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1、 【 案 例 導 引 】 有 一 次 ， 某 生 化 室 新 來 的 工 作 人 員 在 工 作 中 發(fā) 現(xiàn) ，自 動 生 化 分 析 儀 顯 示 總 膽 紅 素 檢 測 試 劑 不 足 。 于 是 ，他 從 存 放 試 劑 的 冰 箱 里 取 出 總 膽 紅 素 試 劑 直 接 替 下試 劑 盤 內 原 有 的 試 劑 ， 然 后 進 行 病 人 標 本 檢 測 ， 結果 當 天 檢 測 結 果 普 遍 偏 高 。 問 題 ： 1、 為 什 么 會 出 現(xiàn) 結 果 偏 高 的 現(xiàn) 象 ？ 2、 更 換 試 劑 應 注 意 什 么 ？ 第 一 節(jié) 概 述 自 動 生 化 分 析 ： 集 自 動

2、 化 技 術 、 光 學 、 微 電 子 技術 和 計 算 機 科 學 為 一 體 ， 自 動 加 樣 、 稀 釋 、 混 勻 、反 應 、 比 色 、 分 析 過 程 的 監(jiān) 控 、 數(shù) 據(jù) 記 錄 、 計 算 、打 印 、 傳 輸 等 功 能 。 連 續(xù) 流 動 式 生 化 分 析 儀 離 心 式 生 化 分 析 儀 分 立 式 生 化 分 析 儀 干 片 式 生 化 分 析 儀半 自 動 生 化 分 析 儀全 自 動 生 化 分 析 儀按 結 構 和原 理 的 不 同分 類按 自 動 化 程 度 半 自 動 生 化 分 析 儀 指 在 分 析 過 程 中 的 部 分 操 作 （ 如 加

3、樣 、 保 溫 、 吸 入 比 色 、結 果 記 錄 等 某 一 步 驟 ） 需 手 工 完 成 ， 而 另 一 部 分 操 作 則 可由 儀 器 自 動 完 成 。 這 類 儀 器 的 特 點 是 體 積 小 ， 結 構 簡 單 ，靈 活 性 大 ， 既 可 分 開 單 獨 使 用 ， 又 可 與 其 他 儀 器 配 套 使 用 ，價 格 便 宜 ， 一 般 在 分 立 式 分 析 儀 中 多 常 見 。 全 自 動 生 化 分 析 儀 從 加 樣 至 出 結 果 的 全 過 程 完 全 由 儀 器 自 動 完 成 。 操 作 者 只需 把 樣 品 放 在 分 析 儀 的 特 定 位 置 上

4、 ， 選 用 程 序 開 動 儀 器 即可 等 取 檢 驗 報 告 。 由 于 分 析 中 沒 有 手 工 操 作 步 驟 ， 故 主 觀誤 差 很 少 ， 且 由 于 該 類 儀 器 一 般 都 具 有 自 動 報 告 異 常 情 況 ，自 動 校 正 自 身 工 作 狀 態(tài) 的 功 能 ， 因 此 系 統(tǒng) 誤 差 也 較 小 。 Aeroset i8000 i2000i4000ci8200i2000srC8000 樣 品 盤 試 劑 1試 劑 2攪 拌 器 清 洗 裝 置 ISE(選 配 )樣 品 針 A. 光 學 系 統(tǒng) 16個 固 定 波 長B. 壓 電 攪 拌 效 果 可 靠C. 8

5、步 清 洗 確 保 了 清 洗 效果 D. ICTTM技 術 ISE模 塊 檢 測Na+、 K+、 Cl-E. 165個 反 應 杯 位F. 試 劑 R1/65,R2/56 加 樣 系 統(tǒng) A.樣 品 準 備 ： 樣 品 管 （ 杯 ） 置 于 樣 品 架 上 ， 樣品 架 分 圓 盤 狀 和 傳 送 條 帶 狀 等 類 型 B.樣 品 的 吸 取 ： 由 吸 樣 針 完 成 ， 通 常 裝 有 液 面?zhèn)?感 裝 置 ， 以 防 止 空 吸 和 吸 入 凝 塊 C.試 劑 分 配 :由 試 劑 盤 、 試 劑 加 樣 器 ， 攪 拌 裝置 等 部 分 組 成 檢 測 系 統(tǒng) A.光 源 ： 目

6、 前 大 多 數(shù) 用 鹵 素 燈 ， 工 作 波 長 325800nm。少 數(shù) 用 氙 燈 ， 工 作 波 長 在 285750nm。 B.分 光 裝 置 ： 采 用 干 涉 濾 光 片 或 光 柵 分 光 。 干 涉 濾 光 片 價 格 便 宜 ， 但 易 受 潮 霉 變 光 柵 前 分 光 和 后 分 光 C.比 色 杯 ： 主 要 分 為 分 立 式 和 流 動 池 式 比 色 杯 分 立 式 比 色 杯 數(shù) 量 與 檢 測 的 速 度 有 關 流 動 池 式 比 色 杯 1個 計 算 機 系 統(tǒng) A.病 人 樣 品 的 識 別 B.添 加 樣 本 和 試 劑 C.混 合 D.數(shù) 據(jù) 的

7、 處 理 ， 計 算 結 果 E.恒 溫 控 制 F.結 果 顯 示 和 打 印 G.數(shù) 據(jù) 管 理 存 儲 、 質 控 試 劑 系 統(tǒng)試 劑 系 統(tǒng) 大 容 量 試 劑 通 道 R1為 65個 ,R2為 56個 試 劑 用 量 為 20 345 L (1 L遞 進 ) 試 劑 盤 內 .外 圈 設 計 , 可 同 時 向 不 同 方 向 旋 轉 SmartWash 智 能 化 清 洗 系 統(tǒng)智 能 化 清 洗 系 統(tǒng)八 步 驟 清 洗 確 保 反 應 杯 干 凈 o 水 . 堿 . 酸 . 水 . 水 . 空 白. 空 白 . 抽 干對 每 個 分 析 有 不 同 清 洗 方 式 設 定 確

