浙江2018屆高三生物專題復(fù)習(xí)題型增分練四、加試非選擇題（打包6套）新人教版.zip,浙江,2018,屆高三,生物,專題,復(fù)習(xí),題型,增分練四,加試,選擇題,打包,新人 四、加試非選擇題(32～33題)專練 加試特訓(xùn)1　生物技術(shù)實(shí)踐(A) 1．尿素是一種高濃度氮肥且長(zhǎng)期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細(xì)菌的分解作用，才能被植物吸收利用。某同學(xué)要分離出土壤中能分解尿素的細(xì)菌，并嘗試進(jìn)行計(jì)數(shù)，培養(yǎng)基配方如下： K2HPO4 NaCl H2O 葡萄糖 尿素 酚紅 瓊脂 0.12 g 0.12 g 15 mL 0.025 g 2.0 g 0.25 mg 0.5 g (1)分解尿素的細(xì)菌都能合成________，該種細(xì)菌在生態(tài)平衡中起到______________的作用。 (2)根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學(xué)能否分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌？________(填“能”或“不能”)，原因是_______________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)分離得到分解尿素的細(xì)菌后，如果要擴(kuò)大培養(yǎng)，則應(yīng)選擇________培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)一段時(shí)間后，使用________對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)過程中，下列哪種行為會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性________。 A．計(jì)數(shù)時(shí)直接從靜置培養(yǎng)的試管底部取培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù) B．如果方格內(nèi)微生物細(xì)胞數(shù)量多于300個(gè)，培養(yǎng)液先稀釋后再計(jì)數(shù) C．如果微生物細(xì)胞有粘連，要數(shù)出團(tuán)塊中的每一個(gè)細(xì)胞 D．壓在方格線上的細(xì)胞只計(jì)左線和上線上的細(xì)胞數(shù) 答案　(1)脲酶　參與氮循環(huán)(或維持氮平衡)　(2)不能　瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能選擇出只以尿素為氮源的微生物　(3)液體　血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　A 解析　分解尿素的細(xì)菌都能合成脲酶，因此可以選用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來分離尿素分解菌，并且用瓊脂糖來代替瓊脂作為微生物培養(yǎng)基的固化劑，這樣就使培養(yǎng)基中只含有尿素這一種含氮化合物，有利于對(duì)這種細(xì)菌的篩選。(1)含有脲酶的細(xì)菌將尿素降解為氨作為其生長(zhǎng)的氮源，從而也起到維持生物圈氮元素平衡的作用。(2)因?yàn)榄傊且环N未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物，不利于目的菌的篩選，所以該培養(yǎng)基不能分離出分解尿素的細(xì)菌。(3)擴(kuò)大培養(yǎng)需要使用液體培養(yǎng)基，微生物的計(jì)數(shù)可以采用涂布分離法或利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行顯微計(jì)數(shù)，結(jié)合后續(xù)選項(xiàng)可以看出本題采用的是后者。計(jì)數(shù)過程需要注意操作規(guī)范，如A選項(xiàng)所述的操作會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，計(jì)數(shù)前應(yīng)該把試管上下倒轉(zhuǎn)數(shù)次，使細(xì)菌分布均勻，再取培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)。 2．某市葡萄種植基地為解決葡萄滯銷易腐爛問題，引進(jìn)果酒、果醋生產(chǎn)線進(jìn)行葡萄的深加工，獲得了較好的效益，其生產(chǎn)流程如圖所示，據(jù)圖回答： (1)在篩選菌種A時(shí)，需要在接種前用________________法對(duì)葡萄果汁進(jìn)行滅菌。 (2)在純化菌種A時(shí)接種了5個(gè)平板，每個(gè)平板均接種了0.1 mL樣品并培養(yǎng)。其中乙平板的菌落分布如圖，純化菌種A的接種方法是____________，推測(cè)出現(xiàn)平板乙可能的操作失誤是________________。 (3)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和____________。 (4)將葡萄加工成果汁時(shí)，為提高果汁的產(chǎn)量和品質(zhì)，應(yīng)加入適量的______酶，該酶能破壞植物細(xì)胞的________(填細(xì)胞結(jié)構(gòu))。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌　(2)涂布分離法　涂布不均勻(3)細(xì)胞分裂素　(4)果膠(果膠酶和纖維素)　細(xì)胞壁 解析　(1)培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。