《專題八 生物技術(shù)實(shí)踐 第1講微生物的利用和生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《專題八 生物技術(shù)實(shí)踐 第1講微生物的利用和生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用（9頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、專題八 生物技術(shù)實(shí)踐 第1講 微生物的利用和生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用 (時(shí)間：50分鐘　滿分：100分) 非選擇題(共100分) 1．(8分)(2011·濟(jì)南一模，47)白僵菌高孢粉是國家林業(yè)局推廣的高效生物殺蟲劑之一，應(yīng)用于多種林木和農(nóng)作物害蟲的防治。白僵菌分生孢子附著在寄主表皮、氣孔或消化道上，遇適宜條件開始萌發(fā)，生出芽管。同時(shí)產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶、幾丁質(zhì)酶等溶解昆蟲的表皮，通過芽管入侵蟲體，在蟲體內(nèi)生長繁殖，消耗寄主體內(nèi)養(yǎng)分，產(chǎn)生各種毒素，形成大量菌絲和孢子，布滿蟲體全身。請回答下面的問題： (1)從自然菌樣中篩選較理想生產(chǎn)用菌種的一般步驟是：采集菌樣―→富集培 養(yǎng)

2、―→________―→性能測定。白僵菌的菌樣應(yīng)從________處采集。 (2)分離白僵菌菌種的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。在配制白僵菌培養(yǎng)基時(shí)常加入蔗糖、 硫酸銨、硝酸鉀等成分，蔗糖屬于________營養(yǎng)物質(zhì)。 (3)白僵菌純培養(yǎng)常用的接種方法是________和________。 (4)分離與培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和接種工具都要進(jìn)行________處理，利用高溫可以使微生 物的________等物質(zhì)發(fā)生變性。 解析　(2)選擇培養(yǎng)基用于選擇分離菌種。蔗糖屬于微生物的碳源。(4)微生物分離培養(yǎng)過 程中，培養(yǎng)基、接種工具都要進(jìn)行滅菌處理，其原理是高溫使蛋白質(zhì)、核酸變性而使細(xì)

3、 胞失去活性。 答案　(1)純種分離　感病昆蟲　(2)選擇　碳源　(3)平板劃線法　稀釋涂布平板法(或稀 釋混合平板法)　(4)滅菌　蛋白質(zhì)和核酸 2．(10分)(2011·濰坊質(zhì)檢)腐乳是我國古代勞動人民創(chuàng)造出的一種經(jīng)過微生物發(fā)酵的大豆 食品。下面是腐乳制作的流程示意圖： (1)現(xiàn)代科學(xué)研究表明，多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉 是一種________狀真菌。 (2)腐乳制作的原理是______________________________________________________。 (3)傳統(tǒng)的制作過程中，豆腐塊上生長的毛霉來自____

4、_____________________________。 而現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格的無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，這樣可以 ________________________________________________________________________。 (4)加鹽的作用是________和________。 (5)鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的，鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱 酒等，含量一般控制在12%左右，加酒的作用是________。 解析　豆腐發(fā)酵有多種微生物參與，其中毛霉起主要作用，毛霉是一種絲狀真菌。傳統(tǒng) 制作中，豆腐上的毛

5、霉來自空氣中的毛霉孢子；現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)是在無菌條件下，將優(yōu)良 的毛霉菌種接種在豆腐上，避免了其他菌種污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量。 答案　(1)絲　(2)毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和 氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸　(3)空氣中的毛霉孢子　避免其他菌種的 污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量　(4)析出豆腐中的水分，使豆腐變硬　抑制微生物的生長，避免 豆腐變質(zhì)　(5)可以抑制微生物的生長，能使腐乳具有獨(dú)特的香味 3．(10分)下圖所示是果酒和果醋制作的實(shí)驗(yàn)流程以及某同學(xué)設(shè)計(jì)的果酒和果醋的發(fā)酵裝置。根據(jù)圖示回答下列問題。 (1)完成圖1中的制作流程。 (2)沖洗

6、的主要目的是________，沖洗應(yīng)特別注意不能________，以防止菌種的流失。 (3)圖2裝置中的充氣口在________過程中要關(guān)閉，某同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)為了密閉裝置特意將 瓶塞使勁塞緊，并將充氣口和排氣口用夾子夾緊，以便于發(fā)酵。但第二天觀察時(shí)，發(fā)現(xiàn) 瓶塞松了，他不明白其中的原因，請幫助解釋說明其原因。 ____________________________________________________________________________ ________________________________________________________________

