羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值論文.doc
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畢業(yè)論文/畢業(yè)論文范文 羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值論文 資料與方法 一般資料 選擇2017年4月~2017年4月在本院產(chǎn)科就診的具有產(chǎn)前診斷指征的178例孕婦, 年齡20~47歲, 孕周16~25周, 有70例孕婦唐氏綜合征篩查為陽性, 23例孕婦有異常生育史, 60例孕婦年齡35歲, 14例婦女于早孕服藥, 6例孕婦神經(jīng)管急性篩查為陽性, 5例孕婦丈夫染色體異常。 方法 羊膜穿刺 經(jīng)b超定位后, 在無菌條件下, 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術(shù)。舍棄最開始的2 ml羊水, 再抽取20~30 ml的羊水放入2支無菌離心試管中。 羊水細(xì)胞培養(yǎng) 以1000 r/min的離心速度將2支無菌試管中的羊水進(jìn)行離心處理達(dá)10 min, 舍棄上層清液, 保留管內(nèi)沉淀細(xì)胞和0.5 ml羊水, 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml f10培養(yǎng)基, 用細(xì)管使之混勻, 將其接種于t-25的無菌試管中, 在37℃有5%二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行培育, 5 d后觀察細(xì)胞生長情況, 若發(fā)現(xiàn)纖維狀或者梭狀細(xì)胞生長是, 則可更換5 ml新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行傳代培養(yǎng)[2]。 收獲細(xì)胞并進(jìn)行制片 在對(duì)羊水細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)6~7 d后, 在倒置的顯微鏡下對(duì)正在培養(yǎng)的羊水細(xì)胞進(jìn)行觀察, 觀察其生長情況, 發(fā)現(xiàn)有不同大小的梭長形細(xì)胞正在進(jìn)行克隆并生長, 每個(gè)克隆過的細(xì)胞其生長狀態(tài)良好并且已經(jīng)形成細(xì)胞島。對(duì)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液進(jìn)行定時(shí)的更換, 每天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察, 在觀察2~3 d后, 發(fā)現(xiàn)每個(gè)形成的細(xì)胞島已經(jīng)逐漸長成為透亮細(xì)胞, 這些細(xì)胞較大, 細(xì)胞融合度達(dá)到70%~80%, 并且數(shù)目不等, 形狀多呈圓形或類圓形, 這時(shí)即可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行收獲。在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行收獲的前1 d, 更換新鮮培養(yǎng)液, 在培養(yǎng)液中加入秋水仙素, 使其濃度達(dá)到0.1 mg/ml, 在4~5 h后, 使用顯微鏡觀察, 發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量的呈魚眼狀的細(xì)胞時(shí), 即可對(duì)細(xì)胞終止培養(yǎng)并進(jìn)行收獲。加入0.25%的2 ml胰酶消化液, 在37℃的環(huán)境下放置5 min, 使得瓶壁上細(xì)胞脫落, 再以1500r的轉(zhuǎn)速離心處理8 min, 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min, 滴片, 常規(guī)g顯帶。每張玻片有20~30個(gè)細(xì)胞分裂相, 進(jìn)行染色體核型分析, 每例分析核型5個(gè)。 核型統(tǒng)計(jì)分析 使用顯微鏡對(duì)細(xì)胞核型進(jìn)行觀察, 常規(guī)技術(shù)分散良好的細(xì)胞核型有30個(gè)中期分裂相, 細(xì)胞核型計(jì)數(shù)發(fā)生異常的則有50個(gè)分裂相, 如出現(xiàn)2個(gè)細(xì)胞核型計(jì)數(shù)異常, 則對(duì)所有分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù), 使用染色體核型分析軟件對(duì)核型圖像進(jìn)行采集, 對(duì)3~5個(gè)核型進(jìn)行分析, 并完成報(bào)告, 為遺傳咨詢提供意見。- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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