(2)分析圖乙中培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果，培養(yǎng)基中的菌落沒有呈線形分布，可以推知采用的純化方法是涂布分離法；由于菌落有聚集現(xiàn)象，可以推知平板乙可能的操作失誤是涂布不均勻，導(dǎo)致菌落分布不均勻。(3)進(jìn)行植物組織培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中常常添加的植物激素有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。(4)果膠酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等，它們能催化果膠的分解，水解植物細(xì)胞壁，從而使果汁變得澄清，提高產(chǎn)量和品質(zhì)。 3．(2017·浙江模擬)如圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請(qǐng)回答下列問題： (1)該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基應(yīng)該含有________(多選)。 A．尿素 B．氯化鈉 C．葡萄糖 D．瓊脂糖 (2)尿素溶液可用________________使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)圖中步驟C為________。相對(duì)于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點(diǎn)是________________________________________________________________________。 (4)如果菌落周圍出現(xiàn)________色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶。 答案　(1)ABCD　(2)G6玻璃砂漏斗過濾　將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無菌落出現(xiàn)(3)倒平板　單菌落更易分開　(4)紅 解析　(1)分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)微生物，因此培養(yǎng)基中應(yīng)該加入有機(jī)碳源，如葡萄糖；分離分解尿素的細(xì)菌培養(yǎng)基從功能上分應(yīng)屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)該以尿素為唯一氮源；從物理性質(zhì)上分應(yīng)屬于固體培養(yǎng)基，因此應(yīng)加入凝固劑瓊脂糖。故選：ABCD。(2)尿素溶液可用G6玻璃砂漏斗過濾使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無菌落出現(xiàn)。(3)圖中步驟C為倒平板。相對(duì)于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點(diǎn)是單菌落更易分開。(4)如果菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶，脲酶分解尿素產(chǎn)生氨，使pH升高，酚紅指示劑顏色發(fā)生變化。 4．多環(huán)芳烴菲在染料、殺蟲劑等生產(chǎn)過程中被廣泛使用，是土壤、河水中常見的污染物之一。下圖表示科研人員從被石油污染的土壤中分離獲得能降解多環(huán)芳烴菲的菌株Q的主要步驟。請(qǐng)回答： (1)步驟①→③的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中加入多環(huán)芳烴菲作為唯一碳源，目的是__________________________。 (2)步驟①→③的培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能__________________________。 (3)步驟④用劃線分離法純化菌株Q的過程中，在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是__________________________。采用固體平板培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)的目的是________________________________。 (4)接種環(huán)通過灼燒來滅菌，完成步驟④中劃線操作，共需灼燒接種環(huán)________(A.4　B．5　C．6　D．7)次。 (5)為了獲得分解多環(huán)芳烴菲能力更強(qiáng)的菌株，研究人員又對(duì)菌株Q進(jìn)行了誘變處理，得到突變株K。為了比較兩種菌株降解多環(huán)芳烴菲的能力，設(shè)計(jì)了下列實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)步驟： ①取9只錐形瓶均分成3組，編號(hào)A、B、C。 ②向9只錐形瓶中分別加入________________為唯一碳源的培養(yǎng)液。 ③向A、B、C 3組培養(yǎng)液中分別加入______________________________________________。 ④28℃恒溫培養(yǎng)3天后，測(cè)定錐形瓶中多環(huán)芳烴菲的降解率。 答案　(1)篩選出菌株Q　(2)增加培養(yǎng)液中的溶氧量　(3)線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處少(或能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落)　防止冷凝后形成水珠滴在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基　(4)C　(5)②等量的多環(huán)芳烴菲?、鄣攘康臒o菌水、菌株Q菌液和突變株K菌液 5．回答下列關(guān)于微生物和酶的問題。 