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1、金胺“O”熒光染色法在結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2008年5月第l8卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008;Vol18No5851 【微生物檢測(cè)方法】 金胺”0”熒光染色法在結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 戴學(xué)海,金法祥,湯佳良,許鵬 (浙江省紹興市第六人民醫(yī)院,浙江紹興312000) [摘要]目的:比較兩種抗酸桿菌染色方法的差異.方法:采用金胺”0”熒光染色法和萋一尼染色法同時(shí)對(duì)同一病人標(biāo) 本進(jìn)行檢測(cè).結(jié)果:經(jīng)過240例標(biāo)本對(duì)比實(shí)驗(yàn),熒光染色組84例陽性,其陽性率為35.O%,萋一尼染色組7O例

2、,陽性率 為29.2%,經(jīng)檢驗(yàn),X2=1.88,P>0.05,無顯著性差異.在兩組結(jié)果1+的陽性對(duì)比中,熒光染色組為15.8%,而抗酸 染色組為9.6%,經(jīng)檢驗(yàn)=5.56,P<0.05,兩種方法有差異;而2+,3+,4+的陽性率P值均大于0.05,無顯著性差 異.結(jié)論:金胺”0”熒光染色組檢出率明顯高于萋一尼染色組,尤其是痰液標(biāo)本菌量是1+,對(duì)那些病變輕,排菌量少的肺 結(jié)核病人的診斷具有重要意義.熒光染色鏡檢時(shí)間短,工作效率高,適用于大量標(biāo)本的檢測(cè). [關(guān)鍵詞]熒光染色;抗酸染色;抗酸桿菌 [中圖分類號(hào)]R446[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1004—8685(2008)

3、05—0851—02 ApplicationoffluorescencestainofauramineOtoinspectionoftuberculosisbacteriology DaiXue—hai,JinFa—xiang,TangJia—liang,XuPeng (ShaoxingSixthPeopleSHospital,Shaoxing312000,China) [Abstract]0bjective:Tocomparethedifferencesbetweenthesetwowaysofacid—faststains.Methods:Testsimultaneously o

4、nthespecimensfromthesamepatientsbythewaysoffluorescencestainofAuramineOandZiehi—Neelsenstain.Results:Care. fulcontrastofthe240specimens,thereare84onesinthegroupofflouescencestain,whicharepositive,whosepositiverateis 35.O%.WhileinthegroupofZiehi—Neelsenstain,thereare70specimensprovedpositive,whosep

5、ositiverateisjust’29.2%. Throughtheinspectionof,resultingin=1.88,P>0.05,wecanseethereisondifferencebetweenthesetwoways.Interms ofwatchingtheirpositivecontrastof1+.therateoffluorescencestainis15.8%.buttherateofacid—faststainisonly9.6%. Meanwhile,throughtheinspectionofX,whichresultedin=5.56,P<

6、;0.05,obviously,therearesomedifferencesbetween them.WhatSparedwiththeirpositiveratesof2+.3+.4+.theyareallover0.05.whichiSalmostthe same.Conclusion:ComparedwithZiehi—Neelsenstain,fluorescencestainofauramineOhasaclearadvantageinseeking rates.Especiallytothepatientsofpulmonarytuberculosis.whosebacte

7、riumvolumeofsputumspecimensis1+andthepathologi— calchangesarelighterandthebacteriumcapacitiesaresmaller,atthesametime.Becauseoffluorescencestain,weneedspend lesstimeonlensexams.Whichisevenmoreefficient.Nodouhisfitsfortestingagreatspecimen. [Keywords]Fluorescencestain;Acid—faststain;Acid—fastbacil

8、lus 目前,臨床上結(jié)核病細(xì)菌學(xué)的診斷主要采用抗酸染色法, 即萋一尼染色法,該法已成為抗酸桿菌檢測(cè)的經(jīng)典方法,但因 該法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),陽性檢出率低,已無法滿足臨床診斷需要. 我們采用金胺”O(jiān)”熒光染色法檢測(cè)240例痰液標(biāo)本,通過與萋 一 尼法對(duì)比試驗(yàn),證明熒光染色法能提高抗酸桿菌的陽性檢 出率. 1材料與方法 1.1熒光染色液的配制 染色液:金胺”0”1g溶于95%乙醇100ml中,加5%石 炭酸液900ml混勻即可.脫色劑:3%鹽酸酒精.復(fù)染劑:高 錳酸鉀0.5g,溶于100ml蒸餾水. 1.2抗酸染色液配制 [作者簡(jiǎn)介]戴學(xué)海(1962～),男,學(xué)士,副主任醫(yī)師,

