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生活聯(lián)系：,燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？,w,w,2.2.1 動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù),最基礎(chǔ)的是 ——動物細胞培養(yǎng)技術(shù),動物細胞工程常用的技術(shù)：,動物細胞培養(yǎng) 動物細胞核移植 動物細胞融合 單克隆抗體 等,自主閱讀P44第5段，思考下列問題：,,1、什么叫動物細胞培養(yǎng)（animal cell culture)？ 2、動物細胞培養(yǎng)的原理是什么？,w,一、動物細胞培養(yǎng),1、概念：從動物機體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。,原理：,細胞增殖,如何進行動物細胞培養(yǎng)?,結(jié)合問題思考：p44—45,1、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞呢？,2、如何將動物組織分散成單個的細胞？,3、胰蛋白酶的作用是什么？由此可說明細胞間的物 質(zhì)主要是什么成分？,4、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面為何要光滑、無毒？,5、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？,1、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？,2、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？,3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質(zhì)是什么成份？,成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖,先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理,胰蛋白酶水解蛋白質(zhì),細胞間的成份是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等),思考題,w,4、貼附性細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？,5、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？,易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖,當(dāng)貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。,思考題,w,,細胞貼壁,接觸抑制 (contact inhibition),動物細胞生長特點：,細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。 細胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。,w,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官（取材）,,細胞懸液,,10代細胞,傳代培養(yǎng),,無限傳代,,單個細胞,,加培養(yǎng)液,（分解細胞間的蛋白）,,過程：,動物組織細胞間隙中含有一定量蛋白質(zhì),原代培養(yǎng)：通常將直接從動物體內(nèi)取出的動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細胞出現(xiàn)接觸抑制后，貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。 分類：10代內(nèi)的細胞；10-50代；50代以后。,有關(guān)概念：,細胞株： 從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出進行傳代培養(yǎng)的細胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。,細胞系： 傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。,細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。,w,胰蛋白酶,,,.培養(yǎng)條件,動物組織,分散成 單個細胞,細胞懸液,培養(yǎng),,,,,胰蛋白酶,原理： 細胞增殖（有絲分裂） 結(jié)果： 細胞群，細胞產(chǎn)物,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),動物細胞培養(yǎng)過程,胚胎的細胞或剛出生不久動物的組織,1、選用組織時，一般用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動物的，這是為什么？,因為幼齡組織或器官上的細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。 老齡動物的細胞則相反。,學(xué)習(xí)活動二,2、胰蛋白酶處理組織時要注意什么問題？ 能夠用胃蛋白酶代替嗎？,控制好消化時間，太長會消化細胞膜上的蛋白質(zhì),不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近.,學(xué)習(xí)活動二,3、動物細胞培養(yǎng)能否最終培養(yǎng)成新個體？,不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體,學(xué)習(xí)活動二,多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認為體外培養(yǎng)動物細胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些條件呢？,問題探討：,動物細胞培養(yǎng)條件：,1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液） 2、營養(yǎng) （葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。） 3、溫度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,提供有利于細胞生長和增殖所需的激素，生長因子或提供合成培養(yǎng)基缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)，保證細胞順利的生長增殖,1．動物細胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是 A.動物細胞培養(yǎng) B.動物細胞融合 C.單克隆抗體 D.胚胎核移植,練一練~~~,2．貼壁細胞的分裂方式具體是 A.無絲分裂 B.有絲分裂 C.減數(shù)分裂 D.增殖,A,B,3．關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是 A.動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散開來 B.通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng) C.動物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細胞全部衰老死亡 D.用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織,C,無菌、無毒 消毒、滅菌、抗生素、定期更換培養(yǎng)液（清除代謝廢物） 營養(yǎng) 合成培養(yǎng)基（血清、血漿） 溫度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 氣體 95%空氣，5%CO2,,,知識回顧,動物組織,分散成 單個細胞,細胞懸液,培養(yǎng),,,,,胰蛋白酶 膠原蛋白酶,胰蛋白酶 膠原蛋白酶,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),動物細胞培養(yǎng)的結(jié)果：細胞群或細胞產(chǎn)物,1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭 名叫盧辛達（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為 30.8 t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目 前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般 為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3～4 t。 怎么樣才能獲取大量的高產(chǎn)奶奶牛呢？？,,動物的細胞核具有全能性,二、動物體細胞核移植技術(shù),1、概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。 