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1、去甲腎上腺素和內皮素在應激損傷中的作用 　　社會環(huán)境因素對人類行為生理和健康影響的研究，是目前生命科學與人口健康研究的重要課題之一。隨著社會的高速發(fā)展，工作和生活節(jié)奏不斷加快，時代對人類的要求也愈來愈高，人類將更多地處于應激之中，應激對人類的危害也將不斷加劇。機體在遭遇緊急情況時，如恐懼、驚嚇、焦慮、創(chuàng)傷或失血等情況，交感神經(jīng)活動加強，去甲腎上腺素（ nora-drenaline,NA） 、腎上腺素 （ adrenaline,A） 的分泌量大大增加。NA、A 作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)細胞膜受體，激活腺苷酸環(huán)化酶，將三磷酸腺苷（ ATP） 催化生成環(huán)-磷酸腺

2、苷 （ cAMP） ,cAMP 激活蛋白激酶 A（ PKA） ,使蛋白質磷酸化，產(chǎn)生細胞反應，從而提高機體的興奮性，使機體處于警覺狀態(tài)，反應靈敏，以適應在應急情況下的需要，或使機體發(fā)病[1],甚至猝死[2].內皮素（ endothelin,ET） 是調節(jié)心血管功能的重要因子，對維持基礎血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用。內皮素是迄今為止發(fā)現(xiàn)的作用最強的縮血管物質。并且縮血管升血壓效應還可反射性引起心率抑制，造成心肌供血不足、代謝紊亂，內皮素（ ET） 與去甲腎上腺素是引起猝死的關鍵因素，在應激損傷過程中具有至關重要的作用。 　　本文給予中國樹鼩、Wistar 大鼠、BALB/c 小鼠低頻電

3、刺激，觀察相同刺激對不同種類動物應激反應的程度，探索 NA、ET 在應激損傷中的作用，為法醫(yī)病理學研究和應激損傷案例分析提供參考資料。 　　1 材料和方法 　　1. 1 材料 　　1. 1. 1 實驗動物 　　中國樹鼩（ 滇西亞種，Tupaia belangeri chinen-sis[3]） ,90 只，雄性，體重 120 ~125 g,購于中國科學院昆明動物研究所【SCXK（ 滇） K2013-0003】。SPF級 Wistar 大鼠，90 只，雄性，體重 200 ~ 210 g.SPF級 BALB/c 小鼠，90 只，雄性，體重 20 ~22 g,大、小鼠均購于甘肅省中醫(yī)學院科研

4、實驗中心【SCXK（ 甘） 2011-0001】。 　　1. 1. 2 試劑 　　利血平： 批號： 130406,廣東邦民制藥廠有限公司生產(chǎn)； 去甲腎上腺素（ NA） 、內皮素（ ET） 放免檢測試劑盒，北京北免東雅生物技術研究所生產(chǎn)。 　　1. 1. 3 儀器 　　GC-1200 γ 計數(shù)放免儀： 美國 Picker 公司制造；Dossy-2H 多通路生理參數(shù)采集存儲儀： 購于成都達碩生物科技有限公司。 　　1. 2 實驗方法 　　1. 2. 1 動物分組 　　選取中國樹鼩、SPF 級 Wistar 大鼠、BALB/c 小鼠各 90 只。中國樹鼩在實驗室飼育籠（ 2

5、50 cm ×150 cm × 150 cm 連接 50 cm × 30 cm × 20 cm 休息室） 內飼養(yǎng)，每籠 5 只； Wistar 大鼠、BALB/c 小鼠在獨立通氣籠（ individual ventilated cages,IVC） 內飼養(yǎng)，自由飲水進食，人工光照 12 h.實驗室溫度 18~ 22℃ ,IVC 內溫度 （ 22 0. 2 ） ℃ ,濕度 55% ~65% ,適應 7 d.每種動物按體重隨機各分為 3 組，每組 30 只。電刺激組（ 給予脈沖直流電刺激[4]） .利血平組（ 各組在飲水中加入利血平 2mg/100

6、mL,次日給予電刺激，刺激條件同電刺激組） . 　　1. 2. 2 動物實驗、標本采集和檢測實驗前，每只動物均剃去左側前、后肢體毛各約1. 0 mm × 1. 0 mm,實驗時，將 Dossy-2H 多通路生理參數(shù)采集存儲儀皮膚電極片（ 面積 0. 7 mm × 0. 7mm） 粘貼于去毛處，外用尼龍帶扎緊。對照組和實驗組分別在實驗（ 電刺激） 后 12、24、36 h 各取 10 只動物（ 各組采血前禁食 6 h,不禁水） ,用乙醚吸入麻醉，從心臟采血 1 mL,3000 r/min 離心 10 min,分離血清，凍存待測。全部血清用 GC-1200 γ

