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2019-2020年高三生物一輪復(fù)習(xí) 第四十二講 細(xì)胞工程學(xué)案 考綱要求 1．植物的組織培養(yǎng)（Ⅱ）。2.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克?。á瘢?.細(xì)胞融合與單克隆抗體（Ⅱ）。 知識梳理 一.植物細(xì)胞工程 1.細(xì)胞工程 （1）操作水平：細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。 （2）目的：按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。 2.植物細(xì)胞的全能性 （1）概念：具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能。 （2）原理：細(xì)胞內(nèi)含有本物種的全部遺傳信息。 （3）全能性表達(dá)條件：具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，處于離體狀態(tài)，提供一定的營養(yǎng)、激素和其他適宜外界條件。 3.植物組織培養(yǎng)技術(shù) （1）概念理解 ①培養(yǎng)對象：離體的植物組織、器官或細(xì)胞。 ②培養(yǎng)條件：無菌、人工配制的培養(yǎng)基、相關(guān)激素等人工控制條件。 ③培養(yǎng)結(jié)果：產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。 （2）操作流程 4.植物體細(xì)胞雜交技術(shù) （1）概念：將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。 （2）操作流程 （3）流程分析 ①過程a為去除細(xì)胞壁獲得具有活力的原生質(zhì)體，用到的酶是纖維素酶和果膠酶。 ②過程b是原生質(zhì)體的融合，其原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。 ③誘導(dǎo)b融合的兩種方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電激等；化學(xué)法一般用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑。 ④過程c是原生質(zhì)體融合后再生出細(xì)胞壁。 ⑤過程d是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其原理是細(xì)胞的全能性。 （4）意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。 5.植物細(xì)胞工程的應(yīng)用 （1）植物繁殖的新途徑 微型繁殖：保持優(yōu)良品種的遺傳特性，高效快速地實(shí)現(xiàn)大量繁殖 作物脫毒：利用分生區(qū)附近如莖尖組織培養(yǎng)獲得脫毒苗 人工種子：胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等包上人工種皮制成 （2）作物新品種的培育：單倍體育種、突變體的利用。 （3）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)：培養(yǎng)到愈傷組織階段。 深度思考 研究人員研究了馬鈴薯莖尖外植體大小對幼苗的成苗率和脫毒率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖，請思考。 （1）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，莖尖大小與脫毒率、成苗率關(guān)系如何？ （2）馬鈴薯脫毒培養(yǎng)中莖尖外植體的適宜大小為多少mm? 提示?。?）據(jù)圖可知，莖尖越小脫毒率越高，成苗率越低。 （2）當(dāng)莖尖大小為0.27 mm時(shí)脫毒率和成苗率相對都較高。 二.動(dòng)物細(xì)胞工程 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ) （1）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程 （2）培養(yǎng)條件 ①無菌、無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理，添加抗生素，定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。 ②營養(yǎng)：除正常的有機(jī)和無機(jī)營養(yǎng)外，加入血清、血漿等一些天然成分。 ③適宜的溫度和pH：溫度為36.50.5_℃（哺乳動(dòng)物），pH為7.2～7.4。 ④氣體環(huán)境：含95%空氣加5%CO2的混合氣體，其中后者的作用是維持培養(yǎng)液的pH。 （3）應(yīng)用：生物制品的生產(chǎn)、檢測有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。 2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物 （1）動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程 （2）原理：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。 （3）結(jié)果：產(chǎn)生新個(gè)體。 3.動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備 （1）動(dòng)物細(xì)胞融合 ①原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 ②融合方法：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。 ③意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能，也為制造單克隆抗體開辟了新途徑。 （2）單克隆抗體 ①制備過程 ②優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備。 ③用途：作為診斷試劑；用于治療疾病和運(yùn)載藥物。 要點(diǎn)精析 1.植物組織培養(yǎng)的過程 植物組織培養(yǎng)的條件 （1）離體：這是因?yàn)樵谏矬w內(nèi)基因的表達(dá)在空間和時(shí)間上具有選擇性。 （2）營養(yǎng)條件：水、無機(jī)鹽、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，以及激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。 （3）環(huán)境條件 ①適宜的溫度、pH——確保酶的活性。②無菌——這是因?yàn)榧?xì)菌等微生物繁殖快，消耗營養(yǎng)物質(zhì)多，同時(shí)產(chǎn)生有害的代謝產(chǎn)物，毒害植物細(xì)胞。③光照——這是因?yàn)楣庹沼欣诩?xì)胞內(nèi)葉綠素的形成和光合作用的進(jìn)行?！　　? 2.植物組織培養(yǎng)與植物體細(xì)胞雜交的比較 名稱 植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交 原理 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性 過程 應(yīng)用 ①繁殖 ②培育新品種　 ③生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種 易錯(cuò)警示！　 （1）植物體細(xì)胞雜交獲得的雜種細(xì)胞的類型有三種（以上圖為例）：AA型、BB型、AB型，符合要求的只有AB型，需要進(jìn)行篩選。 （2）雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：新的細(xì)胞壁的生成。 （3）雜種植株遺傳物質(zhì)的變化：雜種植株的變異類型屬于染色體變異，雜種植株的染色體數(shù)通常是兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目之和，雜種植株屬于異源多倍體。 3.比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合 比較 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 核移植 動(dòng)物細(xì)胞融合 原理 細(xì)胞增殖 動(dòng)物細(xì)胞核的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 過程 結(jié)果 相同分化程度的細(xì)胞群 與供體基本相同的個(gè)體 雜交細(xì)胞 關(guān)鍵環(huán)節(jié) 細(xì)胞增殖（分裂）、細(xì)胞癌變 核融合、細(xì)胞分化 人工誘導(dǎo)細(xì)胞膜融合 應(yīng)用 ①生產(chǎn)生物制品 ②基因工程　　 ③檢測有毒物質(zhì) ①加速良種繁育 ②保護(hù)瀕危物種 ③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 ④提供克隆器官、組織等 獲得雜種細(xì)胞，制 備細(xì)胞產(chǎn)物如單克 隆抗體 特別提醒　細(xì)胞貼壁和接觸抑制 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 4.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合（單克隆抗體的制備）的比較 植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合（單克隆抗體的制備） 原理 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖 融合前處理 酶解法（纖維素酶、果膠酶）去除細(xì)胞壁 注射特定抗原，免疫處理正常小鼠 促融方法 （1）物理法：離心、振動(dòng)、電激等； （2）化學(xué)法：聚乙二醇（PEG） （1）物理法、化學(xué)法：與植物細(xì)胞融合相同； （2）生物法：滅活的病毒 意義和用途 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍 （1）制備單克隆抗體； （2）診斷、治療、預(yù)防疾病 　　　 5.制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法及目的 項(xiàng)目 第一次篩選 第二次篩選 篩選原因 誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞 由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞 篩選方法 用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞（“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞）都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞（“B瘤”細(xì)胞）才能生長 用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群 篩選目的 得到雜交瘤細(xì)胞 得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 試題精粹 1.（xx湖北七市聯(lián)考，40）育種工作者利用不同的方法進(jìn)行了如下四組實(shí)驗(yàn)。請據(jù)圖回答問題。 （1）圖Ⅰ過程由番茄韌皮部細(xì)胞形成幼苗A的過程需要經(jīng)過________兩個(gè)關(guān)鍵步驟，該過程依據(jù)的原理是_________。 （2）植物組織培養(yǎng)除了需要提供一定的營養(yǎng)、________、溫度和光照外，還必須在________的條件下進(jìn)行。 （3）已知番茄的紅果（Y）對黃果（y）為顯性，少室（M）對多室（m）為顯性，控制兩對相對性狀的基因分別位于兩對同源染色體上。用紅果多室（Yymm）番茄植株的花粉進(jìn)行Ⅱ、Ⅲ有關(guān)實(shí)驗(yàn)，則Ⅱ過程中，從花粉形成幼苗B所進(jìn)行的細(xì)胞分裂方式是________。Ⅲ過程中植物體C的基因型為________（細(xì)胞A為兩兩融合細(xì)胞）。 （4）圖Ⅲ、Ⅳ過程中需要去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的______。 （5）在圖中Ⅳ過程中，經(jīng)過鑒別和篩選后，通常植物體D能表現(xiàn)出兩個(gè)親本的遺傳性狀，根本原因是__________。 2.（xx河北衡水中學(xué)調(diào)研）如圖為利用人成纖維細(xì)胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細(xì)胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，請回答： （1）圖示技術(shù)名稱為________，該技術(shù)的基礎(chǔ)是________技術(shù)。 （2）操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)在________代以內(nèi)；誘導(dǎo)融合運(yùn)用了________原理，該過程中區(qū)別于原生質(zhì)體融合的方法是用________處理。 （3）HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，其中需要加入________等天然物質(zhì)。 （4）培養(yǎng)時(shí)pH一般為________；操作中加入烏本苷的目的是______________。 （5）如表所示為雜交細(xì)胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4種酶（“＋”表示存在，“－”表示不存在），這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表判斷，編碼________酶的基因位于染色體2上。 雜交細(xì)胞 A B C 人類染色體 1 － ＋ ＋ 2 ＋ － ＋ 3 ＋ ＋ － 酶 m ＋ － ＋ n － ＋ ＋ p ＋ － ＋ q － ＋ ＋ 3.細(xì)胞工程根據(jù)操作對象的不同，可分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程兩大領(lǐng)域。近年來，細(xì)胞工程領(lǐng)域成果迭出，方興未艾。請回答下列相關(guān)問題。 （1）應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。植物組織培養(yǎng)技術(shù)所依據(jù)的生物學(xué)原理是________。欲利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育無病毒植株，選材時(shí)一般選取________。 （2）應(yīng)用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，能創(chuàng)造出常規(guī)雜交育種無法得到的作物新品種。