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配餐作業(yè)(三十八)　微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 1．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述中，不正確的是(　　) A．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染 B．單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法 C．培養(yǎng)基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌 D．倒置平板防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落 解析　本題考查微生物的培養(yǎng)，意在考查考生的識(shí)記能力和實(shí)驗(yàn)操作能力，難度較小。培養(yǎng)基都需要滅菌，但要根據(jù)實(shí)際情況選擇滅菌的方法，如果培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在高溫條件下易分解，則不能使用高壓蒸汽滅菌。 答案　C 2．下列有關(guān)培養(yǎng)基和菌種鑒定的敘述不正確的是(　　) A．噬菌體能使固體培養(yǎng)基上的細(xì)菌裂解，菌落變得透明 B．可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型 C．利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈來篩選纖維素分解菌 D．在無氮培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌 解析　在只以尿素作為氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌。 答案　D 3．下列對(duì)滅菌和消毒的理解不正確的是(　　) A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子 B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是完全相同的 C．接種環(huán)用灼燒法滅菌 D．常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法 解析　消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，滅菌則是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 答案　B 4．下列關(guān)于測(cè)定亞硝酸鹽含量的操作，錯(cuò)誤的是(　　) A．質(zhì)量濃度為4 mg/mL的對(duì)氨基苯磺酸溶液呈酸性 B．對(duì)氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，應(yīng)避光保存 C．質(zhì)量濃度為5 μg/mL的亞硝酸鈉溶液應(yīng)保持弱堿性環(huán)境 D．制備樣品處理液，加入氫氧化鋁的目的是中和氫氧化鈉 解析　從實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及注意事項(xiàng)上進(jìn)行分析。對(duì)氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液都呈酸性，為保證其穩(wěn)定性，應(yīng)低溫密閉保存；亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液配制過程中應(yīng)加入NH4Cl緩沖液，保持弱堿性環(huán)境以免形成亞硝酸揮發(fā)；制備樣品處理液，加入氫氧化鋁的目的是使濾液中色素脫色，使濾液變得無色透明。 答案　D 5．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)(　　) ①可以用相同的培養(yǎng)基?、诙夹枰褂媒臃N針進(jìn)行接種?、鄱夹枰诨鹧媾赃M(jìn)行接種　④都可以用來計(jì)數(shù)活菌 A．①② B．③④ C．①③ D．②④ 解析　平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基，故①正確；平板劃線法采用接種環(huán)進(jìn)行操作，而稀釋涂布平板法采用涂布器進(jìn)行操作，故②錯(cuò)誤；純化時(shí)，要進(jìn)行無菌操作，需要在火焰旁接種，避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基，故③正確；平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù)，故④錯(cuò)誤。 答案　C 6．用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是(　　) A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 C．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 D．接種了的選擇培養(yǎng)基 解析　將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照。對(duì)照實(shí)驗(yàn)遵循的原則之一是單一變量，所以與選擇培養(yǎng)基一樣接種、培養(yǎng)。 答案　C 7．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述不正確的是(　　) A．利用稀釋涂布平板法既能分離微生物也能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù) B．接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單個(gè)菌落 C．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌 D．用大白菜腌制泡菜的過程中亞硝酸鹽含量變化是先減少后增加 解析　稀釋涂布平板法可以用于分離微生物以及對(duì)微生物計(jì)數(shù)；接種時(shí)要連續(xù)劃線，這樣可以獲得單個(gè)菌落；大白菜腌制過程中開始時(shí)細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加，一般腌制10 d后亞硝酸鹽含量下降。 答案　D 8．下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是(　　) A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上 C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí) D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù) 解析　確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤；A是培養(yǎng)基的滅菌方法，B設(shè)置了一系列對(duì)照實(shí)驗(yàn)，C是細(xì)菌的培養(yǎng)方法，A、B、C均正確。 答案　D 9．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是(　　) A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 B．富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少 C．經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色 D．對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上 解析　經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。 答案　A 10．(2018湖南五市十校教改共同體聯(lián)考)下表是篩選異養(yǎng)型細(xì)菌的培養(yǎng)基配方?；卮鹣铝袉栴}： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO47H2O 0.2 g FeCl3 0.1 g X 1 g 維生素 微量 瓊脂 15 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)苯胺是致癌物質(zhì)，土壤中有分解苯胺的異養(yǎng)型細(xì)菌，若要篩選此異養(yǎng)型細(xì)菌，則此培養(yǎng)基中的成分X除了為目的菌提供能源外，還能提供________，該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)看屬于________培養(yǎng)基。