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(全國通用版)2019高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題八 生物技術(shù)實踐 考點1 微生物的分離和培養(yǎng)課件.ppt

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1、考點1微生物的分離和培養(yǎng),專題八生物技術(shù)實踐,1.理清培養(yǎng)基制備與微生物純化技術(shù),要點整合,,(1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格,微生物學(xué)實驗一般會設(shè)置空白對照:隨機取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成。 (2)觀察菌落需用固體培養(yǎng)基,因此培養(yǎng)基要添加瓊脂。 (3)倒平板的溫度一般在50 左右,溫度過高會燙手,溫度過低培養(yǎng)基會凝固。 (4)平板需倒置,這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā),又能防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成培養(yǎng)基污染。 (5)平板劃線法只適用于微生物的提純,不適合進行計數(shù),并且在最后一次劃線的末端處的菌種最純。,(6)利用稀釋涂布平

2、板法估算水樣中的活菌數(shù)的計算公式:(CV)M(稀釋倍數(shù))。 (7)菌種可用甘油管藏法長期保存,保存時菌液中常添加一定量的甘油。 2.微生物分離與計數(shù)的兩個實例 (1)土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 篩選菌株:利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基篩選菌株。 測定微生物數(shù)量的常用方法:活菌計數(shù)法和顯微鏡直接計數(shù)法。 過程:土壤取樣樣品稀釋微生物的培養(yǎng)與觀察。 鑒定方法:含酚紅指示劑的以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基細菌指示劑變紅,則該菌能分解尿素。,(2)分解纖維素的微生物的分離 實驗原理:,即通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 流程:土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌落。,1.(2018全國,37

3、)將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基?;卮鹣铝袉栴}: (1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制______的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。,考題集訓(xùn),1,2,3,4,5,6,,解析鏈霉素是抗生素,可抑制細菌生長,故在M培養(yǎng)基中加入鏈霉素作為選擇培養(yǎng)基,可篩選出真菌。,細菌,選擇,答案,解析,解析培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分一般包括碳源、氮源、水和無機鹽等。細胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等,故所加入的氮源可參與以上物質(zhì)的合成。,(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生

4、長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì),營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有_____________(答出兩點即可)。氮源進入細胞后,可參與合成的生物大分子有_____________(答出兩點即可)。,碳源、無機鹽,蛋白質(zhì)、核酸,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析能產(chǎn)生淀粉酶的微生物可將淀粉分解成麥芽糖,淀粉遇碘變藍,向加有淀粉的培養(yǎng)基中加入碘液后培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍的淀粉被水解,形成透明圈,可根據(jù)透明圈的大小判斷產(chǎn)生淀粉酶的多少。,(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是_____,該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物

5、的原理是__________________ __________________________________________。,碘液,淀粉遇碘液顯藍色,,產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解,形成透明圈,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果: 甲同學(xué)涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133; 乙同學(xué)涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。 有人認為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是_____________________

6、___________________________________________。,乙同學(xué)的結(jié)果中,1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差,解析統(tǒng)計菌落數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30300個的平板,甲同學(xué)統(tǒng)計的3個平板中的菌落數(shù)在正常范圍內(nèi)且差距不大,比較準確;乙同學(xué)統(tǒng)計的3個平板中, 1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差。,答案,解析,1,2,3,4,5,6,1,2,3,4,5,6,選擇培養(yǎng)基作用原理的判斷 (1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如,加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌;加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的“加入”是在主要營養(yǎng)成分完備的基礎(chǔ)上進行

7、的。 (2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。缺乏氮源時可以分離出固氮微生物;以石油作為唯一碳源時,可以分離出能消除石油污染的微生物。 (3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如,將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng),可以得到耐高溫的微生物。,,2.(2018全國,37)在生產(chǎn)、生活和科研實踐中,經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染?;卮鹣铝袉栴}: (1)在實驗室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具______(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。,解析干熱滅菌是指將物品放入干熱滅菌箱內(nèi),在160170 條件下加熱12 h。耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等,可采用干熱滅菌的方法。,

8、可以,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點是________________________________________。,解析巴氏消毒法是在7075 條件下煮30 min或在80 條件下煮 15 min,可以殺死牛奶中的微生物,并且使牛奶的營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。,在達到消毒目的的同時,營養(yǎng)物質(zhì)損失較少,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能______ __________。在照射前,適量噴灑________,可強化消毒效果。,解析接種室、接種箱或超凈

9、工作臺在使用前,可以用紫外線照射30 min,紫外線能破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu),以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前,適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以強化消毒效果。,破壞,DNA結(jié)構(gòu),消毒液,(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過_____(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。,解析自來水通常是用氯氣進行消毒的。,氯氣,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時,若壓力達到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度,最可能的原因是___________________。,解析在使用高壓蒸汽滅菌鍋時,若壓力達到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度,最可能的原因是鍋內(nèi)原

