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克隆技術(shù) 第35講　克隆技術(shù) A組　基礎過關 1.(2018天津理綜,2,6分)蘆筍是雌雄異株植物,雄株性染色體為XY,雌株為XX;其幼莖可食用,雄株產(chǎn)量高。以下為兩種培育雄株的技術(shù)路線。有關敘述錯誤的是(　　) A.形成愈傷組織可通過添加植物生長調(diào)節(jié)劑進行誘導 B.幼苗乙和丙的形成均經(jīng)過脫分化和再分化過程 C.雄株丁的親本的性染色體組成分別為XY、XX D.與雄株甲不同,雄株丁培育過程中發(fā)生了基因重組 答案　C　本題主要考查育種的相關知識。植物組織培養(yǎng)過程中,利用植物生長調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)愈傷組織的形成與分化,A正確;由花粉形成單倍體幼苗乙、丙的過程包括脫分化、再分化兩個階段,B正確;雄株丁的親本乙、丙由雄株的花粉經(jīng)單倍體育種培育而來,只有植物乙、丙的性染色體組成為XX、YY時,雄株丁的性染色體組成才為XY,C錯誤;雄株丁的培育過程中經(jīng)歷了減數(shù)分裂產(chǎn)生花粉的過程,該過程中發(fā)生了基因重組,D正確。 2.下列關于克隆技術(shù)的敘述中,正確的是(　　) A.細胞克隆的主要用途之一是篩選出缺乏特殊基因的突變細胞系 B.在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl,不能篩選出抗鹽突變體 C.植物經(jīng)多次繼代培養(yǎng)后不會喪失全能性的表達能力 D.有限細胞系比無限細胞系更容易克隆 答案　A　細胞克隆的主要用途之一是篩選出缺乏特殊基因的突變細胞系,A正確;在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl,可以篩選出抗鹽突變體,B錯誤;有些植物(如小麥、水稻等)經(jīng)多次繼代培養(yǎng)后會喪失全能性的表達能力,C錯誤;無限細胞系比有限細胞系更容易克隆,因為無限細胞系對環(huán)境的適應能力和獨立生存能力更強,D錯誤。 3.某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉,其技術(shù)路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關敘述錯誤的是(　　) A.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物,又減少消毒劑對細胞的傷害 B.在愈傷組織培養(yǎng)中加入細胞融合的誘導劑,可獲得染色體加倍的細胞 C.出芽是細胞再分化的結(jié)果,受基因選擇性表達的調(diào)控 D.生根時,培養(yǎng)基通常應含α-萘乙酸等生長素類調(diào)節(jié)劑 答案　B　植物組織培養(yǎng)中消毒的原則是既殺死材料表面的微生物,又減少消毒劑對培養(yǎng)材料的傷害;植物體細胞的雜交需先除去細胞壁得到原生質(zhì)體,再在細胞融合誘導劑作用下獲得染色體加倍的細胞;細胞分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達;植物組織培養(yǎng)過程中,生根階段的培養(yǎng)基中通常應含有生長素類調(diào)節(jié)劑。 4.應用植物組織培養(yǎng)技術(shù),不僅可實現(xiàn)種苗的快速繁殖、培育無病毒植株,也可加快作物及苗木育種。下面是培育柑橘耐鹽植株的實驗流程: 莖段→愈傷 組織挑選生長的 愈傷組織→耐鹽植株 回答下列問題: (1)愈傷組織是由離體的莖段經(jīng)　　　　　　　過程形成的,此時愈傷組織細胞　　　　　(填“具有”或“不具有”)細胞的全能性。 (2)對愈傷組織進行了兩次處理,處理1中γ射線照射的目的是　　　　　　　 　　,用γ射線不直接處理莖段而是處理愈傷組織,原因是　　　　　　　　　　　　 　　　　　　;處理2中添加的物質(zhì)X為　　　　。 (3)植物組織培養(yǎng)技術(shù)也被廣泛應用于其他作物的育種中。在培育白菜—甘藍、三倍體無籽西瓜、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得的抗蟲棉中,必須用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)的是　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)脫分化　具有　(2)誘發(fā)基因突變　愈傷組織細胞分裂能力強,易誘發(fā)基因突變　NaCl(或鹽)(3)白菜—甘藍、抗蟲棉 解析　(1)離體的莖段經(jīng)過脫分化過程可形成愈傷組織,此時愈傷組織具有未分化的特點,細胞具有較高的全能性。