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1、植物組織培養(yǎng)技術植物組織培養(yǎng)技術組織培養(yǎng)概述組織培養(yǎng)概述1.組織培養(yǎng)定義組織培養(yǎng)定義 組織培養(yǎng)是指用無菌方法使植物體的離體器官、組織和細胞在人為提供的條件下生長和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術的總稱，也稱之為離體培養(yǎng)。離體培養(yǎng)。2.組織培養(yǎng)的發(fā)展組織培養(yǎng)的發(fā)展植物組織培養(yǎng)是二十世紀發(fā)展起來的新技術。 它的發(fā)展經歷了四個發(fā)展階段：（一）萌芽階段（一）萌芽階段（從20世紀初到30年代中）： 1902年德國植物生理學家Haberlandt提出細胞全能性概念，并首次進行離體細胞培養(yǎng)，但沒有成功。 1904年，Hanning 最先成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣根菜的胚。1922年，Knudson 采用胚培養(yǎng)法獲得大量蘭花幼苗

2、。（二）奠基階段（從20世紀30年代末到50年代中）： 1934年，White 用番茄根尖建立起第一個活躍生長的無性繁殖系，從而使非胚器官的培養(yǎng)首先獲得成功。 1939年，Gautherete培養(yǎng)胡蘿卜根小外植體成功。 1943年，White提出了植物細胞“全能性”學說，標志組織培養(yǎng)成為一門新興學科。1952-1953年：美國科學家Steward F.C. 用胡蘿卜根的細胞懸浮培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)單個細胞能象受精卵發(fā)育成胚一樣的途徑，發(fā)育成完整植抹。證實了植物細胞“全能性”學說。（三）快速發(fā)展和應用階段（三）快速發(fā)展和應用階段（從20世紀50年代末到現(xiàn)在） 1960年以來組織培養(yǎng)理論、實踐、技術和方法不

3、斷完善和發(fā)展，并廣泛應用于生物學的許多分支學科。 1960年，Cocking酶解法分離原生質體獲得成功，使植物細胞可以象動物細胞一樣進行細胞融合。 1960年，Morel等人通過對蘭花莖尖進行培養(yǎng)，獲得了快速繁殖的脫毒蘭花，隨后在國內外進行了“蘭花試管苗產業(yè)化”。 1964年，印度學者Guha和Maheshwari成功地培養(yǎng)曼陀羅花藥獲得單倍體再生植株，從而促進了植物花藥培養(yǎng)單倍體育種技術的發(fā)展。3.植物組織培養(yǎng)的基礎理論植物組織培養(yǎng)的基礎理論植物細胞的全能性植物細胞的全能性定義定義：植物細胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一定條件下具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。原理原理：生物體的每一個細胞

4、都包含有該物種所特有的全套遺傳物質，都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因，從理論上講，生物體的每一個活細胞都應該具有全能性。差異差異：（1） 受精卵的全能性最高； （2） 受精卵分化后的細胞中，體細胞 的全能性比生殖細胞的低。植物全能性植物全能性的表達的表達離體的植物器官、離體的植物器官、組織、細胞組織、細胞 游離單細胞游離單細胞或原生質體或原生質體胚狀體胚狀體根、芽根、芽 愈傷組織愈傷組織 人工種子人工種子再生植株再生植株 脫脫分分化化 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：基本培養(yǎng)基和適宜的植物生長調節(jié)物質，適宜的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的PH、適時光照等。 脫分化：將分化組織的已停止分裂的細胞從植物體部