用核移植的方法得到的動物稱克隆動物,二、動物體細胞核移植技術(shù),原理：,動物的細胞核具有全能性,2、核移植的種類,胚胎細胞核移植 體細胞核移植,（易）,（難）,閱讀書本48頁，圖2-21 體細胞核移植流程圖 概述核移植的過程,3、核移植的過程,細胞質(zhì),細胞核,細胞核移植,,多莉羊的培育過程,,,,供體細胞培養(yǎng),（MⅡ卵母細胞）,減數(shù)第二次分裂中期,去核的卵母細胞,供體細胞注入去核卵母細胞,激活受體細胞，完成分裂、發(fā)育,胚胎移植,,代孕牛子宮,克隆牛,3、過程：,供體：提供細胞核物質(zhì) 受體：接受細胞核,3、核移植的過程,選減數(shù)第二次分裂中期（MII)卵母細胞的原因： 卵母細胞體積大，便于操作，含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富；提供早期胚胎發(fā)育所需營養(yǎng)，含有激活細胞核，體現(xiàn)全能性的物質(zhì),核移植的過程,供體細胞（供核）,,細胞培養(yǎng),,體細胞,卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質(zhì)）,,去核,,無核卵母細胞,,注入,,,細胞融合,重組胚胎,,構(gòu)建重組胚胎,,胚胎移植,代孕母體,,生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛,歸納: 1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植 2.取卵細胞作受體細胞的原因是:它是最大的細胞,易操作,它發(fā)育可直接表達性狀 3.嚴格來說新個體有卵巢母細胞的細胞質(zhì)所以有兩個親本的性狀,3、過程：,P49討論：,1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？,為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細胞，在供體細胞的細胞核移至受體細胞之前，必須將受體細胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐?P49小資料）。,培養(yǎng)的動物細胞一般當(dāng)傳代至10～50代左 右時，部分細胞核型可能會發(fā)生變化，其細胞 遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細胞 一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細 胞核移植中，為了保證供體細胞正常的遺傳基 礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細胞。,2.用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞，想一想，這是為什么？,3.你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復(fù)制嗎？為什么？,絕大部分DNA來自于供體細胞核，但其核外還有 少量的DNA，即線粒體中的DNA是來自于受體卵 母細胞。,此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的 一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系， 核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境 不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和 核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物 不會是核供體動物100%的復(fù)制。,① 加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育,② 保護瀕危物種，增加存活數(shù)量,③ 克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白,④ 可以作為異種移植的供體,4、應(yīng)用前景：,⑤ 可以用于組織器官的移植,5、存在問題：,① 成功率低 ② 克隆動物存在健康問題 ③ 克隆動物食品的安全性問題存有爭議,1.在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞（ ） A．細胞系 B．細胞株 C．原代細胞 D．傳代細胞,2.動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （ ） A.動物細胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細胞培養(yǎng),A,D,3.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于 A.培養(yǎng)基不同 B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行 C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能 D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。,A,教學(xué)反饋,4、動物細胞培養(yǎng)的特點 （ ） ①細胞貼壁 ②有絲分裂 ③細胞分化 ④接觸抑制 ⑤減數(shù)分裂 ⑥原代培養(yǎng)一般傳1－10代 A、①②④⑥ B、②③④⑤ C、①③④⑥ D、③④⑤⑥,A,5.關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述，正確的是( ) A.細胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中 B.動物細胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、 無機鹽、生長素和動物血清等 C.動物細胞培養(yǎng)的目的只是獲得大量的細胞分泌蛋白 D.動物細胞培養(yǎng)前和培養(yǎng)過程中都要用胰蛋白酶處理,D,6.下列哪項不屬于體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用（ ） A.加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育 B.保護瀕危物種 C.獲得組織器官異體移植的供體 D.大量產(chǎn)生紫杉醇,D,08年寧夏卷回答下列有關(guān)動物細胞培養(yǎng)的問題： ⑴在動物細胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細胞分裂生長到細胞表面 時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的 。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是 ，要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是 。 ⑵隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn) 的現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成 細胞，該種細胞的黏著性 ，細胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量 。,相互接觸,單層,胰蛋白酶,衰老甚至死亡,接觸抑制,不死性,降低,減少,⑷檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用細胞分裂到 期的細胞用顯微鏡進行觀察。 ⑸在細胞培養(yǎng)過程中，通常在 條件下保存細胞，因為在這種條件下，細胞中 的活性降低，細胞的 速率降低。 ⑹給患者移植經(jīng)細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因為機體把移植的皮膚組織當(dāng)作 進行攻擊。,中,冷凍,酶,新陳代謝,抗原,10、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此回答： 1）容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自______________________。 （2）容器A中的動物器官或組織首先要進行的處理是 ，然后用 酶處理，這是為了使細胞分散開來，這樣做的目的是 。,動物胚胎或幼齡動物的器官或組織,剪碎,胰蛋白,使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng),（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進行，瓶中的培養(yǎng)基成分有 ________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第 代，到這時的培養(yǎng)稱為 。 （4）為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用 處理，然后配置成 ，再分裝。 `,動物血清,10,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,細胞懸液,