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1、自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展,,2011-04-13,全自動(dòng)自身抗體分析儀,自動(dòng)化檢測(cè) 檢測(cè)定量化 單個(gè)項(xiàng)目隨時(shí)檢測(cè) 多個(gè)項(xiàng)目同時(shí)檢測(cè) 45-90分鐘報(bào)告結(jié)果 原廠質(zhì)控和校正血清 精確溫度調(diào)控系統(tǒng) 五點(diǎn)定標(biāo)、三重檢測(cè),,風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷,血清學(xué)檢查 自身抗體特異性 非特異的免疫相關(guān)指標(biāo) 滑液分析 一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目,常見(jiàn)的自身抗體及其檢測(cè)方法,(1),,,,,(2),,,,,常見(jiàn)的自身抗體及其檢測(cè)方法,抗Ku抗體（Ku),抗Mi抗體（Mi-2）,抗PM-Scl抗體,抗JO-1抗體（JO-1）,多發(fā)性肌炎、皮肌炎,抗線粒體抗體M2型（AMA-M2）,原發(fā)性膽汁性肝硬化,抗nRNP抗體（U1-

2、snRNP）,混合性結(jié)締組織病（MCTD）,抗Scl-70抗體（Scl-70）,抗著絲點(diǎn)B抗體（CENP-B）,系統(tǒng)性硬化,抗SSB/La抗體,抗SSA/R052抗體,抗SS-A/R060抗體,干燥綜合征/系統(tǒng)性紅斑狼瘡,抗核糖體P蛋白（PO）,抗增殖細(xì)胞核抗原抗體（PCNA),抗Sm抗體,抗組蛋白抗體,抗核小體抗體,抗雙鏈DNA抗體IgG抗體,系統(tǒng)性紅斑狼瘡,項(xiàng) 目 名 稱,疾 病,,ANA譜17項(xiàng)（免疫印跡法）,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(3),常見(jiàn)的自身抗體及其檢測(cè)方法,,(一)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）,類風(fēng)濕因子（RF） 早期診斷的系列指標(biāo) 抗RA33/36抗體 抗核周

3、因子（APF） 抗角蛋白抗體（AKA） 抗Sa抗體 抗環(huán)瓜氨酸抗體（抗CCP）,類風(fēng)濕因子（RF）,抗人IgG分子Fc片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為IgM、G、A、E型 RF在RA中的陽(yáng)性率為70%，是診斷RA的重要標(biāo)準(zhǔn)之一 RF含量與病情的活動(dòng)性和嚴(yán)重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動(dòng)，骨侵蝕發(fā)生率高，?？砂橛衅は陆Y(jié)節(jié)或血管炎等關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，提示預(yù)后不良,類風(fēng)濕因子（RF）,RF并非RA獨(dú)有的特異性抗體，對(duì)RA的診斷不具特異性 SLE 30% SS 70%90% SSc 20%30% MCTD 50%60% 非風(fēng)濕性疾病 5%以下的正常人 RF陽(yáng)性不等于一定就

4、是RA RF陰性也不等于一定就不是RA,,,RF常用檢測(cè)方法,RF 1：40陽(yáng)性 乳膠凝集法（測(cè)IgM-RF） RF 256 Iu/ml 雙抗夾心ElISA法(測(cè)總RF） RF-IgG 110IU/ml -IgA 18IU/ml ELISA法 -IgM 200IU/ml,RA早期診斷的系列指標(biāo),敏感性 特異性 抗RA33/36抗體 35.8% 99.6% APF 40%-80% 70%-90% AKA 40%-55% 85%-95% 抗Sa抗體 40%-60% 98.6% 抗CCP 46%-70% 96%,抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）,瓜

5、氨酸是RA血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān) 抗體的主要抗原決定簇 對(duì)RA診斷具有高度特異性（98%） 可在RA早期出現(xiàn) 預(yù)測(cè)早期關(guān)節(jié)炎發(fā)展為RA RA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識(shí)別及預(yù)測(cè),(二)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）,是一種臨床表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害癥狀的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體 自身抗體 （1）抗核抗體譜ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗體 （2）抗磷脂抗體 （3）抗組織細(xì)胞抗體抗RBC抗體 抗血小板相關(guān)抗體 抗神經(jīng)元抗體 （4）其它RF、p-ANCA,抗核抗體（ANA）,定義以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體 臨床意義 SLE的篩查

