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人教版選修1,專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),,微生物包括哪五類：,病毒 細(xì)菌 放線菌 真菌 原生動(dòng)物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,,,1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？,2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外 還要滿足哪些要求？,3、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？,4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個(gè)方面,5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？,6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟,7、如何倒平板？,（1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。 （2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,1、培養(yǎng)基分類：,一、培養(yǎng)基,2、選擇培養(yǎng)基,加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞,不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。,3、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì),（1）培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外 還要滿足哪些要求？,（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？,（3）避免雜菌污染的方法主要包括哪四個(gè)方面,（4）什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？,消毒與滅菌,消毒：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害 的微生物（不包括芽孢和孢子）。 滅菌：指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi) 外所有微生物，包括芽孢和孢子。,滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。,二、無菌技術(shù),消毒的方法：,1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源 4、紫外線或化學(xué)藥物消毒,滅菌的方法：,1、灼燒滅菌 2、干熱滅菌：160-170 ℃ 下加熱1-2h。 3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、 121 ℃下維持15-30min.,6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟,7、如何倒平板？,三、實(shí)驗(yàn)操作,1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,1、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 ℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？,答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。,2、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,問題討論：,3、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,4、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。,2、純化大腸桿菌,接種方法有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法,平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.,微生物的恒溫培養(yǎng),1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,問題討論：,2、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？,答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3、在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？,應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,問題討論：,菌種的保存,1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法,