10、有的冷空氣沒有排盡。,未將鍋內(nèi)冷空氣排盡,1,2,3,4,5,6,三種常用滅菌方法的比較,,3.(2016全國,39)空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下: 配制培養(yǎng)基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); 制作無菌平板; 設(shè)置空白對照組和若干實驗組,進行相關(guān)操作; 將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時間,統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。,1,2,3,4,5,6,1,2,3,4,5,6,解析牛肉膏和蛋白胨都可以作為氮源;平板為固體培養(yǎng)基,故需要加入凝固劑瓊脂。,回答下列問題:

11、 (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于_______________。若要完成步驟,該培養(yǎng)基中的成分X通常是_____。,牛肉膏、蛋白胨,瓊脂,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析實驗探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布,其中變量為不同高度,故需在不同高度下放置開蓋平板。同時,為了保證單一變量,需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實驗可靠性,需要設(shè)置多個平行組。,(2)步驟中,實驗組的操作是____________________________________ ___________________________。,將各實驗組平板分別放置在教室不同高度,的位置上,開蓋暴露一段時間

12、,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析在完全正確的操作情況下,空白對照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落,表明操作過程中存在雜菌污染,屬于實驗失誤,所有實驗數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。,(3)若在某次調(diào)查中,某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板,而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落,這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_____現(xiàn)象。若將30(即366)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法________(填“正確”或“不正確”)。,污染,不正確,答案,解析,1,2,3,4,5,6,關(guān)注兩種對照組與一種重復(fù)組 (1)將未接種的選擇培養(yǎng)基與接種的選擇培養(yǎng)基一起培養(yǎng)用于確認培養(yǎng)基滅菌是否徹底(制備是否合格)。

13、 (2)將接種的普通培養(yǎng)基與接種的選擇培養(yǎng)基一起培養(yǎng)用于確認選擇培養(yǎng)基是否起到“篩選”作用。 (3)進行微生物計數(shù)時,每一稀釋度下涂布三個平板,即設(shè)置重復(fù)組,是為了求平均值,提高計數(shù)準確度。,,4.(2018保山第二次統(tǒng)測)李斯特菌廣泛存在于各類食品中,李斯特菌在李斯特菌顯色培養(yǎng)基上培育時菌落會呈現(xiàn)藍綠色。在目前發(fā)現(xiàn)的16種李斯特菌中單增李斯特菌是唯一對人有致病性的一種,與其他李斯特菌相比,單增李斯特菌還能合成并分泌磷脂水解酶,使培養(yǎng)基中的磷脂被分解而在單增李斯特菌菌落周圍出現(xiàn)白色暈環(huán)。 (1)與單增李斯特菌相比,其他李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶的原因是__________________

14、__________________________。,1,2,3,4,5,6,解析根據(jù)以上分析可知,單增李斯特菌具有磷脂水解酶基因,而其他李斯特菌不含有控制磷脂水解酶合成的基因,因此其他李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶。,其他李斯特菌不含有控制磷脂水解酶合成的基因,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析將該食品樣品加入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的李斯特菌選擇培養(yǎng)液中培養(yǎng),以增加李斯特菌的濃度,確保能從樣品中分離到所需微生物。,(2)現(xiàn)要檢測某食品中是否含有其他李斯特菌和單增李斯特菌,進行下列相關(guān)實驗: 將該食品樣品加入經(jīng)__________滅菌的李斯特菌選擇培養(yǎng)液中培養(yǎng),培養(yǎng)的目的是_________

15、__________________________________________。,高壓蒸汽,增加李斯特菌的濃度,確保能從樣品中分離到所需微生物,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析將經(jīng)過培養(yǎng)的菌液用無菌水進行系列稀釋后,利用稀釋涂布平板法接種到鑒定李斯特菌的培養(yǎng)基上。鑒定李斯特菌的培養(yǎng)基與李斯特菌選擇培養(yǎng)液相比,還需額外添加顯色劑、磷脂和瓊脂。,將經(jīng)過培養(yǎng)的菌液用________進行系列梯度稀釋后,利用__________ ______法接種到鑒定李斯特菌的培養(yǎng)基上。鑒定李斯特菌的培養(yǎng)基與李斯特菌選擇培養(yǎng)液相比,還需額外添加顯色劑、______和______。,無菌水,稀釋涂布,平板