(2)圖中對愈傷組織進行了兩次處理,第一次處理是用γ射線照射誘發(fā)愈傷組織細胞發(fā)生基因突變。愈傷組織細胞分裂能力強,易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而發(fā)生基因突變。第二次處理是抗鹽接種實驗,即在培養(yǎng)基中加入氯化鈉,適應一定濃度鹽的愈傷組織才可以生長,不適應的愈傷組織死亡。(3)作物育種研究中常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將含抗蟲基因的Ti質(zhì)粒導入植物體細胞中,再利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得抗蟲的農(nóng)作物。運用細胞工程培育白菜—甘藍雜種植株,需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細胞培養(yǎng)成雜種植株。 5.[2016浙江4月選考,32(二),7分]回答下列問題: 兔肝細胞中的基因E編碼代謝甲醛的酶,擬利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入矮牽牛中,以提高矮牽牛對甲醛的代謝能力,請回答: (1)從兔肝細胞中提取mRNA,在　　　　酶的作用下形成互補DNA,然后以此DNA為模板擴增得到基因E。在相關酶的作用下,將基因E與Ti質(zhì)粒連接在一起,形成　　　,再導入用氯化鈣處理的　　　　,侵染矮牽牛葉片。將被侵染的葉片除菌后進行培養(yǎng),最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過程正確的是　　　　。(A.葉片在含適宜濃度生長素的培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織　B.愈傷組織在含細胞分裂素和生長素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽　C.再生的芽在細胞分裂素含量較高的培養(yǎng)基上生根　D.愈傷組織在含適宜濃度植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株) (2)取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片,放入含MS液體培養(yǎng)基和適宜濃度甲醛且密封的試管中。將試管置于　　　　上,進行液體懸浮培養(yǎng)。一段時間后測定培養(yǎng)基中甲醛的含量,以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達。培養(yǎng)過程中液體培養(yǎng)基的作用:一是提供營養(yǎng);二是　　　　　　,從而使葉片保持正常的形態(tài)。 答案　(1)逆轉(zhuǎn)錄　重組質(zhì)粒(重組DNA分子)　農(nóng)桿菌　B　(2)搖床　維持滲透壓 解析　(1)以mRNA為模板合成DNA的過程叫逆轉(zhuǎn)錄,該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶;將基因E與Ti質(zhì)粒連接在一起,形成重組質(zhì)粒(或重組DNA分子);將重組質(zhì)粒導入植物細胞,一般用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,即先將重組質(zhì)粒導入用氯化鈣處理的農(nóng)桿菌,再用農(nóng)桿菌去侵染植物葉片,從而將目的基因?qū)胫参锶旧wDNA中。將重組細胞培養(yǎng)成植物需要經(jīng)過植物組織培養(yǎng)的過程,葉片細胞脫分化形成愈傷組織,A錯誤;愈傷組織的分化,一般先長芽,即在細胞分裂素與生長素比例較高的培養(yǎng)基中培養(yǎng),B正確;生根需要放在生長素與細胞分裂素比例較高的生根培養(yǎng)基中培養(yǎng),C錯誤;愈傷組織形成再生植株的過程為再分化,D錯誤。(2)如果愈傷組織形成后要進行液體懸浮培養(yǎng),應將試管置于搖床上,通過液體懸浮培養(yǎng)分散成單細胞,再由單細胞發(fā)育成胚狀體,進而發(fā)育成植株。液體培養(yǎng)基除了提供營養(yǎng),還維持滲透壓使葉片保持正常的形態(tài)。 6.請回答與雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備有關的問題。 (1)利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時,利用一定的物質(zhì),如生物誘導劑　　　　作介導,使經(jīng)免疫的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合,篩選出融合的細胞再進行細胞的　　　　培養(yǎng),獲得純系細胞,同時還要進行　　　檢驗,以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細胞。 (2)獲得雜交瘤細胞后,在體外培養(yǎng)時需要特別加入的天然成分是　　　　。 (3)有關雜交瘤細胞體外培養(yǎng)的敘述,正確的是　　　　。 A.用固體培養(yǎng)基培養(yǎng) B.用滋養(yǎng)層細胞支持生長 C.能進行傳代培養(yǎng) D.需要對細胞進行研磨破碎獲得產(chǎn)物 (4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體,科研小組將與抗體形成有關的關鍵基因通過噬菌體導入受體細胞,該技術(shù)的核心步驟是　　　　　　　　,噬菌體是這些關鍵基因的　　　　。 答案　(1)滅活的(仙臺)病毒　克隆　抗體　(2)動物血清 (3)C　(4)形成重組DNA分子　載體 解析　誘導動物細胞融合的因素有聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等;在單克隆抗體制備過程中,一般認為有兩次篩選過程,第一次是篩選出雜交瘤細胞(用選擇培養(yǎng)基),第二次是進一步篩選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細胞。動物細胞培養(yǎng)過程中,除需要正常的有機和無機營養(yǎng)外,還需加入血清、血漿等一些天然成分。(1)制備單克隆抗體時,可利用生物誘導劑滅活的(仙臺)病毒介導,使經(jīng)免疫的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合;為保證獲得的是所需的特定雜交瘤細胞,篩選出融合的細胞后需再進行細胞的克隆化培養(yǎng),獲得純系細胞,同時還要進行抗體檢驗。(2)獲得雜交瘤細胞后,在體外培養(yǎng)時需要特別加入的天然成分是動物血清。(3)動物細胞培養(yǎng)需用液體培養(yǎng)基,A項錯誤;細胞克隆需要滋養(yǎng)細胞(如經(jīng)射線照射本身失去增殖能力的小鼠成纖維細胞)提供營養(yǎng)支持生長,B項錯誤;雜交瘤細胞在適宜條件下能無限增殖,所以能進行傳代培養(yǎng),C項正確;雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體會分泌到培養(yǎng)液中,所以不需要對細胞進行研磨破碎獲得產(chǎn)物,D項錯誤。(4)基因工程的核心步驟是形成重組DNA分子,噬菌體可在基因工程中作為目的基因的載體。 7.(2018全國卷Ⅲ,12,12分)2018年《細胞》期刊報道,中國科學家率先成功地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆,獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}: (1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程,核移植是指　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。通過核移植方法獲得的克隆猴,與核供體相比,克隆猴體細胞的染色體數(shù)目　　　　(填“減半”“加倍”或“不變”)。 (2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植,胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度　　　　(填“大于”或“小于”)體細胞核移植,其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)在哺乳動物核移植的過程中,若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體,通常,所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目　　　　(填“相同”或“不同”),性染色體組合　　　　(填“相同”或“不同”)。 答案　(1)將動物的一個細胞核,移入一個已去掉細胞核的卵母細胞　不變　(2)小于　胚胎細胞分化程度低,恢復全能性相對容易　(3)相同　不同 解析　(1)核移植是指將動物的一個細胞核,移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,并最終發(fā)育為動物個體。克隆猴體細胞的染色體數(shù)等于重組細胞中的染色體數(shù),等于供核細胞中的染色體數(shù)。(2)哺乳動物胚胎細胞分化程度低,恢復全能性相對容易,而哺乳動物體細胞分化程度高,恢復全能性十分困難,因此,動物體細胞核移植獲得克隆猴的難度也就明顯高于胚胎細胞核移植。