8、 保 速 度 同 時 降 低 攜 帶 率自 動 反 應 杯 檢 測 確 保 分 析 前 反 應杯 質 量 樣 品 盤 標 配 試 劑 、 標 本 雙 條 碼 掃 描 功 能 第 二 節(jié) 生 化 分 析 儀 的 參 數(shù) 設 置 與 校 準 1 真 值 ： 是 采 用 一 種 最 可 靠 的 參 考 方 法 測 得 近 似 真 值 的 數(shù) 值 。2 定 值 ： 標 定 的 質 控 材 料 的 已 知 值 。3 靶 值 ： 排 除 離 群 值 后 所 有 觀 察 值 的 平 均 值 。4 標 準 物 ： 具 有 一 種 或 多 種 足 夠 均 勻 的 和 很 好 確 定 的 特 性 ， 用以 校 準

9、 測 量 裝 置 、 評 價 測 量 方 法 或 給 材 料 賦 值 的 一 種 材 料 或 物 質 。5 校 準 物 校 準 品 ： 用 于 建 立 一 個 或 多 個 定 量 值 的 物 質 。6 質 控 物 質 控 品 ： 專 門 用 于 質 量 控 制 目 的 的 標 本 或 溶 液 。一 、 名 詞 解 釋 ： 7 偏 倚 ： 被 評 價 方 法 的 測 定 值 與 決 定 性 方 法 、 參 考 方 法 、 指 定 對比 方 法 的 測 定 值 之 間 的 差 異 。8 重 復 性 條 件 ： 指 在 盡 量 相 同 的 條 件 下 ， 以 及 在 盡 量 短 的 時 間 內對 同

10、 一 被 測 對 象 相 互 獨 立 進 行 的 測 試 條 件 。9 重 復 性 標 準 ： 在 重 復 性 條 件 下 所 測 試 結 果 的 標 準 差 。10 再 現(xiàn) 性 條 件 ： 在 不 同 實 驗 室 ， 由 不 同 操 作 者 使 用 不 同 的 設 備 ，按 相 同 的 測 試 方 法 ， 對 同 一 被 測 對 象 相 互 獨 立 進 行 的 測 試 條 件 。11 再 現(xiàn) 性 標 準 ： 在 再 現(xiàn) 性 條 件 下 所 得 測 試 結 果 的 標 準 差 。 波 長 ： 范 圍 寬 達 340-804 nm, 16個 波 長 任 意 選 用 340、 380、404、 4

11、12、 444、 476、 500、 524、 548、 572、 604、628、 660、 700、 748、 804nm。 溫 度 ： 37 水 浴 恒 溫 系 統(tǒng)o加 熱 迅 速 , 溫 控 均 勻o受 環(huán) 境 溫 度 變 化 影 響 小o水 浴 添 加 劑 及 流 動 活 水 循 環(huán) 防 止 細 菌 生 長 分 析 法 : 一 點 終 點 、 兩 點 終 點 、 兩 點 速 率 法 、 速 率 A法 。二 、 生 化 分 析 儀 的 參 數(shù) 設 置 1、 終 點 法 被 測 物 質 在 反 應 過 程 中 完 全 被 轉 變 為 產 物 ，到 達 反 應 終 點 ， 根 據(jù) 終 點

12、吸 光 度 的 大 小 求 出 被 測 物 濃 度 ，稱 為 終 點 法 。 該 法 稱 為 平 衡 法 更 為 恰 當 。 從 時 間 -吸 光 度曲 線 來 看 ， 到 達 反 應 終 點 或 平 衡 點 時 ， 吸 光 度 將 不 再 變 化 。終 點 法 參 數(shù) 設 置 簡 單 ， 反 應 時 間 一 般 較 長 ， 精 密 度 較 好 。 分 析 方 法 分 類 終 點 時 間 的 確 定 根 據(jù) 時 間 -吸 光 度 曲 線 來 確 定 ， 根 據(jù) 被 測 物 反 應 終 點 ， 結 合 干 擾 物 的 反應 情 況 來 確 定 。 （ 1） 一 點 法 （ 終 點 法 ） 在 反

13、 應 到 達 終 點 ， 即 在 時 間 -吸 光 度 曲 線 上吸 光 度 不 再 改 變 時 選 擇 一 個 終 點 吸 光 度 值 ， 用于 計 算 結 果 。結 果 計 算 公 式 ： 待 測 物 濃 度 C U=（ 待 測 吸 光 度 AU 試 劑 空 白 吸 光 度 AB） KK為 校 準 系 數(shù) 適 合 蛋 白 、 糖 、 膽 固 醇 測 定 圖 4-3 一 點 終 點 法 反 應 曲 線 A單 試 劑 一 點 終 點 法 B雙 試 劑 一 點 終 點 法 （ 2） 兩 點 法 在 反 應 過 程 中 測 定 兩 個 時 間 點 的 吸 光 度 ， 此兩 點 吸 光 度 之 差

14、用 于 計 算 結 果 。 計 算 公 式 為 ： CU=（ 待 測 吸 光 度 A2 待 測 吸 光 度 A1） K。 圖 4-4 兩 點 終 點 法 反 應 曲 線 A單 試 劑 兩 點 終 點 法 B雙 試 劑 兩 點 終 點 法 該 法 能 有 效 地消 除 溶 血 、 黃 疸和 脂 濁 等 樣 品 本身 光 吸 收 造 成 的干 擾 。 圖 4-5 血 紅 蛋 白 、 膽 紅 素 和 脂 濁 的光 吸 收 曲 線 2、 二 點 速 率 法 指 在 反 應 過 程 中 選 擇 適 當 兩 點 （ 此 兩 點 既非 反 應 初 始 吸 光 度 亦 非 終 點 吸 光 度 ） 測 定 吸光