7、___________。 (4)在醋酸發(fā)酵時(shí)，排氣口排出的氣體的來源是____________________________________ ___________________________________________________________________________。 (5)若在果汁中含有醋酸菌，在酒精發(fā)酵旺盛時(shí)期，醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋 酸？說明理由。_______________________________________________________________ __________________________________

8、______________________________________。 解析　本題主要考查了果酒、果醋制作的基本過程和原理。因酵母菌是兼性厭氧菌，在 發(fā)酵初期需要氧氣，進(jìn)行大量繁殖，等酵母菌繁殖到一定數(shù)量時(shí)，關(guān)閉充氣口，讓其進(jìn) 行無氧呼吸；酵母菌無氧呼吸除產(chǎn)生酒精外，還產(chǎn)生CO2，所以瓶塞會松；醋酸菌是需 氧型細(xì)菌，醋酸發(fā)酵過程中，充氣口要連接充氣泵不停地充氣，排氣口則不停地排氣， 排出的氣體成分不僅有空氣，還有醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生的CO2；酒精發(fā)酵與醋酸發(fā)酵的 條件不同，酒精發(fā)酵時(shí)是無氧環(huán)境，而在無氧狀態(tài)下，醋酸菌受到抑制。 答案　(1)醋酸發(fā)酵　(2)洗去浮塵　反復(fù)沖洗

9、　(3)酒精發(fā)酵　酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生 的二氧化碳使瓶中氣體壓強(qiáng)增大(答細(xì)胞呼吸或有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳不可)　(4)剩余的 空氣、醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生的二氧化碳　(5)不能。因?yàn)榫凭l(fā)酵時(shí)缺氧，會抑制醋酸菌 的生長，醋酸菌的發(fā)酵條件是氧氣充足 4．(12分)酵母菌是一種真菌，與人們的日常生活密切相關(guān)，也是現(xiàn)代生物技術(shù)研究中常用的模式生物。果酒、面包的制作需要酵母菌，酵母菌可以用液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)液)來培養(yǎng)，培養(yǎng)液中酵母菌種群的增長情況與發(fā)酵食品的制作有密切關(guān)系。 (1)土壤中富含各種微生物，將土壤浸出液接種到特定培養(yǎng)基上，可得到酵母菌。這一過 程叫做________；為提高果酒的品質(zhì)

10、，發(fā)酵時(shí)常采用人工培養(yǎng)的純凈菌種。實(shí)驗(yàn)室中獲 取純凈菌種的方法有________。 (2)果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用________來檢驗(yàn)，在酸性條件下，該物質(zhì)與酒精 反應(yīng)呈________色。 (3)突變菌往往帶有一些特殊的基因。在獲得這些基因的過程中，PCR技術(shù)相當(dāng)重要。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中加入引物的作用是________________________________________________， 加入DNA聚合酶的作用是__________________________________________________。 (4)酵母細(xì)胞固定化可大大提高生產(chǎn)效率。固

11、定酵母細(xì)胞時(shí)首先需要將干酵母放入 ________中活化，若制得的凝膠珠顏色過淺，可能是因?yàn)開__________________________ ___________________________________________________________________________。 解析　從近幾年的高考看，在有限的題量中，命題往往以一個(gè)中心事例為切入點(diǎn)，綜合 考查幾項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用。本題以酵母菌為主線，綜合考查了酵母菌的分離培養(yǎng)、酒精發(fā)酵、 PCR技術(shù)、酵母細(xì)胞固定化技術(shù)等內(nèi)容。第(1)小題考查了微生物的分離技術(shù)和接種方法。 在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要

12、的微生物的生長，促進(jìn)需要的微生物的生 長，目的是從眾多微生物中分離出所需要的微生物。微生物的純化培養(yǎng)(兩種接種方法) 是平板劃線法和稀釋涂布平板法。第(2)小題考查發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生的鑒定方法。發(fā) 酵后取樣，可通過嗅味和品嘗進(jìn)行初步鑒定，用重鉻酸鉀檢驗(yàn)酒精的存在，其基本原理 是酒精可使重鉻酸鉀的濃硫酸溶液顏色由橙色變?yōu)榛揖G色。第(3)小題考查PCR技術(shù)的 基礎(chǔ)知識。PCR技術(shù)中的引物可以是RNA或單鏈DNA分子片段，PCR技術(shù)需要設(shè)計(jì) 兩種引物，分別與模板DNA兩條鏈相結(jié)合，使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連 接脫氧核苷酸。DNA聚合酶催化合成DNA子鏈。第(4)小題，在缺