(3)哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞中常染色體數(shù)目相同,雌性性染色體組合為XX,雄性性染色體組合為XY,因此題中所得的兩個克隆動物體細胞常染色體數(shù)目相同,性染色體組合不同。 B組　能力提升 1.下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述,正確的是(　　) A.培養(yǎng)保留接觸抑制的細胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細胞 B.克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過程中多數(shù)細胞的基因型會發(fā)生改變 C.二倍體細胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無限的 D.惡性細胞系的細胞可進行傳代培養(yǎng) 答案　D　由于接觸抑制,動物細胞培養(yǎng)時只能形成單層細胞,A項錯誤;克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過程中,由于所有子代細胞來自于一個親代細胞,所以基因型一般都相同,B項錯誤;二倍體細胞通常為有限細胞系,傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是有限的,C項錯誤;惡性細胞系的細胞具有癌變的特點,可進行傳代培養(yǎng),D項正確。 2.下列關于植物組織培養(yǎng)和動物克隆的說法錯誤的是(　　) A.植物組培獲得的試管苗,可能為雜合子,也可能為純合子;可能為單倍體,也可能為二倍體 B.同一株綠色開花植物不同部位的細胞經(jīng)組培獲得的愈傷組織基因型一定相同 C.動物克隆的技術(shù)基礎是動物的細胞和組織培養(yǎng) D.為了防止細胞培養(yǎng)過程中細菌的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素 答案　B　植物組培屬于無性繁殖,獲得的試管苗細胞內(nèi)基因型和染色體組成取決于外植體,A正確;同一株綠色開花植物的體細胞和生殖細胞經(jīng)組培獲得的愈傷組織基因型不同,B錯誤;動物克隆的技術(shù)基礎是動物的細胞和組織培養(yǎng),為了防止細胞培養(yǎng)過程中細菌的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素,C、D正確。 3.對于下面制備單克隆抗體過程示意圖,不正確的敘述是(　　) A.①表示已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均是從小鼠的脾臟中提取的 B.②促進細胞融合的方法可以利用聚乙二醇介導 C.④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的 D.⑤可以無限增殖 答案　A　已免疫的B淋巴細胞可以從小鼠的脾臟中提取,也可以從血漿中提取,骨髓瘤細胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用漿細胞和骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞獲得的,動物細胞融合可以用化學方法——聚乙二醇,生物方法——滅活病毒等。如果要篩選能產(chǎn)生特定抗體的細胞群,可以通過抗原—抗體反應。融合細胞既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。 4.下圖是利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)治療遺傳性糖尿病(基因缺陷導致胰島B細胞不能正常合成胰島素)的過程設計圖解。請據(jù)圖回答: (1)圖中①、②所示的結(jié)構(gòu)分別是　　　　、　　　　。 (2)圖中③、④所示的生物工程技術(shù)分別是　　　　　　、　　　　　　　。 (3)過程③通常用去核卵細胞作受體細胞的原因除了它體積大、易操作,含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富外,還因為它　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (4)過程④通常采用的方法是　　　　　　　　。 (5)過程④的完成需要用到的非酶基因操作工具為　　　　　　　。 (6)圖示方法與一般的異體移植相比最大的優(yōu)點是　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)細胞核　內(nèi)細胞團　(2)(體細胞)核移植技術(shù)　基因工程(轉(zhuǎn)基因技術(shù)或DNA重組技術(shù))　(3)含有促進(或激活)細胞核全能性表達的物質(zhì)　(4)顯微注射法　(5)載體 (6)不發(fā)生免疫排斥反應 解析　(1)體細胞核移植利用體細胞的細胞核和去核卵細胞。