5、分的抑制性影響下解脫出來，恢復細胞的分裂活性。 再分化：經脫分化的組織或細胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉變?yōu)楦鞣N不同細胞類型的能力。4.植物組織培養(yǎng)分類愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織培養(yǎng)細細 胞胞 培培 養(yǎng)養(yǎng)器器 官官 培培 養(yǎng)養(yǎng)原生質體培養(yǎng)原生質體培養(yǎng)最為常見的組織培養(yǎng)最為常見的組織培養(yǎng)懸浮細胞培養(yǎng)懸浮細胞培養(yǎng)單細胞培養(yǎng)單細胞培養(yǎng)胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、葉、花和幼果的部分組織的培養(yǎng)葉、花和幼果的部分組織的培養(yǎng)按材料的類別分按材料的類別分愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織培養(yǎng) 將外植體接種在人工培養(yǎng)基上，由于植物生長調節(jié)劑的存在，而其細胞脫分化形成愈傷組織，然后通過再分化形成再生植株。

6、它是最為常見的。 器官培養(yǎng)： 將植物的器官如胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、葉、花和幼果的部分組織接種在無菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。細胞和原生質體培養(yǎng)： 細胞培養(yǎng)是將植物的單個細胞分離出來，并進行培養(yǎng)，而原生質體培養(yǎng)是指將植物細胞的細胞壁通過機械、物理或化學的方法去除，然后再進行培養(yǎng)。原球莖原球莖-主要是蘭科植物在誘導時，分化出的原初植物形態(tài)，具有完整植株的器官雛形，成苗容易。 胚狀體胚狀體-由愈傷組織或表面形成的許多類似胚的突起，是初步分化的幼小生命體，芽根有共同的維管束，是雙極性結構，起源于單細胞，無嵌合現(xiàn)象，結構完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化難，再分化也很難。 胚狀體與不定芽的區(qū)別胚狀

7、體與不定芽的區(qū)別 胚狀體在組織學上具備以下和不定芽不同的三個特征： 最根本的特征是具有兩極性。 胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結構上的聯(lián)系，而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織相聯(lián)系。 胚狀體的維管組織的分布是獨立的“v”字形，而不定芽的維管組織無此現(xiàn)象。按培養(yǎng)方法分為按培養(yǎng)方法分為固體培養(yǎng)固體培養(yǎng) 液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)看護培養(yǎng)看護培養(yǎng) 微室培養(yǎng)微室培養(yǎng)初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)按培養(yǎng)過程分為按培養(yǎng)過程分為初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)5.植物組織培養(yǎng)應用植物組織培養(yǎng)應用快速繁殖：快速繁殖： 運用組織培養(yǎng)的途徑，一個單株一年可以繁殖幾萬到幾百萬個植株，而且均來自一單一的個

8、體，遺傳性狀一致。例如一株葡萄一年繁殖到3萬多株，一株蘭花一年繁殖到400萬株。種苗脫毒種苗脫毒：由于病毒的感染嚴重影響作物的產量和品質，而利用組織培養(yǎng)技術可以有效地除去植物體內的病毒，得到大量的無病毒種苗。主要的方法是培養(yǎng)植物莖尖分生組織，也可以采用熱處理或加入化學試劑的方法達到脫毒的效果。已經取得成功的有馬鈴薯、草莓、香蕉、葡萄等等。Vi rus el i m i nat i onw hy does t he m eri st em have l ow / no vi rus t i t re? vi rus spreads pri m ari l y t hrough vascul ar

9、 syst em -t hi s i s not devel oped i n t he m eri st em m i t osi s and chrom osom e repl i cat i on com pet e w i t h vi rus repl i cat i on hi gh auxi n i n m eri st em i nhi bi t s vi rus repl i cat i on a vi rus “ i nact i vat i ng” syst em has great est act i vi t y i n m eri st emTobacco m eri st emvi rus-f reet i ssuevi rus part i cl esf ound 遠緣雜交：利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種。突變育種：采用組織培養(yǎng)可以直接誘變和篩選出具抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白等優(yōu)良性狀的品種基因工程：基因工程：基因工程主要研究DNA的轉導，而基因轉導后必須通過組織培養(yǎng)途徑才能實現(xiàn)植株再生 生物制品：生物制品：有些極其昂貴的生物制品，可以用大規(guī)模培養(yǎng)植物細胞來直接生產 種質保存：種質保存：繁殖量大，省空間，保存時間長