2019-2020年高中生物《動物細胞工程》教案1 新人教版選修3.doc
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2019-2020年高中生物《動物細胞工程》教案1 新人教版選修3 一、教學目標 1.簡述動物細胞培養(yǎng)的過程、條件及應用。 2.簡述通過動物體細胞核移植技術(shù)克隆動物的過程和應用前景。 3.舉例說出動物細胞融合與單克隆抗體的原理和應用。 二、教學重點和難點 1.教學重點 (1)動物細胞培養(yǎng)的過程及條件。 (2)用動物體細胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。 (3)單克隆抗體的制備和應用。 2.教學難點 (1) 用動物體細胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。 (2) 單克隆抗體的制備過程。 三、教學策略 有了第一節(jié)的基礎,學生對本節(jié)內(nèi)容易于理解。因此,本節(jié)教學采用講授、自學、討論等相結(jié)合的教學方法。具體建議如下。 在動物細胞培養(yǎng)的教學中,可把這部分內(nèi)容歸納成三個問題:(1)為什么要進行動物細胞的培養(yǎng)?(2)什么是動物細胞的培養(yǎng)?(3)怎樣進行動物細胞的培養(yǎng)?第三個問題是本節(jié)課的重點。關(guān)于動物細胞的培養(yǎng)過程,教師可參照教材中的動物細胞培養(yǎng)過程示意圖進行講解,講解中要注意區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)這兩個概念。對于動物細胞培養(yǎng)的條件,則要從學生已有的內(nèi)環(huán)境的知識出發(fā),啟發(fā)學生自己動腦思考這個問題,以加深對培養(yǎng)條件的理解。 在動物體細胞核移植技術(shù)及克隆動物的教學中,可首先讓學生列舉所知道的克隆動物,調(diào)動學生已有的知識。隨后可向?qū)W生提問:克隆動物的方法與植物組織培養(yǎng)一樣嗎?然后向?qū)W生說明目前動物體細胞克隆是通過核移植技術(shù)來實現(xiàn)的,以引入本節(jié)課的主題。關(guān)于核移植技術(shù)發(fā)展簡史,可讓學生在課堂上閱讀,本節(jié)課的重點和難點是在動物體細胞核移植技術(shù)過程,教材中選用了一個非常好的素材──以誕生在我國的高產(chǎn)克隆奶牛為例,來說明體細胞核移植的過程。教師應充分利用和挖掘教材內(nèi)容,帶領(lǐng)學生一步步弄清動物體細胞核移植技術(shù)的過程。對于體細胞核移植技術(shù)的應用前景和存在的問題這部分內(nèi)容,可結(jié)合本節(jié)教材“思考與探究”中的有關(guān)問題,以及“拓展視野”中的有關(guān)克隆羊多利的早衰問題等,讓學生討論。 在細胞融合和單克隆抗體的教學中,教師可先啟發(fā)學生回顧植物體細胞雜交技術(shù)的過程,再通過動植物細胞異同點的對比,引導學生大膽推測出動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理及方法基本相同,以培養(yǎng)學生的知識遷移能力。隨后通過教材上的用滅活病毒誘導動物細胞融合過程的示意圖,重點講解為什么滅活的病毒可用來做誘導物,并指出動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起,讓它們隨機融合后,再從中篩選雜交細胞。最后教師要講明動物細胞融合技術(shù)的意義和應用,以便自然過渡到單克隆抗體上來。 關(guān)于單克隆抗體的教學,教師要利用好教材提供的材料,突出從問題入手的思路,先介紹醫(yī)療實踐中僅靠細胞培養(yǎng)難以獲得大量抗體,然后,一步一步啟發(fā)學生討論怎樣解決這個問題。要把科學家在研制單克隆抗體過程中,通過大膽的想像,創(chuàng)造性地解決問題的過程作為本節(jié)教學的重點和亮點,使學生在獲得單克隆抗體知識的同時,受到創(chuàng)新精神的教育。 四、答案和提示 2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù) (一)思考與探究 1.幼齡與老齡動物的組織細胞比較,分化程度低的與分化程度高的組織細胞比較,哪一種更易于培養(yǎng)?思考一下,這是什么道理? 提示:細胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關(guān)系,細胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān),幼齡動物細胞增殖能力強,有絲分裂旺盛,老齡動物則相反。所以,一般來說幼年動物的組織細胞比老年動物的組織細胞易于培養(yǎng)。同樣,組織細胞的分化程度越低,則增殖能力越強,所以更容易培養(yǎng)。 2.動物細胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎?為什么? 提示:脫分化又稱去分化,是指分化細胞失去特有的結(jié)構(gòu)和功能變?yōu)榫哂形捶只毎匦缘倪^程。植物的任何一部分,甚至單個細胞都具有長成完整植株的能力。但要發(fā)育成完整植株,必須先脫分化,脫分化的細胞具有發(fā)育成任何組織的能力,然后進行再分化,形成完整植株。植物細胞培養(yǎng)主要用于農(nóng)林生產(chǎn)中的作物、苗木育種,快速繁育種苗、培育無病毒植株等,這就要求植物的組織或細胞先進行脫分化。動物細胞的培養(yǎng)有各種用途,一般而言,動物細胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄,失去了發(fā)育成完整個體的能力,所以,動物細胞也就沒有類似植物組織或細胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細胞定向分化,通常采用定向誘導動物干細胞,使其分化成所需要的組織或器官。 