9、主要從事 老年內(nèi)年及基礎(chǔ)研究工作. 按照”全國(guó)結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程”…進(jìn)行. 1.3標(biāo)本來源 結(jié)核病人痰液標(biāo)本來自我院門診或住院結(jié)核病人,這些 病人均經(jīng)CT,PPD試驗(yàn)及結(jié)核抗體檢測(cè)等臨床診斷為肺結(jié)核 病人. 1.4操作方法 每份痰液標(biāo)本按標(biāo)準(zhǔn)(2cm1cm)涂?jī)蓮埓笮〖昂穸认? 當(dāng)?shù)钠哟?火焰固定,將痰涂片隨機(jī)分成熒光染色組和抗 酸染色兩組進(jìn)行染色和鏡檢. 1.5染色方法 將痰液涂片用熒光染色液染10min,水洗后用3%的鹽酸 酒精脫色1～2min,至外觀無黃色為止,水洗后加復(fù)染劑1～ 2min,水洗,晾干待檢.抗酸染色法按全國(guó)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 規(guī)程進(jìn)行.

10、 (下轉(zhuǎn)第923頁) 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2008年5月第18卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008:Vol18No5923 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,微生物性病原是導(dǎo)致食物中毒的主要因素,其 中2003,2004年副溶血性弧菌導(dǎo)致的食源性疾病分別占微生 物性食源性疾病的40%和23%,已經(jīng)超過沙門氏菌成為微生 物性食物中毒最大的致病菌,而深圳市2003～2006年細(xì)菌性 食物中毒的病因分析中,副溶血性弧菌也是排在首位.副溶 血性弧菌嗜鹽畏酸,在無鹽培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng),在食醋中只 能存活1min,加熱至56~C5～10m

11、in滅活.由該菌引起的 食物中毒多為進(jìn)食海產(chǎn)品或鹽腌漬品,其次為蛋品,肉類或 蔬菜.進(jìn)食肉類或蔬菜而致病者,多因食物容器或砧板污染 所引起. 根據(jù)中毒患者的臨床癥狀,流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢查 結(jié)果,可以確定本次食物中毒是一起由副溶血性弧菌引起的 食物中毒.造成這起中毒事故發(fā)生的原因:一方面是由于該 店環(huán)境衛(wèi)生條件不良,操作間管理混亂,冰箱內(nèi)存放的食品生 熟不分,冰箱內(nèi)有血跡及積霜并出現(xiàn)滴水現(xiàn)象;廚房沒有粗加 工間,砧板生熟不分,有一塊砧板出現(xiàn)爆裂現(xiàn)象(砧板1),裂縫 內(nèi)有食物殘?jiān)?未及時(shí)清除干凈;而廚房當(dāng)班廚師均留有長(zhǎng)指 甲,帶戒指,這些都可能存在交叉污染,為細(xì)菌的繁殖提

12、供了 條件;另一方面消費(fèi)者的預(yù)防意識(shí)不夠也是一個(gè)主要原因. 認(rèn)為經(jīng)過火鍋的高溫煮燙食物就滅菌了,為了保證肉的鮮嫩, 甚至煮很短時(shí)間就撈出食用,殊不知在高溫下作用一定時(shí)間 細(xì)菌才會(huì)被殺死,時(shí)間過短將起不到應(yīng)有的殺菌作用. 4建議 應(yīng)加強(qiáng)對(duì)從業(yè)人員的衛(wèi)生知識(shí)培訓(xùn),提高其食品衛(wèi)生管 理水平,降低操作不當(dāng)及食品加工過程可能發(fā)生的危害因素, 保證食物安全衛(wèi)生;同時(shí)也提醒我們衛(wèi)生部門應(yīng)加強(qiáng)《傳染病 防治法》宣傳,加大衛(wèi)生知識(shí)執(zhí)法力度,在食品衛(wèi)生監(jiān)督管理 中,預(yù)防細(xì)菌性食物中毒應(yīng)重點(diǎn)抓住3個(gè)環(huán)節(jié):①防止食品污 染;②控制細(xì)菌繁殖;③食品食用前應(yīng)徹底加熱,以消滅病原 菌的傳播.消費(fèi)者也