13、水的狀態(tài)下，微生物 會處于休眠狀態(tài)?；罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。剛形成 的凝膠珠應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。觀察凝膠珠的顏色和 形狀：如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細(xì) 胞數(shù)目較少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉的濃度偏高，制作 失敗，需要再作嘗試。 答案　(1)酵母菌的分離　平板劃線法和稀釋涂布平板法 (2)重鉻酸鉀　灰綠　(3)使 DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸　催化DNA子鏈的合成　(4)蒸餾 水　海藻酸鈉濃度過低 5．(8分)圖1為胡蘿卜素粗品

14、鑒定裝置示意圖，圖2為葉 綠體中的色素分離裝置示意圖，請據(jù)圖回答下列問題。 (1)圖1中b的名稱是______；a的作用是________，e為 ________，對于e實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意________，f為________， 常用________，如果層析液沒及e會導(dǎo)致______________________________________。 (2)請指出圖2的三處錯(cuò)誤____________________________________________________。 解析　對胡蘿卜素提取粗品進(jìn)行鑒定采用的是紙層析法，其原理是色素在濾紙上的運(yùn)動 速度不同，從而使濾液各成分

15、分開。因?qū)游鲆阂讚]發(fā)，故應(yīng)在色譜容器上方用玻璃蓋嚴(yán)。 在進(jìn)行點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)注意點(diǎn)樣要快速細(xì)致，并保持濾紙干燥。葉綠體色素分離過程中，層 析液不得超過濾液細(xì)線，否則點(diǎn)樣處的有機(jī)成分會溶于層析液中。 答案　(1)色譜容器　防止層析液揮發(fā)　樣品原點(diǎn)　點(diǎn)樣應(yīng)該快速細(xì)致并保持濾紙干燥　 溶劑(層析液)　石油醚　胡蘿卜素溶解在層析液中，致使鑒定失敗　(2)①未蓋培養(yǎng)皿蓋； ②層析液太多；③層析液沒及了濾液細(xì)線 6．(12分)(2010·全國新課標(biāo))下列是與芳香油提取相關(guān)的問題，請回答問題。 (1)玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取，其理由是玫瑰精油具有____________的性質(zhì)。蒸 餾時(shí)收集的

16、蒸餾液________(是、不是)純的玫瑰精油，原因是______________________。 (2)當(dāng)蒸餾瓶中的水和原料量一定時(shí)，蒸餾過程中，影響精油提取量的主要因素有蒸餾時(shí) 間和________。當(dāng)原料量等其他條件一定時(shí)，提取量隨蒸餾時(shí)間的變化趨勢是 ________________________________________________________________________。 (3)如果蒸餾過程中不進(jìn)行冷卻，則精油提取量會________________________________， 原因是______________________________

17、________________________________________ ___________________________________________________________________________。 (4)密封不嚴(yán)的瓶裝玫瑰精油保存時(shí)最好存放在溫度________ 的地方，目的是________________。 (5)某植物花中精油的相對含量隨花的不同生長發(fā)育時(shí)期的變 化趨勢如圖所示。提取精油時(shí)采摘花的最合適時(shí)間為 ________天左右。 (6)從薄荷葉中提取薄荷油時(shí)________(能、不能)采用從玫瑰花 中提取玫瑰精油的方法，理由是_

18、______________________________________________。 解析　(1)由于玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定(耐一定程度高溫)、易揮發(fā)(水蒸氣可以將精油攜 帶出來)、難溶于水(冷卻后油水會重新分層)，所以玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取。 (2)當(dāng)水和原料量一定時(shí)，影響精油提取量的主要因素有蒸餾時(shí)間和蒸餾溫度，在一定的 時(shí)間內(nèi)隨著蒸餾時(shí)間的延長提取量不斷增加，一定時(shí)間后不再增加。如果蒸餾溫度過高， 提取量也會減少。(3)如果蒸餾過程中不進(jìn)行冷卻，部分精油會隨水蒸氣揮發(fā)，則精油提 取量會下降。(4)玫瑰精油具有揮發(fā)性，瓶裝精油時(shí)若密封不嚴(yán)，則需要低溫保存，以減