15、 度 ， 這 兩 點 的 吸 光 度 差 值 用 于 結 果 計 算 。 計 算 公 式 CU=(A2-A1) K。 圖 4-6 兩 點 速 率 法 反 應 曲 線 該 分 析 方 法 有 助 于 解 決 某 些 反 應 的 非 特 異 性 問 題 。 3、 速 率 A法 又 稱 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 （ rate assay） ， 是 在 測定 酶 活 性 或 用 酶 法 測 定 代 謝 產 物 時 ， 連 續(xù) 選取 時 間 -吸 光 度 曲 線 中 線 性 期 （ 各 兩 點 間 吸 光度 差 值 相 等 ） 的 吸 光 度 值 ， 并 以 此 線 性 期 的單 位 吸 光 度 變 化 值

16、（ A/min） 計 算 結 果 。 圖 4-7 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 反 應 曲 線 A單 試 劑 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 B雙 試 劑 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 酶 促 反 應 的 線 性 段 1及 5值 偏 小 ， 而 2 3 4， 故 A1點 至 A4點 屬 線 性 段 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 的 優(yōu) 點 可 以 確 定 線 性 期 并 計 算 A/min， 根 據(jù) 此值 再 準 確 地 計 算 酶 活 性 ， 因 而 使 自 動 生 化 分 析儀 在 酶 活 性 測 定 方 面 顯 著 地 優(yōu) 于 手 工 法 。 連 續(xù)監(jiān) 測 法 也 可 用 于 測 定 呈 線 性 反 應 的 代 謝 物 濃 度

17、，一 般 是 某 些 基 于 酶 法 測 定 的 代 謝 物 。 酶 活 性 （ U/L） A/min 理 論 （ 或 校 準 ） K值 。 代 謝 物 濃 度 C U= A/min 校 準 K值 。 1 理 論 K值 多 用 于 酶 活 性 測 定 中 ， 因 酶 活 性 尚 無 公認 的 校 準 品 可 用 。 根 據(jù) 酶 活 性 的 國 際 單 位 定義 得 出 酶 活 性 的 計 算 公 式 為 ：酶 活 性 (U/L)= A/min將 此 式 中 以 K來 表 示 ， 即 為 理 論 K值 可 作 為 分 析 參 數(shù) 輸 入 到 分 析 儀 中 。 dSTTV 310dSTTV 31

18、0 采 用 理 論 K值 的 前 提 應 當 是 樣 品 和 試 劑 的 加 量 準 確 、 比 色 杯 光徑 準 確 、 溫 度 控 制 精 確 以 及 波 長 準 確 等 。 但事 實 上 由 于 各 型 分 析 儀 在 注 射 器 容 積 步 進 電機 精 度 、 濾 光 片 帶 寬 等 方 面 的 差 異 ， 可 造 成樣 品 和 試 劑 加 量 以 及 吸 光 度 檢 測 的 偏 差 ， 溫度 的 影 響 有 時 也 非 常 大 。 由 于 摩 爾 吸 光 系 數(shù) 受 比 色 杯 光 徑 、 波 長等 的 影 響 ， 書 本 上 或 試 劑 廠 家 提 供 的 理 論 摩爾 吸 光

19、系 數(shù) 可 能 與 實 際 所 用 分 析 儀 所 測 的 不同 ， 因 而 有 必 要 獲 得 實 際 的 摩 爾 吸 光 系 數(shù) ，然 后 來 計 算 理 論 K值 。 （ 1） NADH（ NADPH）摩 爾 吸 光 系 數(shù) 的 測 定 NADH（ NADPH） 沒 有 標 準 純 制 品 ， 而且 配 成 溶 液 后 穩(wěn) 定 性 又 較 差 ， 不 能 直 接 用NADH 或 NADPH標 準 液 來 校 正 儀 器 ， 須 通 過有 NAD+(NADP+)參 與 的 反 應 途 徑 。 用 已 糖 激 酶 (HK)或 葡 萄 糖 脫 氫 酶 (GD)方 法測 定 葡 萄 糖 時 ，

20、葡 萄 糖 的 消 耗 與 NADH的 生 成呈 等 摩 爾 關 系 。 葡 萄 糖 有 標 準 純 制 品 。 根 據(jù) 公 式 A= bC， 已 知 比 色 杯 光 徑 b和 葡 萄糖 標 準 液 濃 度 ， 測 得 葡 萄 糖 標 準 管 的 吸 光 度A后 便 可 計 算 出 NADH（ NADPH） 的 摩 爾 吸 光 系數(shù) 為 A/bC。 （ 2） “ 色 素 原 ” 酶 促 產 物在 405nm波 長 摩 爾 吸 光 系 數(shù) 的 測 定 有 許 多 酶 底 物 為 人 工 合 成 的 “ 色 素 原 ” 底 物 ， 其 本 身 無色 ， 經(jīng) 酶 作 用 后 釋 放 出 有 色 的

21、反 應 產 物 ， 在 405nm波 長 具 有吸 收 峰 。ALP底 物 磷 酸 對 硝 基 苯 酚 (4-NPP) 經(jīng) 酶 作 用 后 釋 放 出 黃 色的 對 硝 基 苯 酚 (4-NP)GGT底 物 -L-谷 氨 酰 對 硝 基 苯 胺 或 -L-谷 氨 酰 -3-羥 基 -對 硝 基 苯 胺 經(jīng) 酶 作 用 后 釋 放 出 黃 色 的 對 硝 基苯 胺 (4-NA)或 對 硝 基 -5-氨 基 苯 甲 酸 (ANBA)。 4、 透 射 比 濁 法 (多 點 校 準 ) 抗 原 與 相 應 的 抗 體 結 合 形 成 的 免 疫 復 合 物 ，在 反 應 液 中 具 有 一 定 的 濁