內(nèi)細胞團細胞具有發(fā)育的全能性,其中導入健康胰島B細胞基因,可以形成能正常分泌胰島素的胰島B細胞群。(2)圖中③是將體細胞的細胞核和去核卵細胞重組為一個細胞,為體細胞核移植技術(shù)。圖中④是將健康胰島B細胞基因?qū)胧荏w細胞,為基因工程技術(shù)。(3)過程③通常用去核卵細胞作為受體細胞,除了因為它體積大,易操作,含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富外,還因為其含有能夠激活細胞核全能性表達的物質(zhì)。(4)將目的基因?qū)雱游锛毎ǔＳ蔑@微注射法。(5)基因工程的基本工具為限制酶、DNA連接酶、載體,載體為非酶基因操作工具,通常為質(zhì)粒。(6)圖示方法與一般的異體移植相比可避免免疫排斥。 5.下圖表示細胞工程的流程圖(a、b表示過程),請據(jù)圖回答下列問題: (1)若圖示為動物細胞融合的過程,則a特有的誘導劑是　　　　　　　　　。以動物細胞融合為基礎發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)為制造單克隆抗體開辟了新途徑,通過把能產(chǎn)生抗體的　　　　　　細胞與能在體外大量增殖的　　　　　　細胞進行融合,得到既能迅速大量繁殖,又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞。 (2)若圖示為植物體細胞雜交過程,則在甲、乙融合之前,需要用　　　　　　　　　　(填工具酶)制備　　　　　　。這項工程的意義是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)由甲乙融合得到丙細胞的基本原理是　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)滅活的病毒　B淋巴(漿)　骨髓瘤　(2)纖維素酶和果膠酶　原生質(zhì)體　克服有性雜交遠緣不親和障礙,擴大親本組合的范圍　(3)細胞膜的流動性 解析　(1)若a是誘導動物細胞融合,則特有的誘導劑是滅活的病毒。在單克隆抗體的制備過程中,利用已免疫的B細胞與骨髓瘤細胞融合,形成雜交瘤細胞,該細胞既可以迅速大量增殖,又可以產(chǎn)生專一性抗體。(2)在植物體細胞雜交過程中,需要對甲乙細胞先用纖維素酶和果膠酶去壁,然后再誘導甲乙的原生質(zhì)體融合。該技術(shù)可以克服有性雜交遠緣不親和障礙,擴大親本組合的范圍。(3)甲乙細胞融合形成丙細胞,利用了細胞膜的流動性。 6.“生物導彈”可用于殺死人類某些癌細胞。制備“生物導彈”是單克隆抗體的重要應用之一,其過程如圖所示: (1)在①~⑤批量生產(chǎn)A蛋白抗原的過程中,要快速獲得大量的A基因可采用　　　　技術(shù)。在該技術(shù)中,解旋的方法是　　　　　　　;過程③所用的方法是　　　　　　;④過程一般選擇發(fā)育良好的　　　　　　　　　　　　　　　　,移植到受體牛的子宮中。 (2)在⑥~⑨批量生產(chǎn)“生物導彈”的過程中,⑦過程所用的“脾臟中的細胞”為　　　　　　　　　　　　　。⑦過程區(qū)別于植物體細胞雜交技術(shù)所特有的誘導因素是　　　　　　　　,要得到所需的雜交瘤細胞要經(jīng)過　　　　次篩選,最終篩選出的雜交瘤細胞的特點是　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)PCR　高溫處理　顯微注射法　桑椹胚或囊胚 (2)已免疫的B細胞(或漿細胞)　滅活的病毒　2　既能迅速大量繁殖,又能產(chǎn)生專一(或特異)抗體 解析　據(jù)圖分析可知,①表示目的基因的獲取,②表示基因表達載體的構(gòu)建,③表示將目的基因?qū)胧荏w細胞,④表示早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植,⑤表示用轉(zhuǎn)基因牛大量生產(chǎn)A蛋白質(zhì),⑥表示將抗原注入小鼠體內(nèi),⑦表示已免疫的B細胞與骨髓瘤細胞融合,⑧表示篩選、檢測并獲得大量所需要的雜交瘤細胞,最終獲得單克隆抗體,⑨表示把抗癌細胞的單克隆抗體跟放射性同位素、化學藥物或細胞毒素相結(jié)合,制成“生物導彈”。(1)通常采用PCR技術(shù)快速獲得大量的目的基因;DNA分子受熱變性后可解鏈為單鏈,所以在PCR技術(shù)中,用高溫處理的方法進行解旋;將目的基因?qū)雱游锏氖芫?常用的方法是顯微注射法;胚胎移植過程中,一般選擇發(fā)育良好的桑椹胚或囊胚,移植到受體牛的子宮中。