在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前，必須先利用________酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。在進(jìn)行原生質(zhì)體間的融合時(shí)，常使用的誘導(dǎo)劑是________。 （3）應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，可以大量地生產(chǎn)各種抗病疫苗。在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)之前，需先用________酶處理組織塊，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所需氣體主要有________；另外，所用的合成培養(yǎng)基中通常需加入________等一些天然成分。 （4）應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，能為人類提供診治腫瘤的單克隆抗體。制備單克隆抗體過程中，經(jīng)選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行________和________，經(jīng)多次篩選可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。與常規(guī)的抗體相比，單克隆抗體具有的顯著特點(diǎn)是________。 4.（xx安徽銅陵期末）人工種子是人們模仿天然種子的結(jié)構(gòu)制造出來的生命有機(jī)體，它能像天然種子一樣萌發(fā)生長。人工種子的核心部分是胚狀體，其培育過程如圖所示。請回答下列有關(guān)問題。 （1）制作人工種子依據(jù)的原理是________；制作過程的關(guān)鍵是確保無菌操作，其原因是________________。 （2）②表示脫分化的過程，其實(shí)質(zhì)是________；③表示再分化的過程，其實(shí)質(zhì)是________。培養(yǎng)基中生長素和細(xì)胞分裂素的濃度、________、________影響②、③過程的進(jìn)行。 （3）從保證人工種子正常的生命力以及生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)上來看，人造種皮應(yīng)具有半透性（透水、透氣性）和________的特點(diǎn)。 （4）某二倍體植物的基因型為DdTt，利用花藥離體培養(yǎng)的方法，可培育成“花粉胚”，也可制成人工種子，這種種子萌發(fā)形成的個(gè)體稱為________，從生殖方式看屬于________生殖。 5.人的血清白蛋白在臨床上需求量很大，通常從人血中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對血液制品顧慮重重。如果應(yīng)用一定的生物工程技術(shù)，將人的血清白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中，利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。其過程大致如下： a．將人體血清白蛋白基因?qū)搿澳膛Ｅ咛ァ钡募?xì)胞中，形成細(xì)胞①； b．取出細(xì)胞①的細(xì)胞核，注入去核牛卵細(xì)胞中，形成細(xì)胞②； c．電脈沖刺激細(xì)胞②促使其形成早期胚胎； d．將胚胎移植到母牛的子宮內(nèi)，最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。 （1）人體血清白蛋白基因通?？梢詮幕蛭膸熘蝎@取，含有一種生物所有基因的文庫稱為________，獲得人體血清白蛋白基因后可以利用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)要用到一種特殊的________酶。當(dāng)受精卵分裂到囊胚期時(shí)，需要取囊胚的________細(xì)胞做DNA分析，進(jìn)行性別鑒定，以確保發(fā)育成熟的牛能分泌乳汁。 （2）實(shí)驗(yàn)過程b利用的技術(shù)是________，胚胎工程操作中終端的環(huán)節(jié)是________。 （3）該過程培養(yǎng)的牛被稱為克隆牛。與其相比，試管牛培育過程特有的生物技術(shù)是________。 （4）若將早期胚胎分離成若干個(gè)胚胎細(xì)胞，讓其分別發(fā)育成小牛，這些小牛的基因型________（填“相同”或“不同”），此項(xiàng)技術(shù)稱為________，在對囊胚階段的胚胎進(jìn)行操作時(shí)，需要特別注意的問題是________，否則會影響胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。 6.細(xì)胞融合技術(shù)有著廣泛應(yīng)用。下圖表示細(xì)胞融合的簡略過程，據(jù)圖回答相關(guān)問題。 （1）若a、b分別是基因型為yyRr和YYrr兩個(gè)玉米品種的花粉，且這兩對基因分別位于兩對同源染色體上?？茖W(xué)家分別將它們的花粉除去細(xì)胞壁，然后誘導(dǎo)其融合，再把這些融合細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，培育出了玉米新品種。 ①這兩個(gè)品種的花粉可用化學(xué)誘導(dǎo)劑________誘導(dǎo)融合，共可產(chǎn)生________種基因型的融合細(xì)胞（僅考慮兩兩融合），這些融合細(xì)胞經(jīng)過脫分化形成________，再經(jīng)培養(yǎng)可以得到________種不同于親本基因型的玉米新品種。 ②若想培育出基因型為yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr植株的花粉培養(yǎng)，再經(jīng)過________處理并篩選獲得，這種方法叫做________。 （2）若a、b表示番茄和馬鈴薯兩種植物的體細(xì)胞，請據(jù)圖回答問題。 ①在“番茄—馬鈴薯”雜種植株的培育過程中，運(yùn)用了植物細(xì)胞工程中的________技術(shù)，植物體細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是________。 ②a、b細(xì)胞融合之前，要用到的酶是________，酶處理后得到________。 （3）若a、b分別為骨髓瘤細(xì)胞和已免疫的B淋巴細(xì)胞，請據(jù)圖回答問題。 ①為了能充分發(fā)揮上述兩種細(xì)胞各自的特點(diǎn)，經(jīng)特殊處理，在促細(xì)胞融合因子的作用下，兩種細(xì)胞發(fā)生融合，形成圖中的d細(xì)胞，d細(xì)胞的特點(diǎn)是____________________。 由d細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較，具有_______________等特點(diǎn)。 ②下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，請用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來：________。 高考真題 1.（xx廣東理綜，29）鐵皮石斛是我國名貴中藥，生物堿是其有效成分之一，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖（簡稱PLBs，類似愈傷組織）生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下。 在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時(shí)間的變化如下圖所示，請回答下列問題。 （1）選用新生營養(yǎng)芽為外植體的原因是___________________，誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過程稱________。 （2）與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長的優(yōu)勢體現(xiàn)在________________，________________，________________。 （3）脫落酸（ABA）能提高生物堿含量，但會抑制PLBs的生長。若采用液體培養(yǎng)，推測添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。 同學(xué)們擬開展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案時(shí)探討了以下問題： ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)4個(gè)ABA處理組，1個(gè)空白對照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣：實(shí)驗(yàn)50 d完成，每10 d取樣，將樣品（PLBs）稱重（g/瓶）后再測定生物堿含量。如初始（第0天）數(shù)據(jù)已知，實(shí)驗(yàn)過程中還需測定的樣品數(shù)為________。 ③依所測定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時(shí)間：當(dāng)某3個(gè)樣品（重復(fù)樣）的________________________時(shí)，其對應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間是適宜培養(yǎng)時(shí)間。 2.（xx全國課標(biāo)Ⅰ，40）某研究者用抗原（A）分別免疫3只同種小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(jià)（能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)），結(jié)果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞（染色體數(shù)目40條），并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體數(shù)目60條）按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。 回答下列問題。 （1）制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過______次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠，理由是______________。 （2）細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有________________，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是_________。 （3）雜交瘤細(xì)胞中有________個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 （4）未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________。 3.（xx海南卷，31）單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV1）可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV1的單克隆抗體可快速檢測HSV1。 回答下列問題： （1）在制備抗HSV1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV1蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗________的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了________反應(yīng)，再從小鼠的________中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是______________。 （2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的_______________中使其增殖，再從______________中提取、純化獲得。 （3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識別這種HSV1蛋白，其原因是該抗體具有________________和________________等特性。 4.（xx.重慶卷.7）（10分）xx年埃博拉病在非洲蔓延，我國派出醫(yī)療隊(duì)首次在境外組建醫(yī)院，幫助治療埃博拉疫情。 （1）研究表明，埃博拉病毒侵入機(jī)體后，通過靶向感染、破壞吞噬細(xì)胞等，使其不能暴露病毒的＿＿＿＿＿，以致感染信息不能呈遞給＿＿＿＿＿，阻止正常激活細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答過程，導(dǎo)致機(jī)體對該病毒的＿＿＿＿免疫功能下降。因此，病毒在體內(nèi)快速增殖、致病。 （2）對志愿者接種埃博拉試驗(yàn)疫苗后，機(jī)體免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生相應(yīng)抗體，還能產(chǎn)生的免疫細(xì)胞有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 （3）用埃博拉病毒的某種蛋白免疫小鼠，通過＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞，用于生產(chǎn)單克隆抗體治療該病。 5.（xx.福建卷.33）【生物-現(xiàn)代生物科技專題】（10分） GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子。對損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖1所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請回答： （1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是。 （2）構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí)，需選擇圖1中的限制酶進(jìn)行酶切。 （3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：單個(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對篩選的載體進(jìn)行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示。圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。 （4）將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的 與提取的蛋白質(zhì)雜交。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時(shí)，需進(jìn)行培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)。