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1、軋蓋密封完好性試驗 目 錄 一、概 述 二、試驗準(zhǔn)備 三、試驗步驟 四、再驗證周期 概 述 一、概述 1、 試驗?zāi)康?：用微生物侵入試驗對凍干粉針劑 車間軋蓋密封系統(tǒng)進(jìn)行挑戰(zhàn)性試驗，以確認(rèn)軋 蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。 2、 試驗概述 ：取西林瓶灌裝入已滅菌培養(yǎng)基， 在正常生產(chǎn)線上抽真空、壓塞、軋蓋。此后， 將容器密封面浸入高濃度運動性菌液中，取出 并檢查是否有微生物侵入，以確認(rèn)容器密封系 統(tǒng)的完好性。同時，須做陽性對照試驗，確認(rèn) 培養(yǎng)基的促菌生長能力。 試驗準(zhǔn)備 試驗準(zhǔn)備 洗 瓶 膠塞處理 培養(yǎng)基 菌懸液 二、試驗準(zhǔn)備

2、 批量： 1000瓶 /批 1、洗瓶 : 清洗西林瓶 1100只，經(jīng) 305 干熱滅菌 12分鐘 后送至灌裝間備用。 2、膠塞處理 : 清洗膠塞 1100只，經(jīng) 121 濕熱滅菌 20分鐘后 備用。 3.1 預(yù)先對配制、灌裝系統(tǒng)按照凍干粉針劑無菌操 作要求進(jìn)行清潔、滅菌。 3.2 按照培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商要求，每批按 TSB（胰 酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基） 32.3g，加 1L注射用水 的比例進(jìn)行配制，加熱溶解并標(biāo)定至 4.5L，置 于滅菌柜中用純蒸 汽 121 滅菌 20min。 二、試驗準(zhǔn)備 3、 配制培養(yǎng)基 : 二、試驗準(zhǔn)備 3

3、.3將滅菌后的培養(yǎng)基 （ TSB配制液 ） 通過 未裝濾膜及濾芯的過濾系統(tǒng) ， 在灌裝機(jī) 的數(shù)控器上調(diào)節(jié)好裝量 （ 3.5ml） 進(jìn)行灌 裝半加塞 。 3.4將灌裝半加塞的培養(yǎng)基在百級層流保護(hù) 下轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)抽真空 ， 結(jié)束后全壓塞 、 出箱 、 軋蓋 。 4、制備微生物菌懸液： 4.1從銅綠假單胞菌（ ATCC 9027）的新鮮斜面上 取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含 6ml無菌培養(yǎng)基的 試管中，在 30 35 下培養(yǎng) 18 24h。 4.2將每管的培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)入含 600ml相同培養(yǎng)基 的容器內(nèi)，于 3035 下培養(yǎng) 18 24h。在培養(yǎng)結(jié) 束時，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基

4、出現(xiàn)渾濁。 4.3在微生物侵入試驗開始時，所用菌懸液濃度 （活菌數(shù)）必須達(dá)到 1 106CFU/ml。 二、試驗準(zhǔn)備 試驗步驟 營養(yǎng)試驗 微生物侵入試驗 陽性對照實驗 微生物侵入試驗后 營養(yǎng)試驗 三、試驗步驟 1.1從 1000瓶培養(yǎng)基中取 150瓶作為本次試驗的試 樣品。 1.2用剪刀輕輕從斜側(cè)面去除至少 50瓶試樣品的整 個鋁蓋（注意不要破壞其密封口，將去鋁蓋時 不慎損壞容器密封性的所有試樣品剔除），另 取 80瓶帶蓋試樣品，將每一試樣品倒轉(zhuǎn)，使培 養(yǎng)基與西林瓶內(nèi)表面及膠塞充分接觸，在 30 35 豎立倒置培養(yǎng) 14天。 1、 試驗樣品的制備

5、 : 三、試驗步驟 1.3在培養(yǎng)期內(nèi)，當(dāng)試驗中發(fā)現(xiàn)任何 帶蓋 試樣品長 菌時，則試驗無效，須棄去全部試樣品，重 新從頭開始試驗。 2.1所有試樣品培養(yǎng) 14天均不長菌時，從上述 1.2 試樣品中隨機(jī)取 20個帶蓋試樣品，每個試樣 品內(nèi)接種 100CFU銅綠假單胞菌。在 30 35 下培養(yǎng) 7天，或培養(yǎng)至所有試樣品都呈陽性結(jié) 果 。 三、試驗步驟 2、 確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生長能力 營養(yǎng)試驗 ： 2.1.1若 7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品 中，微生物生長良好，則容器內(nèi)培養(yǎng)基的促菌 生長能力可判為合格。使用革蘭染色后，并置 于紫外燈下，培養(yǎng)基呈藍(lán)綠色熒光，則確