6、抗體: 95%陽(yáng)性，但滴度與SLE活動(dòng)性無(wú)相關(guān) 陰性基本可排除SLE 陽(yáng)性并非SLE特異 陽(yáng)性并非風(fēng)濕病特異: 風(fēng)濕?。⊿LE、SSc、SS、RA) 非風(fēng)濕性疾?。ǜ腥?、慢肝、肺纖維化、腫瘤） 服用某些藥物（INH、苯妥英鈉、肼苯達(dá)嗪、普魯卡因酰胺）,抗核抗體（ANA）,方法間接免疫熒光法 結(jié)果判斷: 滴度1：100為陽(yáng)性 常見(jiàn)核型5種 不同核型的臨床意義不同,核膜型 與抗ds-DNA有關(guān)， 多見(jiàn)于SLE，特別是有腎炎者,均質(zhì)型 與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關(guān)，引起LE形成主要見(jiàn)于SLE、藥物性狼瘡,斑點(diǎn)型 與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體,核仁型

7、 多見(jiàn)于硬皮病,著絲點(diǎn)型 多見(jiàn)于CREST綜合征,ANA常見(jiàn)五種核型及臨床意義,核膜型與抗ds-DNA有關(guān)， 多見(jiàn)于SLE，特別是有腎炎者 均質(zhì)型與AHA、抗DNA有關(guān)，引起LE形成 主要見(jiàn)于SLE、藥物性狼瘡 斑點(diǎn)型與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體 核仁型多見(jiàn)于硬皮病 著絲點(diǎn)型多見(jiàn)于CREST綜合征,ANA檢測(cè)方法,間接免疫熒光法 印跡法 ELISA法,抗核抗體譜（ANAs）,定義：以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體 抗DNA抗體抗ss-DNA 抗ds-DNA 抗組蛋白抗體H1，H2A，H2B，H3，H4 抗非組蛋白抗體抗ENA抗體 抗著絲點(diǎn)抗體

8、 抗核仁抗體 其它線粒體、溶酶體、高爾基體等,抗ds-DNA抗體,臨床意義 對(duì)SLE的診斷有較高特異性 滴度與SLE活動(dòng)相關(guān)，可作為病情監(jiān)測(cè)及療效觀察指標(biāo) 與SLE腎損害有關(guān) 檢測(cè)方法 放免法（Farr)敏感，有利于早期預(yù)測(cè) 檢測(cè)高親合力的抗ds-DNA 間接免疫熒光法(IF)特異 ELISA可檢測(cè)低親合力的抗ds-DNA 有助于中樞狼瘡的病情監(jiān)測(cè) 金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法,抗ENA抗體,抗RNP MCTD100%陽(yáng)性，且滴度高 雙手腫脹，雷諾現(xiàn)象，肌炎，指（趾）端硬化 腎臟保護(hù)性抗體？ 抗Sm SLE的標(biāo)記性抗體，陽(yáng)性率30% 有助于早期、不典型及治療

9、緩解后SLE的回顧性診斷 抗Sm陽(yáng)性一定伴抗RNP陽(yáng)性，但抗RNP陽(yáng)性可單獨(dú)存在 抗SSA 原發(fā)性SS：60-75% SLE: 40-50% 與皮損、光過(guò)敏、白細(xì)胞減少、淋巴結(jié)腫大、 血管炎、紫癜相關(guān) 可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯 抗SSB原發(fā)性SS：40%，較抗SSA更特異 其它CTD伴抗SSB者常伴繼發(fā)性SS,抗ENA抗體,抗Scl-70 硬皮病標(biāo)記性抗體 抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎標(biāo)記性抗體 抗Rib胞漿抗原核糖體位于胞漿內(nèi) 抗Rib陽(yáng)性+其它自身抗體陰性= ANA陰性 臨床意義 是SLE的又一特異性抗體，陽(yáng)性率

10、10-20% 多見(jiàn)于SLE活動(dòng)期 與抗ds-DNA抗體的消長(zhǎng)相平行 但不會(huì)隨病情緩解立即消失 可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰,抗核小體抗體（AnuA）,核小體是細(xì)胞染色質(zhì)中的一種成分，它是由DNA和組蛋白以特殊的方式相連而組成，在SLE的誘導(dǎo)和致病中起重要作用 對(duì)SLE的早期診斷有重要意義 比抗ds-DNA、抗組蛋白抗體更早出現(xiàn) 陽(yáng)性率：50%90% 特異性98%,(三)皮肌炎/多發(fā)性肌炎（PM/DM）,免疫學(xué)檢查 ANA ENA抗Jo-1陽(yáng)性 其它檢查肌酶譜 肌酸磷酸激酶（CPK）: MM-心肌和骨骼肌 MB-心肌 BB-平滑肌和腦內(nèi) 乳酸脫氫酶（LDH） 谷草

