎng)技術將雜種細胞培養(yǎng)成雜種植株。 3．(2013·新課標Ⅱ，40)甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時含有A和B的新型藥用植物。 回答下列問題： (1)為了培育該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用________酶和________酶去除細胞壁，獲得具有活力的________，再用化學誘導劑誘導二者融合。形成的融合細胞進一步培養(yǎng)形成________組織，然后經過__

50、______形成完整的雜種植株。這種培育技術稱為__________________。 (2)上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指_______________________________________ ____________________________。假設甲與乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，造成這種差異的原因是____________________________________________________ ________________。 (3)這種雜種植株可通過制作人工種子的方法來大量繁殖。經植物組織培養(yǎng)得到的________________

51、__________________等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 答案　(1)纖維素　果膠　原生質體　愈傷　再分化(分化)　植物體細胞雜交技術 (2)由受精卵發(fā)育來的體細胞中含有三個或三個以上染色體組的個體　在減數(shù)分裂過程中，前者染色體聯(lián)會異常，而后者染色體聯(lián)會正常　(3)胚狀體、不定芽、頂芽、腋芽 解析　(1)該新型藥用植物是通過植物體細胞雜交技術獲得的。要獲得有活力的原生質體才能進行體細胞雜交，因此首先用纖維素酶和果膠酶去掉植物的細胞壁，然后用PEG化學誘導劑(物理方法：離心、振動等)誘導二者的原生質體融合。然后采用植物組織培養(yǎng)技術獲得雜種植株，植物組織培養(yǎng)的主要過程是：先

52、脫分化形成愈傷組織，然后再分化形成植物體，利用了植物細胞的全能性。(2)如果植物甲、乙是兩個物種，二者不能通過有性雜交產生可育后代，原因是甲、乙有性雜交所產生的后代在減數(shù)分裂過程中同源染色體聯(lián)會異常，也就是存在著生殖隔離。但植物甲、乙通過植物體細胞雜交技術產生的后代卻是可育的，因為在減數(shù)分裂過程中同源染色體能完成正常的聯(lián)會，產生正常的配子。(3)將植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽、腋芽等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 4．(2016·全國Ⅱ，40)下圖表示通過核移植等技術獲得某種克隆哺乳動物(二倍體)的流程。 回答下列問題： (1)圖中A表示正常細胞核，染色體數(shù)為2n，則

53、其性染色體的組成可為__________________。過程①表示去除細胞核，該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當時期再進行，去核時常采用________________的方法。②代表的過程是________________。 (2)經過多次傳代后，供體細胞中________________的穩(wěn)定性會降低。因此，選材時必須關注傳代次數(shù)。 (3)若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質的角度分析其原因是________________________________________________________________________ _________________

54、_______________________________________________________。 (4)與克隆羊“多利”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)XX或XY　顯微操作(去核法)　胚胎移植　(2)遺傳物質　(3)卵母細胞的細胞質中的遺傳物質會對克隆動物的性

55、狀產生影響　(4)動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性 解析　(1)因供體的性別不確定，故其細胞核內的性染色體組成為XX或XY；一般將卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ中期，用顯微操作法將其細胞核去除；②代表的過程是胚胎移植。(2)傳代培養(yǎng)10代以內的細胞可以保持正常的二倍體核型，超過10代以后，供體細胞中遺傳物質的穩(wěn)定性會降低。(3)克隆動物細胞質中的遺傳物質來自卵母細胞的細胞質，細胞質中的遺傳物質對克隆動物的性狀會產生影響。(4)克隆動物的成功可以證明動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性。 5．(2014·新課標Ⅰ，40)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免

56、疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應的血清最大稀釋倍數(shù))，結果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目為40條)，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目為60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導細胞融合，經篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞。 回答下列問題： (1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16 000以上，則小鼠最少需要經過______次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是______小鼠，理由是

57、 ________________________________________________________________________。 (2)細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交廇細胞外，可能還有__________________________________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是______________________________。 (3)雜交瘤細胞中有________個細胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細胞經多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是___________

58、_____________________________________________________________。 答案　(1)4　Y　Y小鼠的血清抗體效價最高　(2)B淋巴細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞　細胞融合是隨機的，且融合率達不到100% (3)1　100　(4)不能無限增殖 解析　(1)據(jù)圖分析可知，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血清抗體效價幾乎都達到16 000以上，小鼠Y的血清抗體的效價最高，最適合用于制備單克隆抗體。(2)融合體系中除了未融合的細胞和雜交瘤細胞之外，還有骨髓瘤細胞的自身融合細胞和B淋巴細胞的自身融合細胞。細胞的融合是隨機的，并

59、且不可能所有的細胞都融合，故體系中會出現(xiàn)多種類型的細胞。 (3)動物細胞融合后形成的是具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞。雜交瘤細胞的細胞核中的染色體數(shù)目最多為40＋60＝100(條)。(4)正常細胞的分裂次數(shù)是有限的，且經過免疫的B淋巴細胞高度分化，不能無限增殖，經多次傳代培養(yǎng)后逐漸衰老死亡。 1．(2018·六安一中月考)下圖表示利用棉花葉肉細胞原生質體培養(yǎng)進行遺傳改良的過程，據(jù)圖分析錯誤的是(　　) A．①過程需在適宜條件下用纖維素酶和果膠酶的混合物處理 B．②過程能定向誘導原生質體產生優(yōu)良性狀的突變 C．③過程中葉肉細胞失去了其特有的結構和功能 D．④過程需用適宜