6、認(rèn)試 樣品容器內(nèi)生長的菌為接入的銅綠假單胞菌， 即為 陽性 。 2.1.2若 7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品 中，微生物生長條件不好或經(jīng)鑒別后受其它菌 種污染，則試驗失敗，需重新作營養(yǎng)試驗。 三、試驗步驟 3、微生物侵入試驗操作步驟 : 微生物培養(yǎng)及侵入試驗應(yīng)在不影響生產(chǎn) 環(huán)境的地方（中心化驗室陽性室）進(jìn)行。 三、試驗步驟 3.1 將新鮮的銅綠假單胞菌（ ATCC 9027）的 菌懸液倒入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，用試管架固定 試樣品。 三、試驗步驟 3.2 從上述 1.2試樣品中再取 50只帶蓋試樣品為 A組 ， 另取 25個去蓋 試樣品為 B組 ，

7、 均倒 置于菌懸液中 ,使試樣容器內(nèi)的培養(yǎng)基充 分接觸封口內(nèi)表面 ， 試樣品的頸部及封口 的外表面應(yīng)完全浸泡在菌懸液中 （ 如下圖 1所示 ） 。 圖 1 微生物挑戰(zhàn)試驗示意圖 三、試驗步驟 3.3將 A組和 B組試樣品在菌懸液中持續(xù)浸泡約 4h 后，取出試樣品，擦干試樣品容器外殘余的菌 懸液，其外表用含 0.5%過乙酸的 70%異丙醇消 毒五分鐘（注意不要破壞其密封口）。 三、試驗步驟 3.4從 1.2試樣品中另取有蓋和去蓋的培養(yǎng)基各兩 個 ， 做陽性對照 。 陽性對照試樣品不經(jīng)菌懸 液浸泡 ， 其外表用含 0.5%過乙酸的 70%異丙

8、 醇消毒五分鐘后 ， 接種 10 100CFU銅綠假單 胞菌 ， 按營養(yǎng)試驗的步驟進(jìn)行陽性對照試驗 。 3.5將消毒后的試樣品放入塑料袋中，置 30 35 下培養(yǎng) 7天。檢查試樣品內(nèi)微生物生長情況， 有生長記作“ ”，無生長記作“ ”。 三、試驗步驟 3.5.1如果試樣品長菌 ， 則按照 2.1所述方法確認(rèn)生 長菌是挑戰(zhàn)微生物 銅綠假單胞菌 。 3.5.2 如果所有試樣品均不長菌，則從浸過菌懸液 的 A組試樣中取 10甁， B組試樣中取 5瓶，按 2.所 述方法對試樣品進(jìn)行營養(yǎng)性試驗。 三、試驗步驟 3.6微生物侵入試驗用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。 4.1步

9、驟 2、 3.4中進(jìn)行的營養(yǎng)試驗和 3.5.2中 進(jìn)行的陽性對照試驗都合格，微生物侵 入試驗才有效。 三、試驗步驟 4、 結(jié)果評價 : 4.2挑戰(zhàn)試驗中 A組和 B組如有長菌，需記錄長菌 的試樣數(shù)。在 A組中如出現(xiàn)長菌，則須按下述 要求作進(jìn)一步調(diào)查。 4.2.1仔細(xì)去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查 容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。 4.2.2將觀察到試樣品封口的缺陷，采用拍照或其 他適當(dāng)方式詳細(xì)記錄。 三、試驗步驟 4.3如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的試樣品不 是由于容器封口明顯的物理性缺損所 致，容器密封性挑戰(zhàn)試驗作失敗論。 三、試驗步驟 5、貯存穩(wěn)定性 : 5.1將剩余未經(jīng)挑戰(zhàn)試驗的容器放入箱中，保存在 室溫黑暗處； 5.2在適當(dāng)?shù)臅r間間隔（如 12個月、 24個月）取出 一些容器，重復(fù)挑戰(zhàn)性試驗（步驟同上）。 三、試驗步驟 再 驗 證 周 期 四、再驗證周期 1、當(dāng)軋蓋設(shè)備發(fā)生變化時應(yīng)進(jìn)行再驗證 ; 2、 改變膠塞 、 西林瓶及鋁蓋尺寸 、 材質(zhì) 時應(yīng)進(jìn)行再驗證 。