19、 少揮發(fā)。(5)分析圖示可知，在該植物花的蓓蕾期與開放期之間(即a時(shí)期)精油含量最高。 (6)由于薄荷油與玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)相似，易揮發(fā)、難溶于水、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，故可以 用水蒸氣蒸餾法提取。 答案　(1)易揮發(fā)、難溶于水、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定　不是　玫瑰精油隨水蒸氣一起蒸餾出來， 所得到的是油水混合物　(2)蒸餾溫度　在一定的時(shí)間內(nèi)提取量隨蒸餾時(shí)間的延長而增 加，一定時(shí)間后提取量不再增加　(3)下降　部分精油會隨水蒸氣揮發(fā)而流失　(4)較低　 減少揮發(fā)(或防止揮發(fā))　(5)a　(6)能　薄荷油與玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)相似 7．(12分)生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠

20、減緩人類對化學(xué)燃料的消耗?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油(如下圖)。 (1)用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，宜選用________、________方法從油料作物中 提取。 (2)篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供 ________，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是________法。 (3)測定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用________法直接計(jì)數(shù)；從微生物M分離提取的脂 肪酶通常需要檢測________，以確定其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用 ________技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。 (4

21、)若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化的________技術(shù)。 解析　(1)因?yàn)橹参镉筒灰讚]發(fā)，不能選用蒸餾法，可以用壓榨法、萃取法從油料作物中 提取。(2)微生物的生長需要水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為 微生物生長提供碳源。分析灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法 的特點(diǎn)可知，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是高壓蒸汽滅菌法。(3)測定培養(yǎng)液中微生物的 數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)。提取的脂肪酶在應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)之前，要 先檢測其活性，以確定其應(yīng)用價(jià)值。固定化酶技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，降低了生產(chǎn) 成本。(4)在應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增

22、DNA片段時(shí)，DNA合成(延伸)時(shí)溫度要控制在72 ℃， 需要具有較強(qiáng)的耐熱性的DNA聚合酶催化。 答案　(1)壓榨　萃取(注：兩空順序無先后)　(2)碳源　高壓蒸汽滅菌　(3)顯微鏡直接計(jì) 數(shù)　酶活性(或酶活力)　固定化酶(或固定化細(xì)胞)　(4)PCR(或多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，聚合酶 鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 8．(8分)(2010·重慶理綜)炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過實(shí)驗(yàn)確診。 (1)細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。 (2)細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程如圖所示 ①對配

23、制的液體培養(yǎng)基等需采取________方法滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為 ________(填“無機(jī)碳”或“有機(jī)碳”)。 ②挑選可疑菌落制片后，用________觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。 ③接種可疑菌后，35 ℃培養(yǎng)24 h，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是________________。對照 組試管中應(yīng)加入________，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6 h后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比 對照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。 ④對排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，與產(chǎn) 生抗體相關(guān)的細(xì)胞除T細(xì)胞、B細(xì)

24、胞外，還有________。 解析　(2)①微生物的培養(yǎng)基配制后常用高壓蒸汽法滅菌；由于炭疽桿菌是異養(yǎng)型微生 物，培養(yǎng)基中應(yīng)加有機(jī)碳作碳源。②炭疽桿菌呈竹節(jié)狀排列，需借助顯微鏡觀察。③接 種培養(yǎng)后，液體培養(yǎng)基由澄清變渾濁，應(yīng)是炭疽桿菌大量繁殖的結(jié)果；實(shí)驗(yàn)組與對照組 的設(shè)置應(yīng)遵循單一變量原則和等量原則，實(shí)驗(yàn)組加入生理鹽水配制的澄清噬菌體液，對 照組應(yīng)加入等量的生理鹽水；若疑似患者被炭疽桿菌感染，則培養(yǎng)6 h后，實(shí)驗(yàn)組中的 炭疽桿菌由于噬菌體侵染而大量裂解死亡，渾濁度會明顯低于對照組。④接種疫苗后， 機(jī)體通過體液免疫產(chǎn)生抗體，與此相關(guān)的細(xì)胞有吞噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和效應(yīng)B(漿)