16、,磷脂 瓊脂,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析若該食品中含有單增李斯特菌,則一段時間后,培養(yǎng)基上會出現(xiàn)藍綠色且周圍有白色暈環(huán)的菌落。,將接種后的培養(yǎng)基置于適宜條件下進行培養(yǎng)。一段時間后若培養(yǎng)基上出現(xiàn)________________________的菌落,則說明該食品中含有單增李斯特菌。,藍綠色且周圍有白色暈環(huán),答案,解析,5.(2018太原高三模擬)反芻動物如牛和山羊,具有特殊的器官瘤胃,瘤胃中生活著多種微生物,研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株,并對其降解纖維素能力進行了研究,請回答下列問題:,1,2,3,4,5,6,解析在樣品稀釋中需要使用無菌水稀釋;在涂布平板操作中,需要使用酒

17、精燈對涂布器進行滅菌,并在酒精燈火焰旁完成對培養(yǎng)皿涂布接種操作,所以從選項分析可知,顯微鏡和接種環(huán)不需要,故選CE。,(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中,下列選項不需要的是________(多選)。 A.酒精燈 B.培養(yǎng)皿 C.顯微鏡 D.無菌水 E.接種環(huán),答案,解析,1,2,3,4,5,6,,,解析分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時,若試管口粘附有培養(yǎng)基,需要用酒精棉球擦凈以避免培養(yǎng)基污染棉塞。,(2)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時 , 若試管口粘附有培養(yǎng)基 , 需要用酒精棉球擦凈的原因是___________________。,避免培養(yǎng)基污染棉塞,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(3)剛果紅可與___

18、_____形成紅色復(fù)合物,研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上,篩選到了幾株有透明降解圈的菌落(見圖1)。圖中降解圈大小與纖維素酶的__________有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強的菌株是____(填圖中序號)。,纖維素,答案,解析,1,2,3,4,5,6,量與活性,菌2,解析根據(jù)“剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,當纖維素被纖維素酶分解后,紅色復(fù)合物無法形成,出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌”,所以在剛果紅培養(yǎng)基平板上,可以篩選到有透明降解圈的菌落,降解圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)。纖維素酶的量越多,活性越強,分解的纖維素越多,透明降解圈越大,所以圖中

19、降解纖維素能力最強的菌株是菌2。,1,2,3,4,5,6,解析在20 長期保存菌株時,菌液中常需加入一定量的甘油保藏。,(4)纖維素酶高產(chǎn)菌株在20 長期保存時,菌液中常需加入一定量的_____保藏。,甘油,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株A和B,在不同溫度和pH條件下進行發(fā)酵,測得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果如圖2,推測菌株___更適合用于人工瘤胃發(fā)酵,理由是________________________________________ _______________________。,B,答案,解析,1,2,3,4,5,6,發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸,B 菌

20、株在較高溫度和,酸性環(huán)境下酶的活性更高,1,2,3,4,5,6,解析由于胃部pH值較低,根據(jù)題意和圖示分析可知,發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸,B菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高,所以推測菌株B更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。,6.(2018新鄉(xiāng)高三第二次模擬)回答下列與微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用有關(guān)的問題: (1)微生物的培養(yǎng)需要使用培養(yǎng)基,不同培養(yǎng)基的配方不同,但一般都具有_______________________。在配制從土壤中篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基時,需加入_______作為唯一的碳源。,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析培養(yǎng)微生物的不同培養(yǎng)基,雖然其配方不同,但一般都具有碳源、氮源、水和無機

21、鹽。在配制從土壤中篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基時,需加入纖維素作為唯一的碳源。,碳源、氮源、水和無機鹽,纖維素,解析圖示中產(chǎn)生每個菌落的最初細菌數(shù)為1個才是最理想的。采用平板劃線接種時,通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面,在數(shù)次劃線后,就可以得到單菌落,據(jù)此分析圖示可知:劃線的順序依次是。,(2)下圖中產(chǎn)生每個菌落的最初細菌數(shù)為__個才是最理想的。據(jù)圖分析,在培養(yǎng)基上劃線接種時,劃線的順序依次是___________(用編號和箭頭表示)。,1,,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析所用稀釋液的體積為0.2 mL,在稀釋倍數(shù)為104的培養(yǎng)基中測得

22、平板上菌落數(shù)的平均值為25.6,則每毫升樣品中的活菌數(shù)是25.61040.21.28106(個)。,(3)根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積,統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能大概推測出樣品中的活菌數(shù)。某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為104的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為25.6,則每毫升樣品中的活菌數(shù)是________個(所用稀釋液的體積為0.2 mL)。,1.28106,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不和纖維素水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生顏色反應(yīng),因此若要鑒別纖維素分解菌,可用剛果紅染色法。在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中,細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,氨會使培養(yǎng)基的pH升高,酚紅指示劑將變紅,因此若要鑒別尿素分解菌,可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。,(4)若要鑒別纖維素分解菌,可用____________法;若要鑒別尿素分解菌,可在培養(yǎng)基中加入____________。,剛果紅染色,酚紅指示劑,答案,解析,1,2,3,4,5,6,

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