中學(xué)實(shí)驗(yàn)室中對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是________。接種前，用滅菌后未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察是否形成菌落，目的是__________________。 (2)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，獲得圖A效果的接種方法是__________________________。運(yùn)用獲得圖B效果的方法接種時(shí)，操作上應(yīng)注意每次劃線前要灼燒____________。 (3)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加__________可初步鑒定該種細(xì)菌能否分解尿素；在篩選能夠分解纖維素的微生物過程中，常用到__________染色法。 答案　(1)碳源和氮源　固體　高壓蒸汽滅菌法 判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底 (2)稀釋涂布平板法　接種環(huán) (3)酚紅指示劑　剛果紅 11．(2018洛陽統(tǒng)考一)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們?cè)噲D篩選出能高效降解尿素的細(xì)菌。設(shè)計(jì)了“土壤中分解尿素細(xì)菌的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)”，過程如下所示： (1)在接種前，進(jìn)行①～⑤系列操作的意圖是_____________。據(jù)題意，每次為使菌液稀釋10倍，應(yīng)加入的無菌水量是________mL。 (2)為達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康模緦?shí)驗(yàn)所配制的培養(yǎng)基成分不應(yīng)包括________(填序號(hào))，原因是__________________________________。 制備該無菌培養(yǎng)基的步驟為“計(jì)算→稱量→溶解→滅菌→倒平板”，其中調(diào)節(jié)pH應(yīng)該在________(填步驟名稱)之前。 ①水?、跓o機(jī)鹽(不含氮)　③NH4NO3?、苣蛩亍、萜咸烟恰、夼Ｈ飧唷、叩鞍纂恕、喹傊? (3)本實(shí)驗(yàn)采用的接種工具是________________。微生物的不同接種技術(shù)的操作方法各不相同，但其操作過程中都必須____________。 (4)某同學(xué)接種了3個(gè)培養(yǎng)皿，一段時(shí)間后3個(gè)培養(yǎng)皿中分別長(zhǎng)出了54個(gè)、46個(gè)、50個(gè)菌落，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該1 g土壤樣本中約有分解尿素的細(xì)菌______________個(gè)。 解析　(4)1 g土樣被稀釋了106倍，則1 g土壤中細(xì)菌數(shù)為(54＋46＋50)/31106＝5107。 答案　(1)使菌液按一定的梯度稀釋　9 (2)③⑥⑦　培養(yǎng)基中只有以尿素為唯一的氮源，才能起到選擇作用　滅菌 (3)涂布器　防止雜菌污染 (4)5107 12．下表表示在不同培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖情況。(A、B、C、H、I、J、K、M為培養(yǎng)基的成分，“＋”表示生長(zhǎng)，“－”表示不生長(zhǎng))，請(qǐng)分析下列哪種物質(zhì)細(xì)菌不能合成(　　) 培養(yǎng)基成分 A、B、C A、B、C I、M A、B、C H、K A、B、C M、J A、B、C I、K A、B、C H、J A、B、C K、M 生長(zhǎng)狀態(tài) － － ＋ － ＋ － ＋ A．H B．I C．K D．M 解析　培養(yǎng)基是按照微生物的生長(zhǎng)需要，用人工方法配制而成的營(yíng)養(yǎng)物，其中有些是各種微生物都必需的，大多數(shù)情況下按微生物特殊營(yíng)養(yǎng)要求配制的培養(yǎng)基，稱選擇培養(yǎng)基。比較細(xì)菌能夠生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的添加物，凡添加了物質(zhì)K的培養(yǎng)基，細(xì)菌都能生長(zhǎng)，反之則不能生長(zhǎng)，說明物質(zhì)K是細(xì)菌不能合成的。 答案　C 13．將細(xì)菌放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，它會(huì)繁殖并形成菌落(如圖)。某實(shí)驗(yàn)小組想檢驗(yàn)A、B兩種抗生素的殺菌作用，下列實(shí)驗(yàn)方案最合適的是(　　) 解析　本實(shí)驗(yàn)的目的是檢驗(yàn)A、B兩種抗生素的殺菌作用，應(yīng)設(shè)置不加抗生素的對(duì)照組和分別加A、B兩種抗生素的實(shí)驗(yàn)組。 答案　C 14．(2018惠州模擬)目前微博傳言手機(jī)細(xì)菌比馬桶多。如圖，央視和北京衛(wèi)視通過實(shí)驗(yàn)展示調(diào)查結(jié)果?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題： (1)該實(shí)驗(yàn)需制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、________。 (2)據(jù)圖，兩電視臺(tái)均采用________________法接種，該方法需要________(多選，填選項(xiàng)字母)。 A．接種環(huán) B．酒精燈 C．移液管 D．涂布器　E．無菌水 (3)通過觀察菌落的________，可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但報(bào)道結(jié)果截然不同，你認(rèn)為原因是________________________________________。 (4)按圖操作取樣面積，實(shí)驗(yàn)員測(cè)定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量，將10 mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1 mL稀釋倍數(shù)為102的樣品液接種到三個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為48、50、52，則該手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)為________________個(gè)/平方厘米。該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組該如何設(shè)置？__________________________。 解析　(1)微生物培養(yǎng)基的成分一般包括水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。(2)根據(jù)圖形分析，該實(shí)驗(yàn)的接種方法為稀釋涂布平板法，該方法用到的工具有酒精燈、移液管、涂布器、無菌水等。(3)不同的菌落形態(tài)、大小不同，圖示兩個(gè)電視臺(tái)調(diào)查的手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都有多種形態(tài)的菌落，即存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但報(bào)道結(jié)果截然不同，可能是因?yàn)槭謾C(jī)的取樣和馬桶的取樣都不相同。(4)根據(jù)提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)＝(48＋50＋52)31020.110(55)＝2104(個(gè)/平方厘米)。 答案　(1)氮源和無機(jī)鹽 (2)稀釋涂布平板　 BCDE (3)形態(tài)、大小　手機(jī)的取樣和馬桶的取樣都不相同 (4)2104　取培養(yǎng)基涂布0.1 mL無菌水進(jìn)行培養(yǎng)