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藥理學(xué)實驗設(shè)計及基本知識,,實驗：科學(xué)上為闡明某一現(xiàn)象,而創(chuàng)造特定的條件,以便觀察它的變化和結(jié)果的過程 實驗設(shè)計：根據(jù)目的和條件，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)要求，針對實驗研究的全過程，做出計劃安排。 好的實驗設(shè)計較少的人力、物力和時間，獲得豐富、可靠資料，把誤差減少到最少，保證成果資料正確。,一、實驗設(shè)計的基本原則,對照原則(control) 隨機化原則(randomization) 重復(fù)原則(replication),目的： 顯露處理因素的效應(yīng)； 排除非實驗因素的影響，消除實驗誤差 保證實驗結(jié)果的可比性和實驗結(jié)論的正確性,（一）對照原則,常用對照方法：,1、正常對照：是指在實驗中采用與實驗組相同的條 件，但不加實驗因素的對照組。 2、陽性對照：是指選用與受試品近似且已知的有效藥 物作對照。 3、自身對照：在同一受試個體上進行處理前后的比 較，或者兩種處理一前一后的比較。 4、模型對照：復(fù)制疾病模型，與實驗組進行比較。 5、溶劑對照：當(dāng)受試品需要在特殊溶劑中溶解時應(yīng)設(shè) 立溶劑對照組，以排除溶劑對實驗結(jié)果 的影響。,隨機化（randomization）是指按照機遇的原則進行抽樣或分組，使各受試對象被分配到各組的機會均等，而不受主觀因素的影響。 隨機化的方法有抽簽法、拋硬幣法、隨機數(shù)字表等。,（二）隨機化原則,(1)編號：將n個受試對象編號，動物可按體重大小，患者可按就診順序。 (2)取隨機數(shù)：可從隨機數(shù)字表或計算器或計算機獲得。每個受試對象獲得的隨機數(shù)可是一位數(shù)，也可是兩位數(shù)或三位數(shù)，一般要求與n的位數(shù)相同。 (3)確定組別：根據(jù)受試對象獲得的隨機數(shù)決定受試對象在哪一組。分兩組可按隨機數(shù)的奇偶；分k組可按隨機數(shù)除以k后的余數(shù)進行分組。,隨機數(shù)字表法,Sample： 試將同性別、體重相近的30只動物分到A、B、C三組。 先將動物按體重編號，再從隨機數(shù)字表中任一行如第16行最左開始連續(xù)取30個兩位數(shù)字。最后將這30個兩位數(shù)字分別除以3，余數(shù)0、1、2分別對應(yīng)于A、B、C三組,隨機數(shù)字表,重復(fù)是指在相同實驗條件下進行多次研究或多次觀察。 重復(fù)原則包括兩個含義： 一是實驗必須有足夠的樣本數(shù)或例數(shù)，在一次實驗中有充分的重復(fù)； 二是要使實驗結(jié)果可靠，必須多次重復(fù)實驗。也就是說，實驗要有一定的次數(shù)。,（三）重復(fù)原則,實驗?zāi)康暮鸵饬x 實驗材料和試劑 實驗對象 實驗方法和步驟 實驗結(jié)果預(yù)測 數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計分析,二、實驗設(shè)計的內(nèi)容,明確本實驗確立的理論依據(jù)、研究目的、研究的必要性和可行性，指出擬解決的中心問題。,（一）實驗?zāi)康暮鸵饬x,（二）實驗材料和試劑 寫明實驗中需要的儀器、材料、試劑的品種、規(guī)格和數(shù)量。,（三）實驗對象 或稱研究對象是處理因素作用的客體，是根據(jù)研究目的確定的研究總體。 研究目的不同, 醫(yī)學(xué)研究的對象可以是人、動物和植物，也可以是某個器官、細胞和血清等生物材料。 常用動物：小白鼠、大白鼠、家兔、蟾蜍、豚鼠、貓和狗?？筛鶕?jù)實驗內(nèi)容及觀察指標(biāo)的不同進行選擇。,對實驗對象作嚴格的規(guī)定，以保證其同質(zhì)性(homogeneity)和代表性 同質(zhì)性：動物的種類、品系、年齡、性別、體重、窩別和營養(yǎng)狀況等。人群的性別、年齡、民族、職業(yè)、文化程度和經(jīng)濟狀況、病情和病程等。 代表性：隨機抽樣,受試對象應(yīng)滿足兩個基本條件：一是對處理因素敏感；二是反應(yīng)必須穩(wěn)定。 選擇受試對象應(yīng)明確其納入標(biāo)準(inclusion criteria)和排除標(biāo)準(exclusion criteria)。,（四）實驗方法和步驟 1、實驗分組 根據(jù)實驗內(nèi)容的不同，選擇不同的分組方法。 正常組、陽性（藥物）對照組、實驗組 正常組、模型組、陽性（藥物）對照組、實驗組,,2、觀察指標(biāo)與實驗方法的選擇 適宜的觀察指標(biāo)應(yīng)具備下列基本條件： （1）特異性：即能特異性地代表所研究問題的本質(zhì)。 （2）客觀性：盡量選擇客觀性指標(biāo)，減少實驗者主觀因素對結(jié)果的影響。 （3）穩(wěn)定性：穩(wěn)定性好的觀察指標(biāo)才能據(jù)實反映實驗結(jié)果，才真實可靠。 （4）可行性。,實驗方法按照不同的分類方法有： 生物化學(xué)實驗方法、免疫學(xué)實驗方法、整體動物實驗方法、離體實驗方法、細胞水平實驗方法等。,動物整體實驗： 在動物身上復(fù)制人類疾病模型.在動物身上進行研究。可嚴格控制條件，進行深入研究。 局限性：種屬差異（代謝，意識），所得結(jié)論不能馬上用于臨床。還需要臨床驗證。 離體實驗 細胞、組織體外培養(yǎng)。更可嚴格控制條件，進行深入研究。 局限性：人是有神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的由細胞組成器官，進而系統(tǒng)，進而形成一個有機的整體。,人類疾病動物模型分類： （1）自發(fā)性： 如自發(fā)性高血壓大鼠，LDL受體缺陷高膽固醇血癥家兔。價值高，價格高。 （2）誘發(fā)性： 可以任意復(fù)制（時間、數(shù)量），實驗條件易控制,，如食餌性動脈粥樣硬化動物模型。結(jié)扎冠狀動脈復(fù)制急性心梗模型 （3）基因工程動物 轉(zhuǎn)基因（transgenic）動物 基因敲除（gene knockout）動物 基因替換小鼠（gene knockin）動物,實驗方法的選擇應(yīng)遵循以下幾點： （1）先進性：根據(jù)研究目的，在實驗條件允許的范圍內(nèi)，盡量選擇先進的實驗方法。 （2）經(jīng)典性：盡可能選擇已得到大家公認的、穩(wěn)定可靠的實驗方法。 （3）創(chuàng)新性：可對原有實驗方法進行創(chuàng)新和改良，以達到本實驗要求。 （4）協(xié)同性：所選實驗方法應(yīng)相互補充、相互印證，能充分證明結(jié)論。,（五）實驗結(jié)果預(yù)測 根據(jù)所學(xué)知識對實驗結(jié)果做出理論上的判斷，做到心中有數(shù)。 （六）數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計分析 根據(jù)實驗分組情況及實驗方法，明確用何種統(tǒng)計學(xué)方法進行數(shù)據(jù)處理。,實驗報告的書寫,1、題目 2、目的 3、原理 4、材料：實驗動物，器材，藥品 5、方法：用自己的語言簡單扼要描述出來 6、結(jié)果：要求真實、清楚 7、討論：將實驗結(jié)果進行比較、分析；實 驗中有哪些不足之處；結(jié)果異常 或失敗原因 8、結(jié)論：將實驗結(jié)果進行歸納總結(jié)，應(yīng)帶 有提示性質(zhì)。,,（一）、動物的選擇 （二）、實驗動物的編號 （三）、麻醉藥的選擇 （四）、動物捉拿及固定方法 （五）、動物的給藥方法,1、 小白鼠,適用于需大量動物的實驗，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測定。也較適用于避孕藥實驗、抗炎鎮(zhèn)痛藥實驗、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實驗、抗腫瘤藥及抗衰老藥實驗等。,2、 大白鼠,比較適用于抗炎藥物實驗，血壓測定、利膽、利尿藥實驗，也可用于進行亞急性和慢性毒性實驗。,3、豚鼠,因其對組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實驗。也常用于離體心臟、心房、腸管實驗。又因它對結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實驗。,4、家兔,常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實驗，用于熱原檢查。,5、狗,狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對胃腸蠕動和分泌的影響。在進行慢性毒性實驗時，也常采用狗。,,狗、兔等較大的動物可用特制的鋁質(zhì)號碼牌固定在頸部或耳上。大鼠、小鼠如為白色可用黃色苦味酸在不同的體表標(biāo)志上標(biāo)記。,,⑴ 局部麻醉：常采用2％普魯卡因做皮下浸潤注射，可用于局部手術(shù)。 ⑵ 全身麻醉： ① 吸入麻醉：可將乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩內(nèi)，利用乙醚揮發(fā)的性質(zhì)，經(jīng)肺泡吸收，作用較快，適用于小鼠、大鼠短時間麻醉。 ② 注射麻醉：常用戌巴比妥鈉和烏拉坦。,,⑴ 小白鼠 右手抓住其尾部放在鼠籠蓋鐵紗網(wǎng)上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起頸背部皮膚，并以左手的小指、無名指固定其尾部，便可將小鼠固定在手上。 ⑵ 大白鼠 用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其頭部，其余三指夾住背腹部即可固定。 ⑶ 豚鼠 豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。、 ⑷ 家兔 可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢。在進行仰位手術(shù)操作時，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺上。頭部用兔頭固定夾固定。,1、小白鼠,① 灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，頸部伸直。右手持配有灌胃針頭的注射器，自口角插入口腔，再從舌面沿上腭進入食道。小鼠灌胃容量一般為0.1～0.3m1／10g。 ② 腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角將針頭從下腹部向頭端刺入腹腔。進針部位不宜過高，刺入不宜太深，以免傷及內(nèi)臟。小鼠腹腔注射量一般為0.1～0.3ml／l0g。 ③ 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮膚處進針即可。 ④ 靜脈注射(i.v.)：將小鼠置于特制的固定筒內(nèi)或倒置大漏斗下，讓其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部或?qū)⑹笪?0'C熱水浸泡半分鐘使血管擴張。左手拉尾端，右手持注射器將針頭刺入尾靜脈，推入藥液。,2、家兔,① 灌胃：需兩人合作進行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號導(dǎo)尿管從開口器中部小孔插入食道。插管時如誤入氣管會出現(xiàn)動物的掙扎和呼吸困難。。當(dāng)判明導(dǎo)尿管在食道以內(nèi)后，用注射器接通導(dǎo)尿管將藥液推入。 ② 皮下、腹腔注射：給藥方法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量小鼠可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5～1.0/mg，腹腔為1.0～5.0ml/mg。 ③ 靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指墊在兔耳注射處的下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當(dāng)確認針頭在血管中后，將藥液推入。,謝謝伶聽， 祝大家健康開心每一天！,