3.1997年,美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(Lucinda)的奶牛,年產(chǎn)奶量為30.8 t,創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛,年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸,而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3~4 t。 (1)能利用體細胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達嗎?請說明理由。 提示:可以用體細胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達。盧辛達的產(chǎn)奶量很高,說明它有高產(chǎn)奶的遺傳基礎,利用盧辛達的體細胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來自該奶牛,其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎,如果精心培育和飼養(yǎng),有可能在世界范圍內(nèi)推廣,克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖,可得到很多高產(chǎn)的后代,從而加快奶牛改良進程。 但同時需注意,該克隆牛不能無限制地推廣,其數(shù)量不宜過多,尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖,以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。 (2)如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達的任務交給你,你將如何對它進行克??? 提示:首先從盧辛達耳朵(也可用別的組織、器官,耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織,在體外培養(yǎng)獲得該組織(如軟骨組織)的細胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢,抽取卵母細胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細胞的核,再將耳細胞注入卵母細胞,用電刺激方法使卵母細胞與體細胞融合,這時供體核就進入了受體卵母細胞,再用電刺激或化學物質(zhì)激活注入了體細胞核的卵母細胞,使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后,挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。 4.體細胞核移植技術(shù)在研究和應用上還存在什么問題?請你查閱資料,了解這方面的前沿動態(tài)。 提示:在研究方面,克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚,克隆技術(shù)效率低,克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。 在應用上,生產(chǎn)克隆動物費用昂貴,距大規(guī)模應用還有一定距離。 (二)正文中討論題 【討論1】 多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中,根據(jù)你所學的內(nèi)環(huán)境的知識,思考并討論以下問題: 1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)? 提示:充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。 2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件? 提示:無菌、無毒的環(huán)境。 【討論2】 1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前,為什么必須先去掉受體卵母細胞的核? 提示:為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細胞,在供體細胞的細胞核移至受體細胞之前,必須將受體細胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹? 2.用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞,想一想,這是為什么? 提示:培養(yǎng)的動物細胞一般當傳代至10~50代左右時,部分細胞核型可能會發(fā)生變化,其細胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變,而10代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型。因此,在體細胞核移植中,為了保證供體細胞正常的遺傳基礎,通常采用傳代10代以內(nèi)的細胞。 3.你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物,是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎?為什么? 提示:克隆動物絕大部分DNA來自于供體細胞核,但其核外還有少量的DNA,即線粒體中的DNA是來自于受體卵母細胞。所以,用教材中所述的方法克隆的動物不是供核動物完全相同的復制。 此外,即便動物的遺傳基礎完全相同,但動物的一些行為、習性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系,核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同,其形成的行為、習性也不可能和核供體動物完全相同,從這一角度看,克隆動物不會是核供體動物100%的復制。 (三)尋根問底 胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎?為什么? 提示:胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外,長時間的作用也會消化細胞膜蛋白,對細胞有損傷作用,因此必須控制好胰蛋白酶的消化時間。 (四)旁欄思考題 1.進行動物細胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細胞,說明細胞間的物質(zhì)主要是什么成分?用胃蛋白酶行嗎? 提示:用胰蛋白酶分散細胞,說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2,當pH大于6時,胃蛋白酶就會失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2~8.4。多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2~7.4,胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性,而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高,因此胰蛋白酶適宜用于細胞培養(yǎng)時的消化。 2.為什么對動物細胞進行培養(yǎng)時通常要添加血清? 提示:血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種,是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分,其中有些氨基酸動物細胞本身不能合成(稱為必需氨基酸),必須由培養(yǎng)液提供。血清激素有胰島素、生長激素等及多種生長因子(如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、類胰島素生長因子等);血清還含有多種未知的促細胞生長因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì),能促進細胞的生長、增殖和貼附。因此,細胞培養(yǎng)時,要保證細胞能夠順利生長和增殖,一般需添加10%~20%的血清。 2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體 思考與探究 1.植物體細胞雜交技術(shù)與動物細胞融合技術(shù)有什么不同? 提示:植物體細胞雜交技術(shù)與動物細胞融合技術(shù)基本相同,不同的是植物體細胞融合前需去掉細胞壁,然后再融合;動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。 2.制備單克隆抗體時,為什么要選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞? 提示:哺乳動物感染抗原后,其體內(nèi)會形成相應的B淋巴細胞,B淋巴細胞能分泌相應的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應的過程中,每一種B淋巴細胞能分泌一種特異性抗體,要想獲得大量的特異性抗體,必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細胞大量增殖。B淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力,但不能在體外增殖;骨髓瘤細胞是一種癌細胞,它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖,但不能產(chǎn)生抗體。因此,把一種B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合,產(chǎn)生雜交瘤細胞,它會兼有兩個親本細胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖,同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 五、知識拓展 1.動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是如何發(fā)展起來的? 1907年,哈里森(Harrison)在無菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基,培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周,并觀察到神經(jīng)細胞突起的生長過程,由此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法,奠定了動物組織體外培養(yǎng)的基礎。之后,又有人將懸滴培養(yǎng)法改良為雙蓋片培養(yǎng),提高了傳代效率并減少了污染。1923年,卡雷爾(Carrel)設計了卡氏瓶培養(yǎng)法,擴大了組織生存空間。 1951年, 厄爾 (Earle) 發(fā)明了體外培養(yǎng)動物細胞的人工合成培養(yǎng)基。1951年,波米拉(Pomerat)設計了灌流小室,使細胞生活在不斷更新的培養(yǎng)液中,便于作顯微攝影和細胞代謝的研究。1957年,格拉夫(Graff)用灌流技術(shù)進一步提高了細胞懸浮培養(yǎng)的效率。1957年,杜爾貝科(Dulbecco)等人采用胰蛋白酶消化處理和應用液體培養(yǎng)基的方法,獲得了單層細胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn),對組織培養(yǎng)的發(fā)展起了很大的推動作用。