22、 度 ， 可 由 一 般 分 光 光度 法 進 行 透 射 比 濁 （ transmission turbidimetry） 測 定 ， 可 用 于 某 些 蛋 白 質 和 藥物 濃 度 等 的 測 定 。 該 法 須 做 多 點 校 準 ， 再 經(jīng) 非線 性 回 歸 ， 求 出 抗 原 或 抗 體 的 含 量 。 方 法 舉 例 常 用 的 有 總 膽 紅 素 （ 氧 化 法 或 重 氮 法 ） 、 結 合膽 紅 素 （ 氧 化 法 或 重 氮 法 ） 、 血 清 總 蛋 白 （ 雙縮 脲 法 ） 、 血 清 白 蛋 白 （ 溴 甲 酚 氯 法 ） 、 總 膽汁 酸 （ 酶 法 ） 、 葡

23、萄 糖 （ 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 ） 、尿 酸 （ 尿 酸 酶 法 ） 、 總 膽 固 醇 （ 膽 固 醇 氧 化 酶法 ） 、 甘 油 三 酯 （ 磷 酸 甘 油 氧 化 酶 酶 法 ） 、 高密 度 脂 蛋 白 膽 固 醇 （ 直 接 測 定 法 ） 、 鈣 （ 偶 氮砷 法 ） 、 磷 （ 紫 外 法 ） 、 鎂 （ 二 甲 苯 胺 藍 法 ）等 。 1 終 點 法 檢 測 2 二 點 速 率 法 苦 味 酸 法 測定 肌 酐 采 用 此法 。 3 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 對 于 酶 活 性 測 定 一 般 應 選 用 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 ，如 ： 丙 氨 酸 氨 基 轉 移 酶 、

24、天 冬 氨 酸 氨 基 轉 移酶 、 乳 酸 脫 氫 酶 、 堿 性 磷 酸 酶 、 谷 氨 氨 ?；?轉 移 酶 、 淀 粉 酶 和 肌 酸 激 酶 等 。 一 些 代 謝物 酶 法 測 定 的 項 目 如 ： 脲 酶 偶 聯(lián) 法 測 定 尿 素等 ， 也 可 用 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 。 4 透 射 比 濁 法 透 射 比 濁 法 可 用 于 測 定 產 生 濁 度 反 應的 項 目 ， 多 數(shù) 屬 免 疫 比 濁 法 ， 載 脂 蛋 白 、免 疫 球 蛋 白 、 補 體 、 抗 “ O” 、 類 風 濕 因 子 ，以 及 血 清 中 的 其 他 蛋 白 質 如 前 白 蛋 白 、 結合 珠

25、 蛋 白 、 轉 鐵 蛋 白 等 均 可 用 此 法 。 必 選 分 析 參 數(shù) 1 試 驗 名 稱2 方 法 類 型3 反 應 溫 度 4 主 波 長 5 次 波 長雙 波 長 優(yōu) 點 ： 減 少 噪 音 ； 減 少 雜 散 光 ； 減 少 樣 品 本 身 光 吸 收噪 音 ： 從 光 源 到 比 色 杯 、 單 色 器 及 檢 測 器 的 整 個 光 路 系 統(tǒng) 中 ， 均存 在 著 隨 時 間 發(fā) 生 變 化 的 不 穩(wěn) 定 的 檢 測 信 號 ， 即 噪 音 。 6. 反 應 方 向7 樣 品 量 常 量 、 減 量 和 增 量 。8 第 一 試 劑 量 一 般 20-300 l9 第

26、 二 試 劑 量 同 上 。10 總 反 應 容 量 一 般 180-350 l， 個 別 儀 器 能 減 少 至 120 l。 反 應 時 間11 孵 育 時 間12 延 遲 時 間 13 分 析 時 間 ： 參 數(shù) 設 定 中 最 重 要 的 一 部14 校 準 液 （ calibrator） 個 數(shù) 及 濃 度 15 校 準 K值 （ calibrate coefficient） 或理 論 K值16 線 性 范 圍17 小 數(shù) 點 位 數(shù) 自 動 生 化 分 析 儀 工 作 過 程 和 操 作 方 法 一 、 工 作 過 程 在 測 定 過 程 中 所 有 機 械 步 驟 均 由 微 處

27、 理 器根 據(jù) 已 設 定 的 程 序 進 行 工 作 。 1 取 樣 加 試 劑 和 混 勻2 保 溫 反 應 和 吸 光 度 檢 測3 計 算 并 顯 示 或 打 印 結 果 二 、 操 作 方 法 （ 一 ） 操 作 前 的 各 項 檢 查（ 1） 正 常 開 機 以 后 ， 檢 查 沖 洗 用 水 裝 置 是 否 正 常 、各 項 分 析 試 劑 是 否 充 足 、 各 種 清 洗 劑 是 否 足 夠 ，以 及 樣 品 針 、 試 劑 針 和 攪 拌 棒 是 否 清 潔 。（ 2） 確 認 要 進 行 校 準 的 項 目 ， 確 認 要 做 的 質 控 批 號及 項 目 ， 以 及 校