7、 計數(shù)放免儀檢測 NA、ET 水平。 　　1. 3 統(tǒng)計學分析 　　實驗數(shù)據(jù)采用 SPSS 17. 0 軟件進行統(tǒng)計學處理。低頻電刺激對動物血激素水平的影響用百分比表示，組間差異采用單因素方差分析，用均數(shù) 標準差（ x s） 表示，以 P 　　2 結果 　　2. 1 低頻電刺激對中國樹鼩血激素水平的影響 　　電刺激后12、24、36 h 檢測，電刺激組中國樹鼩血內皮素（ ET） 水平比對照組分別升高了 79. 84%、77. 03% 、69. 52% （ P 　　2. 2 低頻電刺激對 Wistar 大鼠血激素水平的影響 　　電刺激后12、24、36 h 檢測，電刺激組 Wist

8、ar 大鼠內皮素（ ET） 水平比對照組分別升高了 68. 05%、47. 30% 、24. 28% （ P 　　2. 3 低頻電刺激對 BALB /c 小鼠血激素水平的影響 　　電刺激后 12、24、36 h 檢測，電刺激組 BALB/c小鼠血內皮素 （ ET） 水平比對照組分別升高了67. 39% 、62. 57% 、55. 59% （ P 　　3 討論 　　為了探索社會環(huán)境壓力對人們身心健康的影響，很多學者對相關的動物模型進行了長期的研究，發(fā)現(xiàn)慢性環(huán)境刺激使中國樹鼩血象[5]、血激素水平[6]、生殖系統(tǒng)[7]發(fā)生病理性變化。慢性束縛應激能引起大鼠學習記憶能力降低[8]、腸功能紊

9、亂[9],熱刺激造成小鼠肝臟、十二指腸和空腸嚴重損傷[10].反復電刺激清醒狀態(tài)下大鼠上矢狀竇[11 ,大鼠出現(xiàn)抑郁的行為。旋轉刺激能引起大鼠血促腎上腺皮質激素（ adrenocorticotropic hormone） 、促腎上腺皮質素釋放激素（ corticotropin releasing hormone）水平升高[12],激發(fā)腎上腺皮質激素的釋放，增進抵抗力。高濃度的 NA 加速內皮細胞合成并釋放內皮素（ ET） 和血小板活化因子（ platelet-activating fac-tor）[13].升高的 ET 不僅本身有強烈的縮血管作用，而且增強 NA 的縮血管作用[14].睪酮（

10、testoster-one） 水平下降[15],可使大鼠血管內皮受損，ET 釋放增加[16].NA、ET 的過度分泌，在引起血管收縮的同時加劇血小板的激活并釋放血栓素（ thrombox-ane） ,活化的血小板因子（ PAF） 又可進一步促進內皮細胞釋放 ET,PAF 加速血小板集聚，引起心、腦血管痙攣和血栓形成，造成機體損傷、發(fā)病甚至猝死。 　　本文實驗結果顯示，給予中國樹鼩、Wistar 大鼠、BALB / c 小鼠電刺激后，各組動物血 NA、ET 水平均顯著升高（ 均 P Wistar 大 鼠（ 32. 54%） > BALB/c 小鼠（ 20. 44%） .實驗結果表明，在應激反

11、應中，因應激原種類、動物種屬、性別、生理狀態(tài)、應激狀態(tài)的不同而有所差異； 社會環(huán)境刺激能顯著增加機體（ 人、動物） 血液中 NA、ET 水平；NA、ET 參與高血壓、心臟病乃至猝死的病理過程；利血平能阻礙體內 NA 的合成和釋放，使交感 - 腎上腺髓質軸和下丘腦-垂體-性腺軸的興奮降低，緩解了機體對應激損傷的反應，對機體有保護作用。 　　參 考 文 獻 　　[1] 劉水平，陳玉川，郭 薇，等。 擠壓傷大鼠血漿內皮素含量與心臟損傷的關系[J]. 中山醫(yī)科大學學報，2002,23（ 1） : 27- 28. 　　[2] 李軍杰，葉平，駱雷鳴，等。 慢性應激與血清皮質醇、腎上腺素和去甲腎上腺素

12、的關系 [J]. 解放軍醫(yī)學院學報，2010,31（ 6） : 558 - 559. 　　[3] 王應祥。 中國樹鼩的分類研究 [J]. 動物學研究，1987,8（ 3） : 213 -230. 　　[4] 俞發(fā)榮，連秀珍，張振南，等。 即刻刺激對中國樹鼩體內DA、cMAP、cMGP 水平的影響 [J]. 中國法醫(yī)學雜志，2014,29（ 6） : 548 - 550. 　　[5] 連秀珍，張紅梅，謝明仁，等。 慢性環(huán)境刺激對中國樹鼩行為方式的影響[J]. 生態(tài)科學，2012,31（ 6） : 666 -670. 　　[6] 俞發(fā)榮，常青云，連秀珍，等。 生活環(huán)境條件對中國樹鼩血激素水平和心理行為的影響 [J]. 中國實驗動物學報 2014,22（ 3） : 62 - 66.