(2)將抗原注射到小鼠體內(nèi),小鼠會產(chǎn)生體液免疫反應,在該小鼠的脾臟中會出現(xiàn)一些能產(chǎn)生相應抗體的已免疫的B細胞(或漿細胞),設法將這些細胞與小鼠的骨髓瘤細胞融合,再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選,和進一步的克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,最終會得到既能迅速大量繁殖、又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞,進而制備單克隆抗體。因此⑦過程所用的“脾臟中的細胞”為已免疫的B細胞(或漿細胞);動物細胞融合過程區(qū)別于植物體細胞雜交技術(shù)所特有的誘導因素是滅活的病毒;要得到所需的雜交瘤細胞要經(jīng)過2次篩選。 7.苦蕎富含黃酮類化合物等營養(yǎng)物質(zhì),在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS) 是黃酮類化合物合成的關鍵酶,如圖為將CHS基因?qū)肟嗍w,培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。 (1)基因工程的核心是　　　　　　　　　　　　。 (2)可利用　　　　　　　　、　　　　　　　方法獲取CHS基因。 (3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是　　　　　。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是　　　　　　　　　　。 (4)過程②③分別是　　　　　　　　　?？嗍w細胞能被培養(yǎng)成植株的根本原因是　　　　　　　　　　　　　。 (5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植株,還可將該植物幼葉消毒后,用　　　　　　　　　　酶混合液處理,獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇,其作用是　　　　　　。將目的基因?qū)朐|(zhì)體,經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織,再通過　　　　得到分散的胚性細胞,發(fā)育成　　　　,生長發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。 (6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會喪失細胞全能性的表達能力,下列原因錯誤的是　　　　。(填選項編號) A.愈傷組織發(fā)生遺傳變異 B.愈傷組織不能分散成單細胞 C.愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變 D.愈傷組織對外源激素敏感性發(fā)生改變 答案　(1)構(gòu)建重組DNA分子　(2)從基因文庫獲取、化學方法合成、PCR合成(任答兩項即可)　(3)限制性核酸內(nèi)切酶 能識別特定的核苷酸序列并在特定的切點上切割DNA分子　(4)脫分化、再分化　植物細胞的全能性(細胞中含有發(fā)育成完整個體所必需的全部基因)　(5)纖維素酶和果膠(寫全才得分)　維持滲透壓　液體懸浮培養(yǎng)　胚狀體　(6)B 解析　(1)基因工程的核心是構(gòu)建基因表達載體(即重組DNA分子)。(2)獲取目的基因的方法有:從基因文庫獲取、化學方法合成、PCR合成。(3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶),它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是限制酶能識別特定的核苷酸序列并在特定的切點上切割雙鏈DNA分子。(4)過程②是脫分化形成愈傷組織,過程③是再分化形成試管苗?？嗍w細胞能被培養(yǎng)成植株的根本原因是植物細胞的全能性(細胞中含有發(fā)育成完整個體所必需的全部基因)。(5)由植物細胞獲得原生質(zhì)體,需要用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁。處理過程中酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇,其作用是維持滲透壓,防止原生質(zhì)體過度吸水或者失水死亡。將目的基因?qū)朐|(zhì)體,經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織,再通過液體懸浮培養(yǎng)得到分散的胚性細胞,發(fā)育成胚狀體,生長發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會喪失細胞全能性的表達能力,可能的原因有愈傷組織發(fā)生遺傳變異,愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變,愈傷組織對外源激素敏感性發(fā)生改變等,所以本題選B。