28、 準 品 、 質 控 品 是 否 足 夠 。（ 3） 進 行 光 度 計 自 檢 來 確 認 光 路 與 檢 測 系 統(tǒng) 是 否 處于 正 常 工 作 狀 態(tài) 。 （ 二 ） 校 準 分 析 儀 在 樣 品 分 析 之 前 都 要 對 該 分 析 項 目進 行 校 準 （ 也 稱 定 標 ） ， 得 出 一 個 該 項 目 的 校準 系 數(shù) （ K） 。 校 準 前 首 先 必 須 在 反 應 程 序 里 設定 有 關 校 準 的 參 數(shù) ， 如 校 準 液 的 代 碼 、 位 置 及濃 度 值 等 。 執(zhí) 行 校 準 程 序 ， 檢 測 得 到 該 校 準 品的 吸 光 度 值 ， 再 根

29、據(jù) 校 準 濃 度 計 算 校 準 系 數(shù)（ K=校 準 品 濃 度 /校 準 品 吸 光 度 ） 。 1 校 準 方 式 有 單 點 校 準 、 兩 點 校 準 和 多 點 校 準單 點 校 準 ： 校 準 曲 線 呈 直 線 且 通 過 原 點 ， 用 單 個濃 度 的 校 準 液 即 可 ，兩 點 校 準 ： 若 校 準 曲 線 呈 直 線 但 不 通 過 原 點 ， 則需 用 兩 個 濃 度 的 校 準 液 做 兩 點 校 準 ；多 點 校 準 ： 當 校 準 曲 線 不 呈 直 線 而 為 真 正 的 曲 線時 ， 應 做 多 點 校 準 ， 并 按 其 線 形 選 擇 不 同 的

30、曲 線方 程 進 行 擬 和 ， 如 雙 曲 線 、 拋 物 線 、 冪 函 數(shù) 、 指數(shù) 函 數(shù) 、 對 數(shù) 函 數(shù) 等 方 程 等 。 如 有 下 列 情 況 發(fā) 生 時 ， 必 須 進 行 校 準 ： 改 變 試 劑 的 種 類 或 批 號 ； 儀 器 或 者 檢 驗 系 統(tǒng) 進 行 一 次 大 的 預 防 性 維 護 或 者 更 換 了 重 要 部 件 ； 質 控 反 映 出 異 常 的 趨 勢 或 偏 移 ， 或 者 超 出 了 實 驗 室 規(guī) 定 的 接 受 限 。 （ 三 ） 質 控 品 測 定 質 控 是 保 證 檢 測 結 果 可 靠 性 的 一 個 重 要 手段 ， 因 此

31、 每 批 樣 品 的 分 析 測 定 均 應 該 有 質 控 樣品 同 時 監(jiān) 測 。 關 于 分 析 儀 的 批 測 定 ， 是 指 一 批樣 品 從 開 始 測 定 到 完 成 測 定 后 停 止 的 整 個 過 程 。其 中 如 果 進 行 了 添 加 或 更 新 試 劑 、 進 行 了 有 可能 改 變 吸 光 度 的 維 護 等 操 作 ， 均 應 進 行 一 次 質控 樣 品 的 檢 測 ， 以 便 及 時 監(jiān) 測 到 分 析 系 統(tǒng) 的 改變 。 所 有 分 析 儀 都 已 設 定 或 固 化 了 有 關 質 控 的 分析 程 序 ： 設 定 有 關 質 控 參 數(shù) ， 如 每

32、個 質 控 品 的 批 號 、 靶值 和 標 準 差 ； 選 擇 質 控 圖 的 方 式 ， 如 均 值 標 準 差 質 控 圖 ； 質 控 結 果 的 統(tǒng) 計 分 析 ， 分 析 儀 會 保 存 每 次 測 定的 質 控 結 果 ， 并 對 其 進 行 統(tǒng) 計 ， 以 列 表 及 質 控圖 的 形 式 在 屏 幕 上 顯 示 。 可 根 據(jù) 質 控 結 果 在 質 控 圖 上 的 位 置 判斷 其 是 否 在 控 。 如 果 判 為 失 控 則 應 從 試 劑 、質 控 品 、 校 準 品 和 分 析 儀 等 幾 方 面 尋 找 原因 。 通 過 對 質 控 結 果 的 分 析 ， 可 以

33、了 解 某項 目 的 分 析 精 密 度 和 準 確 度 的 改 變 。 （ 四 ） 檢 測 項 目 的 輸 入 與 測 定 1 項 目 輸 入（ 1） 逐 項 輸 入 ： 每 份 樣 品 可 以 任 選 分 析 儀 中已 設 置 的 且 試 劑 室 內 已 預 置 試 劑 的 項 目 中 的一 項 、 幾 項 或 全 部 項 目 。 （ 2） 項 目 組 合 輸 入 ： 把 與 疾 病 相 關 的 檢 驗 項 目 組 合 在 一 起 ， 進 行 組 合 檢 驗 ， 這 有 利 于 方 便 病 人 ，有 利 于 疾 病 的 診 斷 和 預 后 分 析 ， 同 時 也 簡 化 了 分析 操 作

34、， 提 高 分 析 效 率 。（ 3） 批 量 輸 入 ： 對 于 有 連 續(xù) 相 同 測 定 項 目 的 樣 品 ，可 使 用 批 量 輸 入 的 方 法 。 多 數(shù) 全 自 動 分 析 儀 的 操 作 非 常 方 便 ， 在開 始 測 定 畫 面 ， 輸 入 該 批 第 一 個 樣 品 的 樣 品號 ， 分 析 儀 即 會 自 動 逐 個 地 對 樣 品 進 行 測 定 。一 般 在 開 始 畫 面 還 可 選 擇 ： 是 否 需 要 對 結 果 超 過 設 定 的 線 性 范 圍 、超 過 允 許 的 吸 光 度 上 限 等 的 樣 品 自 動 進 行 重復 測 定 ； 測 定 結 果

