《高中生物 專題二 課題2 土壤中分解尿素的細菌的分離與記數(shù)課件 新人教版選修1.ppt》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物 專題二 課題2 土壤中分解尿素的細菌的分離與記數(shù)課件 新人教版選修1.ppt（36頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

稀釋涂布平板法 注意 移液管需要經(jīng)過滅菌 操作時 試管口和移液管離火焰1 2cm處 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進行無菌操作 問題討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進行無菌操作 應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證 無菌 例如 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周圍等等 問題討論 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 菌種的保存 1 臨時保藏 接種到固體斜面培養(yǎng)基 菌落長成后置于4 冰箱保存 2 長期保存 甘油冷凍管藏法 微生物的實驗室培養(yǎng) DAT 四 實驗操作成果評價 一 培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 2d后無菌落生長 說明培養(yǎng)基的制備是成功的 否則需要重新制備 二 接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色 形狀 大小基本一致 并符合大腸桿菌菌落的特點 則說明接種操作是符合要求的 如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落 則說明接種過程中 無菌操作還未達到要求 需要分析原因 再次練習 三 是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同 及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點 并能觀察到其他一些細微的變化 這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣 兩個主要目的 1 從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌 2 統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌 在微生物學中 將允許特定種類的微生物生長 同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 背景知識 測定微生物數(shù)量的方法 1 直接計數(shù)法 最常用顯微鏡直接計數(shù)法 測定微生物數(shù)量的方法 背景知識 1 直接計數(shù)法 最常用顯微鏡直接計數(shù)法 先將待測樣品制成懸液 然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數(shù) 根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來計算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù) 測定微生物數(shù)量的方法 背景知識 優(yōu)點 設(shè)備簡單 能觀察微生物的形態(tài)特征 優(yōu)點 設(shè)備簡單 能觀察微生物的形態(tài)特征 缺點 難以計數(shù)微小量多的細菌 一般用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細胞菌體的計數(shù) 2 間接計數(shù)法 最常用稀釋平板計數(shù)法 二 統(tǒng)計菌落數(shù)目 二 統(tǒng)計菌落數(shù)目 統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù) 當樣品的稀釋度足夠高時 培養(yǎng)基表面生長的一個菌落 來源于樣品稀釋液中的一個活菌 因此 恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵 為了保證結(jié)果準確 通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上 培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30 300的平板進行計數(shù) 每克樣品中的菌株數(shù) C V M C 某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V 涂布平板時所用的稀釋液的體積 ml M 稀釋倍數(shù) 統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低 這是因為當兩個或多個細胞連在一起時 平板上觀察到的只是一個菌落 因此結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示 注意 兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù) 在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中 得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果 1 第一位同學在該濃度下涂布了一個平板 統(tǒng)計的菌落數(shù)為230 2 第二位同學在該深度下涂布了三個平板 統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21 212和256 該同學以這三個平板菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計結(jié)果 實例1 你認為哪位同學的結(jié)果更接近真實值 這兩位同學的實驗需要改進嗎 如果需要 如何改進 你認為哪位同學的結(jié)果更接近真實值 這兩位同學的實驗需要改進嗎 如果需要 如何改進 第一位同學只涂布了一個平板 沒有設(shè)置重復組 因此結(jié)果不具有說服力 第二位同學考慮到設(shè)置重復組的問題 涂布了3個平板 但是 其中1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差太遠 說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤 因此 不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值 因此 這兩位同學的實驗需要改進 在設(shè)計實驗時 一定要涂布至少3個平板 作為重復組 才能增強實驗的說服力與準確性 在分析實驗結(jié)果時 一定要考慮所設(shè)置的重復組的結(jié)果是否一致 結(jié)果不一致 意味著操作有誤 需要重新實驗 說明設(shè)置重復組的重要性 在做本課題的實驗時 A同學從對應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落 但是 其它同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落 其他同學認為A同學的結(jié)果有問題 他們分析可能是A同學的培養(yǎng)基被雜菌污染了 或者培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì) 因而導致不能分解尿素的細菌也能在該培養(yǎng)基上生長 實例2 但是 A同學確信自己的實驗操作準確無誤 與其他同學的結(jié)果之所以不相同 是因為自己所選用的土壤樣品不同 但是 A同學在設(shè)計實驗的時候并沒有設(shè)置對照 因而此時也拿不出令同學們信服的證據(jù) 你能通過設(shè)置對照 幫助A同學排除上述兩個可能影響實驗結(jié)果的因素嗎 一是由于土樣不同 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤 究竟是哪個原因 可以通過實驗來證明 一種方案 可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗 如果結(jié)果與A同學一致 則證明A無誤 如果結(jié)果不同 則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題 另一種方案 將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng) 作為空白對照 以證明培養(yǎng)基是否受到污染 通過這個事例可以看出 實驗結(jié)果要有說服力 對照的設(shè)置是必不可少的 實驗設(shè)計 土壤中分解尿素的細菌的分離與記數(shù) 微生物的實驗室培養(yǎng) DAT