《人教版教學(xué)課件遼寧省黑山縣第一高級中學(xué)高二生物選修一《土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)》課件》由會員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《人教版教學(xué)課件遼寧省黑山縣第一高級中學(xué)高二生物選修一《土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)》課件(12頁珍藏版)》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、專題專題2 2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,進(jìn)行微研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,進(jìn)行微生物數(shù)量的測定。生物數(shù)量的測定。 土壤中能分解尿素的細(xì)菌土壤中能分解尿素的細(xì)菌(1)從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌)從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌(2)統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這)統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細(xì)菌樣的細(xì)菌(一)篩選菌株(一)篩選菌株原理:原理:有選擇作用,常用方法常用方法:稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法,:稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法, 還可以用過濾膜法還可以用過濾膜法:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,
2、培養(yǎng)基表 面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋 液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的 菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有 多少活菌。多少活菌。為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在3030030300的平板進(jìn)的平板進(jìn)行計數(shù),若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn),意味著操作有誤,行計數(shù),若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn),意味著操作有誤,需重新實驗需重新實驗。 :設(shè)置重復(fù)組,目的是增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣設(shè)置重復(fù)組,目的是增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列品經(jīng)一系列101
3、0倍稀釋,然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取倍稀釋,然后選擇三個稀釋度的菌液,分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上,然后用無菌涂布器將菌液涂接種到已制備好的平板上,然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面,放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是布在整個平板表面,放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的結(jié)果接近真實值,可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)平板上,經(jīng)涂布培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)2、顯微鏡直接計數(shù)法(1)原理:此法利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。(
4、2)方法:用計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是特制的載玻片,其上有特定的面積為1mm2,高為0.1mm的計數(shù)室,一個計數(shù)室又被分成25個(或16個)中格,每個中格再被分成16個(或25個)小格,每個計數(shù)室都由400個小格組成。(3)操作:將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上,蓋上蓋玻片,然后在顯微鏡下計數(shù)45個中格中的細(xì)菌數(shù),并求出每個小格所含的細(xì)菌數(shù),再按計數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。(4)計算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù)(5)缺點:不能區(qū)分死菌與活菌。3過濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上,
5、大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色??梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。 1. 1.想一想,如何從平板上的菌落數(shù)推測出想一想,如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?每克樣品中的菌落數(shù)?答:統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),答:統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),最好能統(tǒng)計最好能統(tǒng)計3 3個平板,計算出平板菌落數(shù)的平個平板,計算出平板菌落數(shù)的平均值,然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計算。均值,然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計算。A A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同,可能同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同,可能的解釋有兩種。的解釋有兩種。一是由于土樣不同一是由于土樣不同;二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤二是由于培養(yǎng)基
6、污染或操作失誤。 (三)設(shè)置對照(三)設(shè)置對照究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。另一種方案另一種方案:將將A A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培養(yǎng)基是下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結(jié)否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結(jié)果要有說服力,對照的設(shè)置是必不可少的。果要有說服力,對照的設(shè)置是必不可少的。實驗方案有兩種實驗方案有兩種一種方案一種方案:可以由其他同學(xué)用與可以由其他同學(xué)用與A A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實驗,如果結(jié)果與行實驗,如果結(jié)果與A A同學(xué)一致,則證明同學(xué)一致,則證明A A無無誤;如果結(jié)果不同,則證明誤;如果結(jié)果不同,則證明A A同學(xué)存在操作失同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。誤或培養(yǎng)基的配制有問題。四、實驗案例四、實驗案例 實驗的具體操作步驟如下實驗的具體操作步驟如下: : 1.1.土壤取樣土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土表層土3 cm3 cm左右,再取樣,將樣品裝入事左右,再取樣,將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。先準(zhǔn)備好的信封中。土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計數(shù)土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計數(shù)