35、是 否 需 要 按 照 已 設 定 的 打 印 格式 自 動 打 印 與 測 定 結 果 有 關 的 選 項 。 2 進 行 測 定 3 急 診 檢 驗 幾 乎 所 有 全 自 動 生 化 分 析 儀 都 具 備 “ 急診 優(yōu) 先 ” 的 功 能 ， 儀 器 留 有 急 診 樣 品 的 分析 位 置 或 專 用 樣 品 架 以 或 急 診 分 析 的 專 用編 號 。 一 旦 在 急 診 樣 品 位 置 上 放 置 了 樣 品 ，并 設 定 了 急 診 檢 驗 的 項 目 ， 分 析 儀 就 會 在常 規(guī) 樣 品 的 測 定 過 程 中 ， 優(yōu) 先 安 排 對 該 樣品 進 行 分 析 測 定

36、 。 分 析 儀 性 能 指 標 （ 一 ） 準 確 度 吸 樣 、 加 試 劑 、 溫 控 準 確 度 ， 以 及 光 路 系 統(tǒng)如 波 長 、 檢 測 器 準 確 度 和 波 譜 帶 寬 等 ， 都 影 響 檢測 準 確 度 ， 這 些 因 素 往 往 使 相 同 項 目 的 檢 測 結 果向 同 一 方 向 偏 離 。 有 關 這 些 準 確 度 的 指 標 通 常 無具 體 說 明 ， 但 可 以 通 過 相 應 的 實 驗 來 檢 測 。 應 當說 多 數(shù) 分 析 儀 對 有 關 這 些 部 件 的 制 作 及 其 工 作 的準 確 度 比 手 工 操 作 及 其 所 用 的 儀 器

37、 好 得 多 。 （ 二 ） 精 密 度 以 上 影 響 準 確 度 的 因 素 同 樣 可 因 其 制 作不 精 而 使 工 作 穩(wěn) 定 性 較 差 ， 造 成 精 密 度 不 佳 ，吸 樣 精 度 以 及 樣 品 針 、 試 劑 針 、 攪 拌 棒 、 反應 杯 的 交 叉 污 染 是 影 響 精 密 度 的 主 要 因 素 ，有 關 分 析 儀 的 資 料 中 通 常 會 介 紹 防 止 和 減 少交 叉 污 染 的 措 施 ， 主 要 是 其 沖 洗 系 統(tǒng) 各 有 特點 ， 沖 洗 效 果 可 能 不 同 。 （ 三 ） 檢 測 能 力 1 檢 測 方 法 多 數(shù) 分 析 儀 能 做

38、 終 點 法 、 固 定時 間 法 、 連 續(xù) 監(jiān) 測 法 和 透 射 比 濁 法 。 2 檢 測 時 間 分 析 儀 通 常 可 檢 測 最 長 10min的 反 應 ， 個 別 最 長 能 檢 測 15-22min甚 至 更 長 。 3. 加 試 劑 次 數(shù) 能 加 1-4種 試 劑 ， 多 數(shù) 為 2種 。 4. 檢 測 范 圍 能 檢 測 吸 光 度 的 最 高 值 及 其 準 確 度 決 定檢 測 上 限 ； 檢 測 靈 敏 度 則 為 能 辨 別 待 測 物 最小 濃 度 差 的 能 力 ， 有 時 與 最 低 檢 出 濃 度 一 致 ，但 后 者 主 要 取 決 于 方 法 靈

39、敏 度 。 （ 四 ） 速 度 影 響 分 析 速 度 的 因 素 ， 包 括 本 節(jié) 一 中 所述 的 試 劑 瓶 數(shù) 、 取 樣 周 期 、 反 應 杯 數(shù) 量 、一 次 可 容 納 樣 品 數(shù) 量 、 試 劑 瓶 容 量 和 模 塊組 合 能 力 等 。（ 五 ） 檢 測 成 本 反 應 杯 類 型 和 壽 命 決 定 其 耗 費 ， 最 小 樣品 量 影 響 試 劑 用 量 ， 最 小 反 應 杯 液 量 可 決定 樣 品 和 試 劑 用 量 ， 以 及 保 養(yǎng) 維 護 消 耗 。 第 五 節(jié) 生 化 分 析 儀 試 劑 盒 的 選 擇 和 評 價n 臨 床 生 化 試 劑 盒 臨 床

40、 生 化 商 品 試 劑 與 標 準 液 按 檢 測 項 目 組 合 成 一套 放 在 一 個 包 裝 盒 內 叫 試 劑 盒 （ reagent kit） ， 或 叫 試 劑 組合 （ reagent set ） 。 與 自 動 化 分 析 儀 匹 配 的 試 劑 盒 的 研 制 、 生 產 和 供 應走 向 產 業(yè) 化 的 道 路 ， 它 無 疑 是 臨 床 生 化 發(fā) 展 史 上 一 個 巨 大 的技 術 進 步 。 n試 劑 盒 的 分 類 和 發(fā) 展 臨 床 生 化 診 斷 試 劑 種 類 繁 多 ， 有 液 體 型 、粉 劑 型 、 片 劑 型 ， 有 單 一 試 劑 、 雙 試

41、劑 、 干 試劑 、 多 試 劑 等 。 縱 觀 近 20多 年 來 的 發(fā) 展 ， 臨 床 生 化 體外 診 斷 試 劑 盒 的 分 類 和 發(fā) 展 歷 史 可 表 示 如 下 ： 化 學 分 析 法 方 法 物 理 性 狀 組 合 形 式 操 作 方 式 液 體 型 自 配 試 劑 液 體 多 劑 型 試 劑 手 工 法 多 步 操 作 酶 法 分 析 干 粉 片 型 試 劑 液 體 單 劑 型 試 劑 流 動 離 心 式 分 析 儀 免 疫 學 法 液 體 型 商 品 試 劑 液 體 雙 劑 型 試 劑 任 選 分 立 式 分 析 儀 干 化 學 法 干 式 多 層 膠 片 型 試 劑

