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1、1下列關(guān)于凝膠色譜法的原理及操作不正確的是 A是利用凝膠把分子大小不同的物質(zhì)分離開的一種方法 B在洗脫過程中，大分子不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部而最先流出，而小分子可以進(jìn)入凝膠內(nèi)部而流速緩慢，以致最后流出 C凝膠內(nèi)部有很微細(xì)的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其孔隙大小與被分離的物質(zhì)分子的大小無相應(yīng)關(guān)系 D一般情況下，凝膠對要分離的物質(zhì)沒有吸附作用，因此所有要分離的物質(zhì)都應(yīng)該被洗脫出來,解析：凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，凝膠是由多糖類化合物構(gòu)成的，其內(nèi)部有很微細(xì)的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子蛋白質(zhì)可以進(jìn)入凝膠內(nèi)部，路程較長，移動速度慢，而相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部，路程較短，移動速度快，因此在

2、洗脫過程中分離。選用不同種凝膠，其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不同，孔隙大小不同，可分離的分子大小不同，二者是相關(guān)的，故C項(xiàng)不正確。,C,2關(guān)于電泳的說法不正確的是 A電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程 B帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動 C蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少 D用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于分子的大小,解析：蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差異，使電泳遷移率完

3、全取決于分子的大小。,C,3下列操作正確的是 A分離紅細(xì)胞時采用低速長時間離心 B紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可 C分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心 D透析時要用20 m mol/L的磷酸緩沖液，透析12 h,解析：分離紅細(xì)胞時，采用低速短時間離心，如500 r/min離心2 min；分離血紅蛋白溶液時，離心時間較長，如2000 r/min離心10 min。釋放血紅蛋白時，加入蒸餾水和40%體積的甲苯；透析時用物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液，以除去相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。,D,4有關(guān)緩沖溶液的說法不正確的是 A緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不

4、變 B緩沖溶液通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成 C調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同pH范圍內(nèi)使用的緩沖液 D生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進(jìn)行,解析：緩沖溶液通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同pH范圍內(nèi)使用的緩沖液。在一定范圍內(nèi)，緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不變，超過一定范圍，緩沖溶液就起不到這樣的作用了。,A,5.已知某樣品中存在甲、乙、丙、丁、戊五種蛋白質(zhì)分子，分子大小、電荷的性質(zhì)和數(shù)量情況如圖所示，下列有關(guān)蛋白質(zhì)分離的敘述正確的是,A若將樣品以2000 r/min的速度離心10 min，分子戊

5、在沉淀中，則丙也一定在沉淀中 B若用凝膠色譜法分離樣品中的蛋白質(zhì)，則分子甲移動速度最快 C將樣品裝入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋內(nèi)，則乙也一定保留在袋內(nèi) D若用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品中的蛋白質(zhì)分子，則分子甲和分子丁形成的電泳帶相距最遠(yuǎn),A,解析：分子丙的相對分子質(zhì)量大于戊，所以，在離心時戊存在于沉淀中，丙也一定在沉淀中，A項(xiàng)正確。用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，甲相對分子質(zhì)量最小，容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部，則移動速度最慢，B項(xiàng)錯誤。分子丙的相對分子質(zhì)量大于乙，則丙保留在袋內(nèi)，乙可能在袋外，C項(xiàng)錯誤。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的遷移速度完全取決于分子的大小，因此，分子甲與丙形成的電泳帶相距最

6、遠(yuǎn)，D項(xiàng)錯誤。,6如圖表示血紅蛋白提取和分 離的部分實(shí)驗(yàn)裝置，請據(jù)圖回 答下列問題。 (1)血紅蛋白是人和其他脊椎動物 紅細(xì)胞的主要組成成分，它在紅 細(xì)胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有 ________功能。 (2)甲裝置中，B是血紅蛋白溶液， 則A是______ __；乙裝置中，C溶液的作用是________ (3)甲裝置用于____ ____透析(粗分離)目的是____________ 用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫____________，是根據(jù)____________ 分離蛋白質(zhì)的有效方法。 (4)用乙裝置分離血紅蛋白時，待____________ 時，用試管收集流出液，每5 m

7、L收集一管，連續(xù)收集。,運(yùn)輸,磷酸緩沖溶液,洗脫血紅蛋白,透析(粗分離),去除樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì),凝膠色譜法,相對分子質(zhì)量的大小,紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱的底端,6紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶O2和CO2，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來提取和分離血紅蛋白。請回答下列有關(guān)問題： (1)血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：________、粗分離、純化和________。 (2)實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。 加入檸檬酸鈉的目的是________

8、________________________________。 以上所述的過程即是樣品處理，它包括紅細(xì)胞的洗滌、______________、______________。,樣品處理,純度鑒定,防止血液凝固,血紅蛋白的釋放,分離血紅蛋白溶液,(3)收集的血紅蛋白溶液要進(jìn)行粗分離，其方法是_____________________。 (4)然后通過____________將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng) 進(jìn)行純度鑒定。樣品純化的目的是__________________________________________。 (5)電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及

9、 、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。,透析,凝膠色譜法,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去,分子本身的大小,7、凝膠色譜技術(shù)是一種快速而又簡單的分離技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果，目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，不但應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。據(jù)圖回答下列問題： (1)a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是__________，原因是___________________

10、_________________________________________________________________。,a,a相對分子質(zhì)量較大，無法進(jìn)入凝 膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移 動，路程較短，移動速度較快,(2)自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部d位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由__________________________替代。 (3)裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是________________________________________________________________________ ___________________________________。 (4)洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體__________(填“相同”或“不同”)，洗脫時，對洗脫液的流速要求是____________________。,尼龍網(wǎng)和尼龍紗,氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫 次序，降低分離效果,相同,保持穩(wěn)定,