13、應(yīng)多了解一些傳染病的預(yù)防知識(shí),增加 自我保護(hù)能力. [參考文獻(xiàn)] [1]扈慶華,鄭薇薇,石曉路,等.雙重實(shí)時(shí)PCR快速同時(shí)檢測(cè)霍亂弧 菌和副溶血弧菌[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2004,24(12): 1004一l007. (收稿日期:2008一O1—18) (上接第851頁) 1.6鏡檢 熒光染色組采用OLYMPUSBX41顯微鏡觀察,20X物鏡 計(jì)數(shù),40X物鏡觀察抗酸桿菌菌體形態(tài),在暗視野背景下抗酸 桿菌發(fā)出黃綠色熒光.抗酸染色組涂片采用普通光學(xué)顯微鏡 進(jìn)行檢測(cè).熒光染色和抗酸染色鏡檢時(shí)間和結(jié)果報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)均 以全國(guó)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程為準(zhǔn),以鏡檢1+以上者作

14、陽性 計(jì)算,對(duì)于1—3條/50個(gè)視野不作陽性計(jì)算,應(yīng)重留標(biāo)本復(fù) 杏. 2結(jié)果 240例肺結(jié)核病人痰液標(biāo)本抗酸染色和熒光染色檢測(cè)結(jié) 果見表1. 表1熒光染色和抗酸染色抗酸桿菌陽性檢測(cè)結(jié)果 3討論 近年來,診斷結(jié)核病仍主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)抗酸桿菌,雖 然分子生物學(xué)方法如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),脈沖電場(chǎng)凝膠電 泳(PEGE),IS6110一RFLP等方法檢測(cè)結(jié)核桿菌DNA,具 有快速,敏感等優(yōu)點(diǎn),但臨床診斷需要仍采用痰液涂片抗酸桿 菌檢測(cè),作為結(jié)核病最重要,最直接的依據(jù).常用的萋一尼抗 酸染色操作繁瑣,染色加熱時(shí)易產(chǎn)生氣溶膠;技術(shù)要求較高, 油鏡觀察視野范圍小,鏡檢時(shí)間長(zhǎng),

15、檢驗(yàn)人員易疲勞,同時(shí)對(duì) 于涂片中存在的少量細(xì)菌難以發(fā)現(xiàn).從表中資料結(jié)果顯示, 兩組結(jié)果中抗酸桿菌1+的陽性率,熒光染色組為15.8%,抗 酸染色組為9.6%,=5.56,P<0.05,差別有顯著性,而2+ 以上,均無顯著性差異,這表明熒光染色和抗酸染色陽性率差 異主要體現(xiàn)在1+(即含菌量較少的痰液標(biāo)本).對(duì)于那些病 變輕,排菌量少的肺結(jié)核的診斷具有重要價(jià)值,通過熒光染色 可明顯提高陽性檢測(cè)率,有利于臨床診斷. 熒光染色鏡檢的注意事項(xiàng):熒光染色后涂片應(yīng)在24h內(nèi) 鏡檢完成,遇需隔夜時(shí),置4~C保存,次Et完成鏡檢,否則熒光 減退,會(huì)造成陽性結(jié)果的不確定或者漏檢;熒光素染

16、色液應(yīng)放 置于棕色瓶中暗處存放,且時(shí)間不超過2周;有個(gè)別菌體40X 暗色背景難以區(qū)別的抗酸桿菌,一定要轉(zhuǎn)到IOOX油鏡下加以 確認(rèn).熒光染色鏡檢抗酸桿菌在暗色背景下會(huì)發(fā)出黃綠色熒 光,非常醒目,容易發(fā)現(xiàn),而且40X物鏡視野大,鏡檢速度快, 而抗酸染色I(xiàn)OOX油鏡視野較小,鏡檢較慢,因此,應(yīng)用金胺 “0”熒光染色法檢測(cè)抗酸桿菌是一種簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確方法,適合于 大批量標(biāo)本檢測(cè),值得在臨床上推廣. [參考文獻(xiàn)] [1]中國(guó)防癆協(xié)會(huì).結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程[J].中國(guó)防癆雜志, 1996,18(1):28—29. [2]KunimotoDY,PeppierMS,TalbotJ,eta1

17、.Analysisofmycobactefium aviumcomplexisolatesfrombloodsamplesofAIDSpatientsbypulsed — fieldgelelectrophoresis[J].JClinMicrobiol,2003,41(1):498 — 499. [3]WillamHB,KerryHL,RandallH,eta1.Identificationofacontami. natingmycobacteriumtuberculosisstrainwithatranspositionofan IS6110insertionelementresultinginanalteredspoligotype[J].JClin Microbiol,2001,39(3):1092—1096. (收稿日期:2007—10一l8)