此后單層培養(yǎng)成為組織培養(yǎng)普遍應用的技術(shù)。20世紀60年代后,動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)開始起步,并逐步發(fā)展。20世紀80年代后,隨著基因工程和其他細胞工程技術(shù)的發(fā)展,細胞培養(yǎng)技術(shù)已成為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、生物制藥及其他許多技術(shù)的基礎,在現(xiàn)代生物技術(shù)中發(fā)揮著重要的作用。 2.為什么動物細胞要分散成單個細胞培養(yǎng)?用酶消化的是什么物質(zhì)? 細胞原代培養(yǎng)時可以分散成單個細胞培養(yǎng),也可以用細胞群(團)、組織塊培養(yǎng),經(jīng)傳代培養(yǎng)后,最終都為細胞培養(yǎng)。 分散成單個細胞、細胞群(團)后容易培養(yǎng),細胞所需的營養(yǎng)容易供應,其代謝廢物容易排出;而用大塊組織培養(yǎng)時,內(nèi)部細胞的營養(yǎng)供應和代謝廢物的排出都較困難,因此,這些細胞在體外長時間的生存和生長就較困難。同時,分散成單個細胞培養(yǎng),可使得在細胞水平操作的其他技術(shù)得以實現(xiàn)。 用酶消化的是細胞間基質(zhì),細胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用蛋白酶可使其消化,從而使細胞相互分離。 3.動物細胞培養(yǎng)液是由哪些化學成分組成的? 糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。 4.體細胞核移植技術(shù)為什么要選擇MII期的卵母細胞做受體細胞? 細胞核移植技術(shù)中能用作受體細胞的通常有MII期卵母細胞和受精卵(合子)。早期核移植技術(shù)中常用受精卵,后來基本上用MII期卵母細胞取代了受精卵,主要因為兩者的細胞質(zhì)環(huán)境不同。有人認為重組需要的因子存在于MII期卵母細胞的胞質(zhì)中,而在原核形成時這些因子已被降解或用光,因此,原核擴張后受精卵去核可引起胞質(zhì)中重組因子缺乏。成熟促進因子(MPF)是卵母細胞細胞質(zhì)中重要的胞質(zhì)影響因子,MPF的活性在卵母細胞減數(shù)分裂的MI期和MII期達到最高,受精或激活后,MPF迅速滅活,因此,MII期卵母細胞中MPF活性高,而受精卵中MPF活性低。MPF水平的高低可影響供體核染色質(zhì)的狀態(tài)和復制。MII期卵母細胞細胞核、細胞質(zhì)已成熟,而MI卵母細胞細胞核、細胞質(zhì)尚未成熟,其細胞質(zhì)不能支持胚胎的全程發(fā)育,因此,盡管MI期卵母細胞MPF活性也高,但不能用作受體卵母細胞。 也有人認為用去核合子做受體時,可能由于合子去核時一些早期發(fā)育必需的因子隨原核的去除而被去掉了,而使去核受精卵缺乏發(fā)育能力。 因此,目前廣泛采用MII期卵母細胞做受體。 5.已成功的動物細胞融合實例還有哪些? 生物種類 細胞來源 成功年代 酵母菌—雞 原生質(zhì)體—血紅細胞 1975年 人—胡蘿卜 腹水癌細胞—原生質(zhì)體 1976年 人—小鼠 纖維肉瘤細胞—畸胎瘤細胞 1978年 要知道更多的實例,需經(jīng)常查閱更多科研報道。 6.為什么不用兩個而要用多個細胞進行動物細胞間的融合? 就目前常用的細胞融合方法來看,不管是用物理的、化學的方法,還是生物的方法,其融合率都不可能是100%。僅用兩個細胞融合,其效率太低,不一定能得到融合細胞。更重要的是,即使兩個細胞已發(fā)生融合,但并不一定是研究者期望得到的細胞類型。目前動物細胞融合技術(shù)最有價值的應用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道,體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上,但是每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體,如果僅取一個脾細胞(含B淋巴細胞)和一個瘤細胞雜交,我們不能確定該脾細胞分泌的抗體是否正是我們所需要的;若用大量的脾細胞和瘤細胞進行融合,就可以從融合細胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。 7.如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)? 融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后,能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞,通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細胞稀釋,用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng),使每孔細胞不超過一個,通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體(常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法),那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞,挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋,一般需進行3~4次,直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。- 1.請仔細閱讀文檔,確保文檔完整性,對于不預覽、不比對內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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