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課時(shí)規(guī)范練33　無菌操作技術(shù)實(shí)踐 非選擇題 1.(2018全國Ⅰ理綜)將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。 回答下列問題。 (1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制　　　　的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基。 (2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì),營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有　　　　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與合成的生物大分子有　　　　　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。 (3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是　　　　　,該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是　 　。 (4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果: 甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133。 乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。 有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是 　。 答案(1)細(xì)菌　選擇 (2)碳源、無機(jī)鹽　蛋白質(zhì)、核酸 (3)碘液　淀粉遇碘液顯藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解,形成透明圈 (4)乙同學(xué)的結(jié)果中,1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差 解析本題主要考查微生物的培養(yǎng)及計(jì)數(shù)方法。(1)鏈霉素可抑制細(xì)菌的生存,但真菌可以在含鏈霉素的培養(yǎng)基中生存,所以加入鏈霉素的培養(yǎng)基可用于篩選出真菌,屬于選擇培養(yǎng)基。(2)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等。蛋白質(zhì)和核酸都含氮元素,所以氮源進(jìn)入細(xì)胞后可用于合成蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)。(3)檢測淀粉所用的試劑是碘液,碘液遇碘變藍(lán)。如果某種微生物產(chǎn)生了淀粉酶,則在其菌落周圍就沒有淀粉存在,不再呈現(xiàn)藍(lán)色,而是出現(xiàn)透明圈。(4)計(jì)數(shù)時(shí)一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。乙同學(xué)1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊,可信度低。 2.有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}: (1)在篩選過程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以　　　　　　為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于　　　　　　培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時(shí),為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　　　。 (3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大小,分解圈大說明該菌株的降解能力　　　　。 (4)通常情況下,在微生物培養(yǎng)過程中,實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　　　。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈　　　　　附近進(jìn)行,以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。 答案(1)原油　選擇 (2)平板劃線法　稀釋涂布平板法 (3)強(qiáng) (4)干熱滅菌　高壓蒸汽滅菌　火焰 解析(1)在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基中,分解原油的細(xì)菌可以大量繁殖,而其他細(xì)菌不能生存。此種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。 (2)純化菌種常用平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (3)在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上,在菌落周圍的原油被分解而形成分解圈,分解圈越大,說明該菌株降解能力越強(qiáng)。 (4)實(shí)驗(yàn)室滅菌有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌,實(shí)驗(yàn)操作要在酒精燈火焰附近的無菌區(qū)進(jìn)行。 3.研究發(fā)現(xiàn)柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白質(zhì))均有抑菌作用,兩者的提取及應(yīng)用如圖所示。 (1)柚皮易焦糊,宜采用　　　　　　　法提取柚皮精油,該過程得到的糊狀液體可通過　　　　除去其中的固體雜質(zhì)。 (2)篩選乳酸菌A時(shí)可選用平板劃線法或　　　　　　　　　　　　　　接種。對新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是　　　　　　　　　　　　。實(shí)驗(yàn)前需對超凈工作臺進(jìn)行　　　　處理。 (3)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌A生長提供　　　　。電泳法純化乳酸菌素時(shí),若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì),則其分子量越大,電泳速度　　　　。 (4)抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí),在長滿致病菌的平板上,會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈?？赏ㄟ^測定透明圈的　　　　　　　　　　　　　　　來比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。 答案(1)壓榨　過濾 (2)稀釋涂布平板法　高壓蒸汽滅菌鍋　消毒 (3)氮源　越慢 (4)直徑(或大小) 解析柚皮精油宜采用壓榨法進(jìn)行提取,要除去其中雜質(zhì)可采用過濾法。培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌提供氮源。電泳法分離蛋白質(zhì)時(shí)相對分子質(zhì)量越大,電泳速度越慢,反之則越快。培養(yǎng)基菌落透明圈直徑越大,說明柚皮精油和乳酸菌的抑菌效果越好。 4.現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公,但是每年仍然不可避免地產(chǎn)生大量的廢紙。廢紙的主要成分是木質(zhì)纖維,人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源——乙醇。下圖是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工藝流程,請回答相關(guān)問題。 (1)自然界中①環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在　　　　　　　　　　　　　　的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以　　　　　　　為唯一碳源,并加入　　　　　　　的培養(yǎng)基上,篩選周圍有　　　　　　　的菌落。 (2)在如上所述的篩選過程中獲得了三個(gè)菌落,對它們分別培養(yǎng),并完成環(huán)節(jié)②,且三種等量酶液中酶的濃度相同,則你認(rèn)為三種酶液的活性　　　　　　　　　(填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”),可以通過　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　進(jìn)行定量測定。 (3)根據(jù)測定結(jié)果,①環(huán)節(jié)常選擇木霉,則②中獲得的酶是　　　　　　　酶。 (4)生產(chǎn)中可以滿足④環(huán)節(jié)的常見菌種是　　　　　　,為了確保獲得產(chǎn)物乙醇,⑤環(huán)節(jié)要注意　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案(1)富含纖維素(其他答案合理也可,如落葉較多等)　纖維素　剛果紅　透明圈 (2)不一定相同　對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖 (3)纖維素 (4)酵母菌　發(fā)酵裝置的密閉性(或保證無氧條件等) 解析 (1)富含纖維素的土壤中,含有大量以纖維素為碳源的纖維素分解菌。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素分解后,復(fù)合物無法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過此方法來篩選纖維素分解菌。(2)酶液中蛋白質(zhì)的濃度相同,酶的活性不一定相同,可通過分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖量是否相等來鑒定其活性是否相同。(3)木霉能產(chǎn)生纖維素酶,可以將纖維素分解。(4)在酒精發(fā)酵中常用的微生物是酵母菌,在接種過程中一定要避免雜菌污染。乙醇是酵母菌無氧發(fā)酵的產(chǎn)物,發(fā)酵過程中一定要保持無氧的環(huán)境。