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廣東醫(yī)學(xué) 2010 年 1 月第 31 卷第 2 期 Guangdoni: Mediad Journal Jan. 2010, Vol. 31, No. 2
氟伐他汀對心梗家兔左室重構(gòu)及心肌細胞
NHE 一 1 mRNA表達的影響
陳緒江S董曉燕,楊波2
I湖北省武漢市第三醫(yī)曉心內(nèi)科(430060); 2武漢大學(xué)人民醫(yī)院(武漢430060)
【播要】 目的 研究鼠伐他汀對正常血脂家兔心梗后左室重構(gòu)及心肌鈿胞NHE-lmRNA表達的影響。方法
30只家兔隨機分為3組5 = 10):假手術(shù)組、心肌梗死組和鼠伐他汀干預(yù)組■干預(yù)組予以鼠伐他汀10 巒(燉? d) 灌胃給藥
2、,心肌梗死組予以蒸館水灌那。喂養(yǎng)4周后,進行血流動力學(xué)指標(biāo)、左室肥厚指數(shù)(LVHI)的測定,同時運用 逆轉(zhuǎn)錄聚合胯聯(lián)反應(yīng)法(RT-PCR)檢測左宣非梗死區(qū)心肌NHE?1 mRNA的表達。結(jié)果 心肌梗死組左宣重童指 數(shù)(LVWI)增大、左室收縮壓(LVSP)顯著降低,而鼠伐他汀干枝組較心肌梗死組LVSP增高、1VWI下降,NHE-1 mKNA表達降低。結(jié)論 II伐他汀改#家兔心梗后心室菱構(gòu)■并下調(diào)局部心肌NHE-1 mRNA的表達。
【關(guān)鍵詞)鼠伐他??;心肌梗死;NHE - 1
心室肥厚是急性心肌梗死后的一個常見并發(fā)癥, 現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),其發(fā)生除了與神經(jīng)體液因素、炎性細胞因 子、氧自由基
3、的參與有關(guān)外,還與細胞內(nèi)鈣超載有關(guān)。 在心臟,心肌細胞胞漿內(nèi)游離的鈣濃度與NaVH4交 換體(NHE - 1)的參與調(diào)節(jié)有關(guān),當(dāng)其功能或表達的量 發(fā)生改變時,可導(dǎo)致心肌細胞內(nèi)鈣的穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變,從 而導(dǎo)致心肌細胞發(fā)生病理性改變,如肥大增生或凋亡 等。TAKEWAKI等⑴研究發(fā)現(xiàn)NHE-1的激活及其基 因表達的增加與心肌肥厚發(fā)生的分子機制有關(guān)。他汀 類藥物在臨床上廣泛用于降脂,近年來的研究發(fā) 現(xiàn)其具有改善心室重構(gòu)、滅輕室壁肥厚的作用,在此基 礎(chǔ)上是否對心肌梗死后非梗死區(qū)心肌細胞NHE-1 mRNA的表達有影響,國內(nèi)外研究較少。本文在結(jié)扎家 兔左冠狀動脈前降支制造心梗模型的基礎(chǔ)上,觀察氟 伐他汀對家
4、兔心肌梗死后左室重構(gòu)及非梗死區(qū)心肌細 胞NHE-1 mRNA表達的影響。
1材料與方法
1.1試驗動物健康家兔30只,雌雄不拘,體重 1.5 -2.2 kgo
1.2試劑和儀器氟伐他汀由北京諾華制藥有限公 司饋贈;Trizol購自Invitrogen公司;MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶購 自Promega公司;RNasin購自Biostar公司;ACS型電子 計重稱為梅特勒■托利多(常州)稱重設(shè)備系統(tǒng)有限 公司產(chǎn)品;32道電生理記錄儀LEAD2000B型四川錦 江通用實業(yè)有限公司產(chǎn)品;Biometra PCR儀為華粵企 業(yè)集團有限公司產(chǎn)品。
1.3 方法
1.3.1心梗模型制作所有家兔均用20%烏
5、拉坦 (5 mL/kg)腹腔注射麻醉,常規(guī)消毒后,沿胸骨左緣切 口 ,切斷第3、4兩功,保持胸膜完整,充分暴需心臟,結(jié)扎 冠狀動脈左前降支,當(dāng)結(jié)扎線以下出現(xiàn)局部心肌紫綃. 體表心電圖示ST段抬高大于0.2 mV,觀察一段時間后 不回降表明心肌梗死模型制備成功,術(shù)后肌內(nèi)注射青髯 素3 d(800 000 U/d),假手術(shù)組只開胸穿線但不結(jié)扎。
1.3.2 實驗分組將30只家兔隨機分成3組5 = 10),即假手術(shù)組、心肌梗死組和氟伐他汀干預(yù)組。干 預(yù)組術(shù)后第2天開始予以氟伐他汀10 mg/(kg-d)灌 胃給藥,心肌梗死組則給予等量的蒸他水。飼養(yǎng)過程 中因心力衰竭或腹瀉死亡的兔子及時補上。
1
6、.3.3 血流動力學(xué)指標(biāo)測定 喂養(yǎng)4周后,所有家兔 麻醉后固定于手術(shù)臺上,常規(guī)消毒后,分離右側(cè)頸總動 脈,結(jié)扎遠心端,近心端用動脈夾夾緊,用眼科剪在靠 近遠心端的動脈壁上剪一小口,插入導(dǎo)管,通過換能器 連接于32道電生理記錄儀,然后緩慢插入左心室,當(dāng) 電生理儀上出現(xiàn)穩(wěn)定的左心室壓力圖形時開始記錄左 室收縮壓(LVSP),整個測量過程始終保持導(dǎo)管內(nèi)充滿 肝察鹽水(1 000 U/mL)o
1.3.4左宣肥厚指數(shù)測定 喂養(yǎng)4周后,所有家兔術(shù) 前稱重,處死后迅速取下心臟,在冰鹽水中洗干凈,然 后放到滅過酶的錫紙上稱重,左心室的重量為心臟去 除左右心房及右心室后的重凰,并由此計算出左室重 量指數(shù)。
7、
1.3.5 非梗死區(qū)心肌NHE-1 mRNA表達測定剪 下左心室后,去除梗死區(qū),余下部分儲存于-70弋冰箱 中,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)法(RT - PCR)檢測NHE -1 mRNA 表達。(1)總 RNA 的提?。喝?50 ~ 100 mg 心肌組織,在高溫滅酶過的勻漿器中加入1 mL Trizol 于冰上充分勻漿,將勻漿液轉(zhuǎn)移至1.5 mL DEPC處理 過的EP管中,室溫靜置15 min后加入0. 2 mL氯仿,劇 烈振蕩20 s,重復(fù)3次,室溫下靜置5 min,12 000 r/min 4弋離心15 min,取上清轉(zhuǎn)移至一新EP管中,加入等體 積的異丙醇混勻,室溫下靜置10 min,12 000 r/min 4七 離心15 min,棄上清,加入DEPC水配制的75%乙醇 1 mLt 7 500 r/min 4T離心5 min,棄上渭■室溫下自然 晾干,加入20~40 mL DEPC處理水溶解,于55 ~60丫 孵育10 min,紫外分光光度法測定其濃度。(2)RT? PCR:取總RNA 10譏用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄。 NHE - 1PCR反應(yīng)條件:94^5 min預(yù)變性后開始42個