60、配比的生長素和細胞分裂素處理 答案　B 解析　紫外線照射可誘導原生質體發(fā)生突變，但突變是不定向的。 2．下列有關細胞工程的敘述，正確的是(　　) A．PEG是促細胞融合劑，可直接誘導植物細胞融合 B．用原生質體制備人工種子，要防止細胞破裂 C．骨髓瘤細胞經免疫處理，可直接獲得單克隆抗體 D．核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體 答案　D 解析　PEG是促細胞融合劑，但植物細胞不能直接融合，需先去壁形成原生質體才能融合，A錯誤；制備人工種子應用完整的植物細胞，不需制備原生質體，B錯誤；骨髓瘤細胞不能產生抗體，C錯誤；核移植克隆的動物，其線粒體來自卵細胞即線粒體DNA來自

61、供卵母體，D正確。 3．下面的簡式表示植物組織培養(yǎng)的大致過程，據(jù)此判斷錯誤的是(　　) ①②③→④ A．若①是來自不同植物體細胞融合的雜種細胞，則④可能出現(xiàn)不同植物的遺傳特性 B．若①是花粉，則④是單倍體植株，經染色體加倍后可得到穩(wěn)定遺傳的品種 C．若①是人參細胞，對②進行擴大培養(yǎng)可提高細胞產物——人參皂甙的產量 D．若①是具有雜種優(yōu)勢的農作物細胞，則用③進行微型繁殖會發(fā)生性狀分離 答案　D 解析　若①是具有雜種優(yōu)勢的農作物細胞，則用③進行微型繁殖進行的是有絲分裂，不會發(fā)生性狀分離。 4．生物技術的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復生”將不再是神話。如果世界上最后一頭野驢剛死

62、亡，以下提供的“復生”野驢個體的方法中能夠成功的是(　　) A．將野驢的體細胞取出，利用細胞培養(yǎng)技術，可培育成新個體 B．將野驢的體細胞兩兩融合，再經組織培養(yǎng)培育成新個體 C．取出野驢的體細胞核移植到母家驢的去核卵母細胞中，經孕育培養(yǎng)成新個體 D．將野驢的一個基因導入家驢的受精卵中，培育成新個體 答案　C 解析　野驢的體細胞的全能性已經受到限制，不能經過培養(yǎng)形成新個體；將野驢的一個基因導入家驢的受精卵中，培育成的是帶有野驢基因的家驢；野驢的體細胞核中具有發(fā)育成野驢的全部基因，因此通過核移植技術，可使野驢“復生”。 5．用動物細胞工程技術制備單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是(　　

63、) A．將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的B淋巴細胞 B．用氯化鈣作誘導劑，促使能產生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合 C．篩選雜交瘤細胞，并從中選出能產生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體 D．該雜交瘤細胞株的增殖方式和產物分別是有絲分裂和單克隆抗體 答案　B 解析　B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合需要滅活的病毒、聚乙二醇或物理因素來誘導；氯化鈣不能作為誘導劑，氯化鈣的作用是在基因工程中用于提高細胞壁的通透性，便于重組質粒進入微生物細胞內。 6．藍莓中富含的花青素能有效地改善視力，下面為科學家利用植物組織培養(yǎng)的方法，大量培養(yǎng)藍莓具體流程的文字圖解。請回答下列問題：

64、 (1)用于離體培養(yǎng)的藍莓組織叫做____________，該技術的原理是________________。 (2)配制MS培養(yǎng)基時，應加入一定量的瓊脂、蔗糖、無機鹽、維生素、有機物等營養(yǎng)物質，蔗糖除作為碳源外，還具有______________________的功能。常用的培養(yǎng)基有脫分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基的主要差異是 ________________________________________________________________________。 (3)圖中藍莓組織要經過消毒處理后才能進行培養(yǎng)。其①過程中，細胞的分化程度會

65、________(填“升高”“降低”或“不變”)。 (4)愈傷組織經過②③過程重新分化成根或叢芽的過程叫________________。 (5)藍莓花青素在60 ℃以下的熱穩(wěn)定性較好，將含花青素的粗品經真空干燥(可使水的沸點降低40 ℃)制成成品。采用該方法的主要原因是_______________________________________。 答案　(1)外植體(植物)　細胞的全能性　(2)提供能量和維持滲透壓　生長素和細胞分裂素的用量及比例不同 (3)降低　(4)再分化　(5)避免(干燥時溫度過高導致)花青素分解 解析　(1)植物組織培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性，用于離體培

66、養(yǎng)的組織叫做外植體。(2)配制MS培養(yǎng)基時，應加入一定量的瓊脂、蔗糖、無機鹽、維生素、有機物等營養(yǎng)物質，蔗糖除作為碳源外，還具有提供能量和維持滲透壓的功能。常用的培養(yǎng)基有脫分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和生芽培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基的主要差異是生長素和細胞分裂素的用量及比例不同。(3)圖中①過程是脫分化形成愈傷組織的過程，高度分化的細胞恢復分裂能力，則分化程度降低。(4)圖中②③過程是愈傷組織經過再分化形成叢芽或根的過程。(5)含花青素的粗品經真空干燥(可使水的沸點降至40 ℃)制成成品，采用該方法的主要原因是避免(干燥時溫度過高導致)花青素分解。 7．(2017·蕪湖質檢)下圖為A、B兩種二倍體植物體細胞雜交過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題： (1)步驟①的方法是____________。步驟②常用的化學試劑是____________，之后________(填“是”或“否”)需要篩選。 (2)在利用雜種細胞培育成為雜種植物的過程中，運用的技術手段是________________，其中步驟④是________________________________________________