42、單 劑 型 干 片 式 試 劑 干 片 式 分 析 儀 （ 一 ） 液 體 型 試 劑 優(yōu) 點 是 液 體 型 試 劑 的 試 劑 組 分 高 度 均 一 ， 瓶 間 差 異 小 ， 測定 重 復 性 好 和 使 用 方 便 ； 它 也 無 需 加 入 任 何 輔 助 試 劑 及 蒸 餾水 ， 避 免 了 外 源 性 水 質 對 試 劑 的 影 響 ， 性 能 較 穩(wěn) 定 ， 測 定 結果 較 為 準 確 。 缺 點 是 液 體 型 試 劑 （ 尤 其 是 酶 試 劑 ） 保 存 時 間 較 短 ， 不 便于 運 輸 。一 、 液 體 型 試 劑 和 粉 （ 片 ） 劑 型 試 劑 所 謂 液

43、 體 單 試 劑 就 是 將 某 種 生 化 檢 驗 項 目 所 用 到 的 試劑 科 學 地 混 合 在 一 起 ， 組 成 為 一 種 試 劑 。 應 用 時 ， 只 須 將標 本 和 試 劑 按 一 定 比 例 混 合 ， 即 可 進 行 相 應 的 生 化 反 應 ，然 后 用 適 當 的 方 法 檢 測 結 果 。 1 液 體 單 試 劑 內 源 性 甘 油 給 甘 油 三 酯 測 定 的 干 擾 。 內 外 源 性 NH4+對 尿 素 酶 法 測 定 的 干 擾 。 內 源 性 丙 酮 酸 對 ALT、 AST測 定 的 干 擾 等 。 維 生 素 C和 膽 紅 素 對 Trind

44、er反 應 的 干 擾 。 n單 試 劑 存 在 抗 干 擾 能 力 差 的 缺 點 ， 給 測 定 結 果帶 來 相 當 大 的 分 析 誤 差 。 例 如 ： 所 謂 液 體 雙 試 劑 就 是 將 某 些 生 化 檢 測 項 目 所 用 到 的 試劑 ， 按 用 途 科 學 地 分 成 兩 類 ， 分 別 配 成 兩 種 試 劑 ， 通 常 第一 試 劑 加 入 后 可 起 到 全 部 或 部 分 消 除 某 些 內 源 性 干 擾 的 作用 ， 第 二 試 劑 為 啟 動 被 檢 測 物 質 反 應 的 試 劑 ， 兩 種 試 劑 混合 后 才 共 同 完 成 被 檢 項 目 的 生

45、化 反 應 。 然 后 用 適 當 的 方 法檢 測 結 果 。 2 液 體 雙 試 劑 所 謂 粉 劑 型 及 片 劑 型 試 劑 ， 即 是 將 試 劑 的各 組 分 用 球 磨 技 術 粉 碎 成 粉 劑 或 混 合 后 壓 成 片 劑， 使 用 前 再 加 入 指 定 的 溶 液 復 溶 成 液 體 試 劑 。 （ 二 ） 粉 （ 片 ） 劑 型 試 劑 用 固 體 原 料 研 磨 后 制 成 粉 劑 或 片 劑 ， 則存 在 許 多 問 題 ： 要 使 試 劑 各 組 分 混 合 得 非 常 均 勻 ， 技 術 難 度 很大 ； 分 裝 過 程 中 的 稱 量 誤 差 及 復 溶 時

46、 加 水 量 的 準 確性 影 響 試 劑 的 瓶 間 差 ； 水 質 優(yōu) 劣 對 試 劑 的 穩(wěn) 定 性 和 測 定 的 可 靠 性 有 相當 大 的 影 響 。 （ 一 ） 檢 查 包 裝 是 否 完 整（ 二 ） 試 劑 質 量 初 評 （ 三 ） 試 劑 性 能 特 征 的 評 估二 、 試 劑 盒 的 選 擇 和 評 價 （ 一 ） 檢 查 包 裝 是 否 完 整 商 品 試 劑 盒 不 僅 應 具 有 優(yōu) 質 的 試 劑 內 容 ， 而且 應 有 完 整 牢 固 的 包 裝 和 詳 盡 明 確 的 說 明 書 。1、 外 包 裝 外 包 裝 應 完 整 牢 固 ， 封 口 嚴 密

47、。2、 內 包 裝 內 包 裝 應 有 清 晰 完 整 的 標 簽 ， 牢 固 貼 于 容 器 表 面 。3、 說 明 書 內 容 包 括 試 劑 名 稱 、 用 途 、 測 定 原 理 和 技 術 要 求 、標 本 要 求 、 衛(wèi) 生 部 批 準 的 文 號 等 。 1.說 明 書 審 查 說 明 書 是 用 戶 了 解 和 正 確 使 用 試 劑 盒 的 指 南 。審 查 內 容 包 括 ： 試 劑 名 稱 ； 用 途 ； 測 定 原 理 和 技 術 要 求 ； 試 劑 盒 內 的 包 裝 內 容 ； 適 用 儀 器 ； 1.說 明 書 審 查 標 本 要 求 ； 測 定 步 驟 及 注

48、意 事 項 ； 貯 存 的 條 件 及 有 效 期 ； 性 能 特 征 ， 包 括 準 確 度 、 精 確 度 、 特 異 性 、 受 干 擾 的 程 度 、 線 性 范 圍 、 參 考 范 圍 ； 生 產 單 位 名 稱 、 地 址 、 郵 編 及 電 話 。 （ 二 ） 試 劑 質 量 初 評n通 過 觀 察 試 劑 的 顏 色 、 性 狀 及 溶 解 度 等 對 試劑 質 量 進 行 初 步 評 價 。n粉 劑 型 應 均 勻 無 凝 塊 ， 不 粘 附 瓶 壁 ；n液 體 型 試 劑 應 無 沉 淀 ， 無 混 濁 ， 無 滲 漏 。 （ 三 ） 試 劑 性 能 特 征 的 評 估1、