11、轉(zhuǎn)氨酶（AST） 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT） 堿性磷酸酶（ALP）,(四)干燥綜合征（SS）,ANA陽(yáng)性率40%70% ENA抗SSA抗體陽(yáng)性率70%96% 抗SSB抗體陽(yáng)性率50%87% 抗-Fordrin對(duì)于pSS或sSS的診斷有一 定意義，但特異性和敏感性并不理想。 RF陽(yáng)性率75%100% 高球蛋白血癥 WBC下降,(五)系統(tǒng)性硬化?。╬SS）,ANA陽(yáng)性率50%55% ENA抗Scl-70陽(yáng)性率15%40% 抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)陽(yáng)性,(六)混合性結(jié)締組織?。∕CTD）,ANA陽(yáng)性 ENA抗RNP高滴度陽(yáng)性,（七）血管炎,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）,ANCA的

12、臨床意義,c-ANCA和PR3-ANCA 對(duì)韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80% 與病情活動(dòng)性相關(guān) 常作為判斷藥物療效和病情復(fù)發(fā)的指標(biāo) p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有診斷特異性 陽(yáng)性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動(dòng)相關(guān) 主要與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體腎小球腎炎 變應(yīng)性肉芽腫性血管炎 相關(guān),（八）抗磷脂抗體綜合征（APS）,是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動(dòng)/靜脈血栓形成、習(xí)慣性流產(chǎn)和血小板減少等癥狀為表現(xiàn)，血清中存在抗磷脂抗體 血清學(xué)檢查 抗心磷脂抗體（ ACA ）IgG、IgM、IgA（ELISA） 抗2糖蛋白1抗體（

13、抗2-GP1) 狼瘡抗凝物（LA）凝血酶原時(shí)間（PT） 激活的部分凝血活酶時(shí)間（APTT） 白陶土凝集時(shí)間（KCT） 蛇毒試驗(yàn)（RVVT）,抗磷脂抗體,抗2-GP1抗體比LA和ACA在APS患者中更具有特異性，是導(dǎo)致APS的主要抗體 抗2GP1抗體只出現(xiàn)于自身免疫性疾病, 而ACA也可出現(xiàn)于一些感染性疾病, 如梅毒、AIDS、肝炎、結(jié)核等,（九）自身免疫性肝病,我科開(kāi)展的自身免疫肝炎系列抗體包括： 抗核抗體（ANA） 抗肝細(xì)胞膜抗體(抗LMA) 抗平滑肌抗體（ASMA） 抗肝腎微粒體抗體（抗LKM抗體） 抗肝-胰抗體(抗LP抗體) 抗可溶性肝細(xì)胞

14、抗體（抗SLA） 抗線粒體抗體（AMA）,自身免疫性肝炎（AIH） ANA 抗平滑肌抗體（SMA） 抗肝腎微粒體抗體 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 抗線粒體抗體（AMA）M2 原發(fā)性硬化性膽管炎 ANCA陽(yáng)性,自身免疫性肝病,風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷,自身抗體特異性 非特異的免疫相關(guān)指標(biāo) 一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目 血常規(guī) 尿常規(guī) 肝功能 腎功能等,注意事項(xiàng),選擇做哪些檢查項(xiàng)目時(shí)要重點(diǎn)突出 避免“大撒網(wǎng)” 解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)問(wèn)題 實(shí)驗(yàn)方法本身的敏感性、特異性、 可靠性及實(shí)驗(yàn)室之間的差異性 結(jié)合臨床 應(yīng)把與之相關(guān)的一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果放在一起考慮,全國(guó)自身抗體檢測(cè)質(zhì)量控制總結(jié),由中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病分會(huì)計(jì)劃 參與質(zhì)控的醫(yī)院和檢測(cè)的項(xiàng)目逐年增多，多為三甲醫(yī)院,自身抗體的檢測(cè)對(duì)于風(fēng)濕性疾病的診斷、病情評(píng)估、治療和預(yù)后都及其重要。但影響其檢測(cè)的因素很多，如檢測(cè)方法、檢測(cè)技術(shù)、操作人員、使用儀器等等，這些都會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，因此對(duì)自身抗體進(jìn)行檢測(cè)質(zhì)量控制是非常必要的。,目前自身抗體檢測(cè)過(guò)程中主要存在以下三個(gè)問(wèn)題： 1.檢測(cè)方法的差異 2.檢測(cè)試劑盒不規(guī)范 3.檢測(cè)人員的知識(shí)水平差異,建議： 統(tǒng)一檢測(cè)方法以統(tǒng)一敏感性和特異性 統(tǒng)一所使用的檢測(cè)試劑盒 實(shí)驗(yàn)室操作人員應(yīng)進(jìn)行技術(shù)操作常規(guī)和風(fēng)濕性疾病臨床 知識(shí)的培訓(xùn),謝 謝！,