《廣東省高三生物復習 第14章 第38講 微生物培養(yǎng)課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《廣東省高三生物復習 第14章 第38講 微生物培養(yǎng)課件（40頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、生物技術實踐生物技術實踐第第 講講微生物的利用(1)微生物的分離和培養(yǎng)(2)某種微生物數量的測定(3)培養(yǎng)基對微生物的選擇作用(4)利用微生物發(fā)酵來生產特定的產物以及微生物在其他方面的應用酶的應用應用(1)酶活力測定的一般原理和方法(2)酶在食品制造和洗滌等方面的應用生物技術在食品加工及其他方面的應用(1)植物的組織培養(yǎng)(2)蛋白質的提取和分離(3)PCR技術的基本操作和本章內容從命題形式來看，主要以非選擇題形式出現，并且試題范圍盡量覆蓋整個選修教材，知識的覆蓋面大。該部分重視考查學生的生物技術實踐能力，以及學生對生物技術中的操作步驟和技術要求的了解和運用。命題熱點如：以發(fā)酵食品為背景考查微生

2、物的分離、純化和培養(yǎng)過程以及微生物在食品加工所起的作用；結合食品制造和洗滌業(yè)考查酶的應用；將植物組織培養(yǎng)的有關知識與植物激素的應用相聯(lián)系，進行綜合考查；以環(huán)境污染(如某種有害物質的存在及量的多少)為背景考查微生物的生存條件和培養(yǎng)。一、微生物的培養(yǎng)與應用1.培養(yǎng)基(1)概念：根據微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。(2)種類：按物理性質劃分種類是否含凝固劑用途固體培養(yǎng)基 是(0.5%1%瓊脂)用于微生物的分離、計數等半固體培養(yǎng)基是(0.2%0.5%瓊脂)主要用于觀察微生物的運動、鑒定菌種等液體培養(yǎng)基否主要用于工業(yè)生產按化學性質劃分種類化學成分是否明確用途天然培養(yǎng)基否常用于工

3、業(yè)生產合成培養(yǎng)基是常用于微生物的分類、鑒定按培養(yǎng)基用途劃分種類用途原理制備方法例子選擇培養(yǎng)基從眾多微生物中分離所需的微生物依據某些微生物對某些物質的抗性而設計培養(yǎng)基中加入某種化學物質加入青霉素分離得到酵母菌等鑒別培養(yǎng)基鑒別不同種類微生物依據微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌(3)營養(yǎng)要求水、碳源、氮源、無機鹽等；pH、特殊營養(yǎng)物質；大多數微生物主要利用無機氮化合物作為氮源，如NH+4、NO-3，也可利用含氮有機物作為氮源。少數固氮微生物可利用N2作為氮源，如根瘤菌、圓褐固氮菌。對硝化

4、細菌來說，NH3和NO-2同時具有氮源和能源的作用。其他微生物，N2、NH+4、NO-3通常不作為能源，對于異養(yǎng)型微生物而言，含有C、H、O、N的有機物同時具有碳源、氮源與能源的功能。2.無菌技術消毒用較溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。(1)消毒方法消毒種類主要方法應用范圍煮沸法100 煮沸56 min日常生活的用品巴氏消毒法7075 煮30 min或80 煮15 min牛奶、啤酒、果醬、醬油等不宜進行高溫滅菌的液體化學藥劑消毒用體積75%的乙醇、碘酒涂抹、氯氣消毒水源用于皮膚

5、、傷口、動植物組織表面消毒，空氣、手術器械或玻璃器皿等紫外線消毒30W紫外燈照射30 min接種室、超凈工作臺(2)滅菌方法消毒種類主要方法應用范圍灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒接種工具如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，接種過程中試管口等干熱滅菌電熱鼓風干燥箱160170 加熱12h玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品高壓蒸汽 滅菌121 維持1530 min培養(yǎng)基及多種器材、物品3.實驗操作(1)配制培養(yǎng)基計算稱量溶化滅菌倒平板(2)純化大腸桿菌平板劃線：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數次劃線后培養(yǎng)，

6、可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。步驟:注意事項：每次劃完后須燒一次接種環(huán)；使得每次劃線的菌種來源于上次的劃線，逐步稀釋。涂布平板操作：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。(3)菌種培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)基倒置放入37 的恒溫箱中培養(yǎng)24小時。(4)實驗結果觀察觀察不同的菌落，看顏色、菌落的形態(tài)等。(5)菌株的保存方法臨時保藏：斜面培養(yǎng)基，4 保存；長期保存：甘油管藏法，-20 冷凍箱中保存。二、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數1.篩選菌株人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。2.統(tǒng)

7、計菌落數目(1)依據：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。為保證結果準確，一般選擇菌落數在30300的平板進行計數。(2)活菌計數法稀釋涂布平板法：統(tǒng)計活菌的數目；挑選菌落數在30300的平板進行計數。注：統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目低。計算公式：每克樣品中的菌落數=(CV)M(3)顯微鏡直接計數法測定微生物數量的常用方法。(4)過濾膜法如飲用水中大腸桿菌的數目測定。三、分解纖維素的微生物的分離1.原理：(1)剛果紅可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡

8、萄糖發(fā)生這種反應。(2)纖維素分解菌能產生纖維素酶分解纖維素，從而使菌落周圍形成透明圈。2.流程：土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產生透明圈的菌落。3.注意：(1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，因培養(yǎng)基中無凝固劑，利用液體培養(yǎng)基以增加纖維素分解菌的濃度。(2)為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需要進行發(fā)酵產纖維素酶的實驗。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。1.自養(yǎng)微生物和異養(yǎng)微生物的營養(yǎng)比較營養(yǎng)型微生物碳源氮源生長因子舉例自養(yǎng)型微生物CO2、NaHCO3NH3

9、、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細菌異養(yǎng)型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白質等有些種類需要乳酸菌2.平板劃線和稀釋涂布平板法注意事項（1）平板劃線法：操作簡單，但是單菌落不易分離。無菌操作：操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進行劃線，以免接種溫度過高，殺死菌種。由于劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(2)稀釋涂布平板法：操作復雜，但是單菌落易分離。無菌操作：涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。應從

10、操作的各個環(huán)節(jié)保證“無菌”。每個稀釋度下涂布三個平板作為重復組，不同稀釋濃度下涂布的平板形成對照組，且每個平板所用的菌液不超過0.1毫升。統(tǒng)計實驗結果時，注意選取菌落數介于30300個的平板進行計數。 關于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是關于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是()A.同一種物質不可能既作碳源又作氮源同一種物質不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量凡是碳源都能提供能量C.除水以外的無機物僅提供無機鹽除水以外的無機物僅提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量無機氮源也能提供能量D 對異養(yǎng)微生物來說，含對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源。的化合物既是碳源又是氮源。CO2是

11、光能自養(yǎng)細是光能自養(yǎng)細菌的碳源，但不能提供能量。菌的碳源，但不能提供能量。CO2和和N2是無機物，是無機物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細菌所利用的也是微生物的碳源和氮源。硝化細菌所利用的氮源是氨，同時氨也為硝化細菌提供用于化能氮源是氨，同時氨也為硝化細菌提供用于化能合成作用的能源。合成作用的能源。下表是對四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述。正確的一組是()硝化細菌乳酸菌根瘤菌衣藻A 能源NH3乳酸N2光能B 碳源CO2糖類等糖類等CO2C 氮源NH3N2N2NO-3D代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)厭氧型自養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型B本題綜合考查了不同微生物的代謝類型及營養(yǎng)要求。從能源來看，乳酸菌

12、需要糖類等有機物供能；從氮源來看，乳酸菌需要NH+4、NO-3；從代謝類型看，根瘤菌為異養(yǎng)需氧型；從碳源看，硝化細菌與衣藻需要CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖類等有機物。有關倒平板操作錯誤的是()A.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B.使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上D.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置整個倒平板過程要防止外來雜菌的整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此，滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁，打入侵，因此，滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰，培養(yǎng)皿打開一開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰，培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不能將培養(yǎng)皿完全打開，

13、條稍大于瓶口的縫隙，不能將培養(yǎng)皿完全打開，等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置。等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置。C有關稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是()A.首先將菌懸液進行一系列的梯度稀釋B.然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C.適宜條件下培養(yǎng)D.結果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落D稀釋涂布平板是將菌懸液進行一系列的梯度稀釋。然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有在稀釋度足夠高的菌懸液中，聚集在一起的微生物才能被分散成單個細胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。 【真題真題1】(08廣東廣東)苯酚是工業(yè)生產排放苯酚是工業(yè)生產排放的有毒污染物

14、質，自然界中存在著降解苯酚的的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，為土壤樣品。請回答下列要步驟如圖所示，為土壤樣品。請回答下列問題：問題：(1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入作為碳源，中不同濃度碳源的培養(yǎng)基(A.影響；B.不影響)細菌的數量，如果要測定中活細菌數量，常采用。苯酚苯酚A平板菌落計數平板菌落計數(活菌計數或菌落計數活菌計數或

15、菌落計數)法法(2)為對照，微生物在中不生長，在中生長，與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于.；使用法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)? .。含除苯酚外的其他碳源，以苯酚含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作為惟一碳源作為惟一碳源避免培養(yǎng)過程產生的水分影響避免培養(yǎng)過程產生的水分影響微生物的生長微生物的生長或平板劃線分離或平板劃線分離)平板分離平板分離(稀釋涂布平板稀釋涂布平板(3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?.。(4)實驗過程中如何防止其他微生物的污染? .。用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，測定培養(yǎng)液中苯酚含量，一定時間后，測定培養(yǎng)液中苯酚含量培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程無菌操作接種過程無菌操作 【解析】題目中所篩選的細菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基篩選，含除苯酚外其他碳源的培養(yǎng)基作為對照。培養(yǎng)液中苯酚濃度下降的速度可反映該菌對苯酚的降解能力，嚴格滅菌、無菌操作可有效防止試驗過程中的雜菌污染。