49、 準 確 度2、 精 密 度 3、 干 擾 物 試 驗4、 線 性 范 圍5、 穩(wěn) 定 性 （ 一 ） 測 定 準 確 度 1、 通 常 用 回 收 試 驗 來 衡 量 試 劑 盒 的 準 確 度 。 回 收 率 越 接 近100%， 準 確 率 越 高 ， 一 般 以 100% 5%為 合 格 。2、 也 可 以 用 對 比 試 驗 來 衡 量 ： 將 被 檢 試 劑 盒 與 公 認 的 參 考方 法 同 時 測 定 若 干 樣 本 ， 計 算 兩 組 結 果 的 相 關 系 數(shù) 和 直 線 回歸 方 程 。 相 關 系 數(shù) 在 0.9 1.0之 間 ， 斜 率 b越 接 近 1.0， 截

50、距 a越 接近 0， 則 準 確 度 越 高 （ y=a+bx） 。 b表 示 比 例 系 統(tǒng) 誤 差 ， a表 示 恒 定 系 統(tǒng) 誤 差 。 （ 二 ） 檢 驗 精 密 度 試 劑 批 內 精 密 度 和 批 間 精 密 度 均 以 變 異 系 數(shù) 來 表 示 ，一 般 批 間 CV值 應 大 于 批 內 ， 但 二 者 應 無 顯 著 差 異 ， 否 則 ，試 劑 盒 的 均 一 性 不 符 合 要 求 。 1 批 內 精 密 度 同 一 樣 品 用 同 一 瓶 試 劑 測 定 10次 ， 求 平均 值 、 標 準 差 、 變 異 系 數(shù) 。 2 批 間 精 密 度 同 一 樣 品 ，

51、用 不 同 批 號 的 10瓶 試 劑 測 定 ，求 平 均 值 、 標 準 差 、 變 異 系 數(shù) 。 （ 三 ） 干 擾 物 試 驗通 過 試 驗 觀 察 試 劑 對 干 擾 物 影 響 的 耐 受 程 度 。 方 法 取 一 混 合 標 本 ， 從 中 分 出 幾 份 ， 分 別加 入 不 同 以 知 量 的 干 擾 物 ， 然 后 測 定 出 不 同 干 擾物 濃 度 下 的 待 測 物 量 ， 比 較 其 測 定 結 果 ， 從 各 自的 偏 差 程 度 即 可 了 解 試 劑 對 干 擾 物 的 耐 受 程 度 。 （ 四 ） 測 定 線 性 范 圍n 線 性 范 圍 指 該 試

52、劑 盒 按 其 說 明 使 用 時 可 準 確 測 量的 范 圍 。 試 劑 盒 的 線 性 范 圍 應 能 覆 蓋 臨 床 上 的 參 考 值 范圍 和 常 見 疾 病 的 醫(yī) 學 決 定 水 平 ， 以 減 少 樣 品 稀 釋 重測 的 機 會 。 一 旦 線 性 范 圍 變 窄 即 應 廢 棄 。n造 成 線 性 范 圍 變 窄 的 原 因 常 見 的 有 ： 生 產 中 組 份 投 料 量 不 足 ； 生 產 后 組 分 穩(wěn) 定 性 差 ； 運 輸 和 貯 存 不 當 等 。 （ 五 ） 穩(wěn) 定 性 試 驗 試 劑 盒 穩(wěn) 定 性 是 指 試 劑 盒 在 規(guī) 定 條 件 下 儲 存 仍

53、 保 持其 性 能 指 標 的 期 限 。 該 期 限 應 符 合 規(guī) 定 的 儲 存 期 。 方 法有 以 下 三 種 。 1 原 包 裝 試 劑 的 穩(wěn) 定 性 按 說 明 書 的 保 存 方 法 儲 藏 ， 于 不同 時 期 取 出 一 瓶 復 溶 ， 測 定 試 劑 吸 光 度 值 、 標 準 品 含 量 、 定值 血 清 含 量 、 線 性 范 圍 、 酶 促 反 應 時 間 曲 線 或 化 學 反 應 速 度時 間 曲 線 及 其 他 性 能 指 標 ， 直 到 這 些 指 標 變 化 超 出 規(guī) 定 值 的10%以 上 的 期 限 ， 為 原 包 裝 試 劑 的 穩(wěn) 定 期 。

54、2 復 溶 后 試 劑 的 穩(wěn) 定 性 將 復 溶 試 劑 分 別 放在 4 、 25 保 存 ， 逐 日 與 新 復 溶 試 劑 對 比 ， 觀察 上 述 指 標 （ 見 原 包 裝 試 劑 穩(wěn) 定 性 ） ， 直 到 測 定結 果 與 新 復 溶 試 劑 的 差 值 10%以 上 ， 這 一 期 限為 復 溶 后 試 劑 的 穩(wěn) 定 期 。 3 不 同 溫 度 下 的 保 存 期 將 原 包 裝 試 劑 盒 置25 、 37 、 45 、 4 保 存 ， 以 出 現(xiàn) 說 明 試 劑 變 質的 指 標 來 確 定 在 不 同 溫 度 下 的 保 存 期 。 一 、 名 詞 解 釋1 真 值2 定 值 3 標 準 物 4 校 準 物 校 準 品5 偏 倚6 重 復 性 條 件二 、 簡 答 題1 全 自 動 生 化 分 析 儀 的 定 義 與 特 點 。2 檢 測 系 統(tǒng) 性 能 的 核 實 、 確 認 與 評 價 要 求 。思 考 題