25、細(xì)胞。 答案　(2)①高壓蒸汽(98 kPa蒸汽)　有機(jī)碳?、陲@微鏡　③細(xì)菌大量繁殖　等量生理鹽 水　低?、芡淌杉?xì)胞、效應(yīng)B(漿)細(xì)胞 9．(8分)(2011·濟(jì)南二模，34)生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的菌種主要來自土壤，從土壤中分離微生物的實(shí)驗(yàn)流程如下： 土壤取樣―→選擇培養(yǎng)―→梯度稀釋―→鑒別培養(yǎng)。 請回答下列有關(guān)問題： (1)將土壤浸出液接種到特定培養(yǎng)基上，可以將酵母菌從混雜的微生物群體中分離出來， 獲得純種酵母菌，這一過程叫做________。在培養(yǎng)酵母菌的過程中，對培養(yǎng)基、接種環(huán) 常采用的滅菌方法分別是________________。 (2)在使用酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)酒精的

26、過程中，影響酵母菌酒精發(fā)酵的主要因素有_________， 常使用________的方法從發(fā)酵液中提取純酒精。 (3)從土壤中分離纖維素分解菌，最好選擇在________環(huán)境中采集土樣，所選擇的培養(yǎng)基 應(yīng)以________作為唯一碳源。 (4)纖維素分解菌能夠合成纖維素酶，為了使纖維素酶反復(fù)使用，可以對纖維素酶進(jìn)行 ________處理，處理的方法有吸附法、共價(jià)鍵結(jié)合法和________法。 解析　(1)在微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)常用灼燒滅菌。(2) 溫度、pH影響酶的活性，氧氣濃度影響發(fā)酵產(chǎn)物。因酒精沸點(diǎn)較低，故可用蒸餾法對酒 精進(jìn)行提純。(3)纖維素

27、分解菌生活在富含纖維素的環(huán)境中，分離所用的培養(yǎng)基應(yīng)以纖維 素作為唯一碳源，以抑制以其他有機(jī)碳為碳源的菌類生長。(4)對酶進(jìn)行固定化處理可以 使酶重復(fù)使用，提高利用率。 答案　(1)純培養(yǎng)　高壓蒸汽滅菌、灼燒　(2)溫度、pH、氧氣濃度等　蒸餾　(3)富含纖 維素的　纖維素　(4)固定化　包埋 10．(12分)自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測定。下面是對大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測定的實(shí)驗(yàn)，請回答有關(guān)問題。步驟如下： (1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。 (2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用____

28、____________(平板劃線法、稀釋混合平板法、 稀釋涂布平板法)接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結(jié)果分析： ①測定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正 確可信的是 (　　)。 A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23 B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是22和26，取平均值24 C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26 D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25 ②一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升 樣品中的大腸桿菌數(shù)是(

29、涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2 mL)________。 ③用這種方法測定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量________，因?yàn)開_______________ ________________________________________________________。 ④某同學(xué)在測定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否據(jù)此肯 定該大腸桿菌的品系被污染了？為什么？______________________________________。 解析　平板劃線分離法是指由接種環(huán)以無菌操作蘸取少許待分離的材料，在無菌平板表 面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形

30、式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的 增加而減少，并逐步分散開來，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。稀釋倒平板法又 分為稀釋涂布平板法和稀釋混合平板法。稀釋涂布平板法就是將稀釋后的菌液分別涂布 在固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)；稀釋混合平板法就是將不同濃度的稀釋液與已溶化并冷 卻至45 ℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制 成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間后即可出現(xiàn)菌落。在稀釋度足夠高的菌液里， 聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。隨后挑 取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。由于大腸桿菌屬于

31、兼性厭氧菌， 為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，最好選用稀釋混合平板法。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)計(jì)算的平板越多，其 平均值越接近實(shí)際值。但是C選項(xiàng)中出現(xiàn)一個(gè)菌落數(shù)只有5個(gè)的結(jié)果，不可信，因此答 案選D。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生 長的平均菌落數(shù)，V代表稀釋平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。用這 種方法測定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量多，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)， 平板上觀察到的是一個(gè)菌落。在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，其原因可能有多種，一 是大腸桿菌被污染了，二是培養(yǎng)基被污染了，三是培養(yǎng)過程中被污染了。 答案　(2)稀釋混合平板法　(3)①D?、?.17×108?、鄱唷‘?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起 時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落　④不能。因?yàn)椴荒芘懦s菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過 程