高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示： (1)①過程稱為________，②過程是為了________________。 (2)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基稱為________________(按功能分)；該培養(yǎng)基中除了加入淀粉外，還需加入另一種重要的營(yíng)養(yǎng)成分____(A.瓊脂　B．葡萄糖　C．硝酸銨　D．碳酸氫鈉)。 (3)一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，其中“高壓”是為了_____________________。在高溫淀粉酶運(yùn)用到工業(yè)生產(chǎn)前，需對(duì)該酶作用的最佳溫度范圍進(jìn)行測(cè)定。圖中的曲線①表示酶在各種溫度下酶活性相對(duì)最高酶活性的百分比。將酶在不同溫度下保溫足夠長(zhǎng)的時(shí)間，再在酶活性最高的溫度下測(cè)其殘余酶活性，由此得到的數(shù)據(jù)為酶的熱穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，即圖中的曲線②。 (4)根據(jù)圖中的數(shù)據(jù)，判斷該酶使用的最佳溫度范圍是________(A.40～50 ℃　B．50～60 ℃　C．60～70 ℃D.70～80 ℃)。 (5)據(jù)圖判斷下列敘述錯(cuò)誤的是________。 A．該酶只能在最佳溫度范圍內(nèi)測(cè)出活性 B．曲線②35 ℃數(shù)據(jù)點(diǎn)是在80 ℃時(shí)測(cè)得的 C．曲線①表明80 ℃是該酶活性最高的溫度 D．曲線②表明該酶的熱穩(wěn)定性在70 ℃之后急劇下降 答案　(1)稀釋　分離純化嗜熱菌　(2)選擇培養(yǎng)基　C(3)殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌芽孢　(4)C　(5)A 6．(2017·臺(tái)州模擬)某研究小組欲用蘋果汁為原料，利用發(fā)酵瓶制作果酒和果醋，請(qǐng)分析回答： (1)將蘋果汁放入發(fā)酵瓶時(shí)，要預(yù)留約________的空間。為得到酒精和糖含量較高的果酒，可在果汁中加入一定比例的________。若發(fā)酵瓶?jī)?nèi)持續(xù)無氣泡產(chǎn)生，則需加入更多的________，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。 (2)變酸的果酒表面有一層醋化醋桿菌形成的菌膜，若要在該菌膜中篩選出高表達(dá)量的醋化醋桿菌菌株，可通過獲得____________的方法來分離篩選。若要統(tǒng)計(jì)獲得菌種的數(shù)目，則常采用____________法。對(duì)獲得的優(yōu)質(zhì)醋化醋桿菌菌種常用劃線法接種在固體培養(yǎng)基________上低溫保存。 (3)如圖是果酒和果醋的發(fā)酵裝置，關(guān)于果醋發(fā)酵敘述錯(cuò)誤的是________。 A．發(fā)酵前，瓶?jī)?nèi)酒－水混合物的pH需調(diào)至7.0 B．發(fā)酵過程中，充氣口要適時(shí)適量充氣 C．發(fā)酵過程中，排氣口排出醋酸發(fā)酵產(chǎn)生的CO2 D．發(fā)酵完成后，出料口的pH值不再減少 答案　(1)1/3　蔗糖　酵母菌　(2)單菌落　涂布分離　斜面　(3)C 解析　(1)將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留大約1/3的空間，并封閉充氣口。為得到酒精和糖含量較高的果酒，可在果汁中加入一定比例的蔗糖。若發(fā)酵瓶?jī)?nèi)持續(xù)無氣泡產(chǎn)生，則需加入更多的酵母菌，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。(2)變酸的果酒表面有一層醋化醋桿菌形成的菌膜，若要在該菌膜中篩選高表達(dá)量的醋化醋桿菌菌株，可通過獲得單菌落的方法來分離篩選。接種微生物常用劃線分離法和涂布分離法，其中涂布分離法可以統(tǒng)計(jì)獲得菌種的數(shù)目。對(duì)獲得的優(yōu)質(zhì)醋化醋桿菌菌種常用劃線法接種在固體培養(yǎng)基斜面上低溫保存。(3)將酒－水混合物pH調(diào)至7.0有利于醋化醋桿菌生長(zhǎng)與繁殖，縮短發(fā)酵時(shí)間，因此發(fā)酵前，瓶?jī)?nèi)酒－水混合物的pH需調(diào)至7.0，A正確；醋化醋桿菌是嗜氧菌，因此發(fā)酵過程中，充氣口要適時(shí)適量充氣，B正確；醋化醋桿菌發(fā)酵不會(huì)產(chǎn)生二氧化碳，發(fā)酵過程中，排氣口排出含氧量較少的空氣，C錯(cuò)誤；發(fā)酵完成后，不會(huì)有醋酸再產(chǎn)生，因此出料口的pH值不再減少，D正確。 7．葡萄收獲的季節(jié)性較強(qiáng)，并且不易運(yùn)輸，易造成積壓，腐爛變質(zhì)。為了解決上述問題且滿足不同人群的需求，可以將其加工制作成果汁、果酒、果醋等。圖1是簡(jiǎn)單的生產(chǎn)流程圖，結(jié)合所學(xué)知識(shí)回答下列問題： 圖1 (1)果膠酶的使用過程①中，需要對(duì)酶的活性、酶的用量進(jìn)行研究。在圖2甲、乙兩個(gè)曲線中，果膠酶活性受環(huán)境因素影響的變化曲線是________；乙曲線中縱軸還可以用_____________來表示。自變量X可以代表____________；自變量Y可以代表____________。 圖2 (2)果膠酶的最適用量是圖2中的____點(diǎn)對(duì)應(yīng)的量。 (3)③→⑤過程中不用滅菌一般也不會(huì)受到雜菌的污染，原因是____________________ ________________________________________________________________________。 (4)果酒和果醋的制作過程相比，從發(fā)酵條件來看，二者不同之處是____。 A．都需要氧氣 B．都不需要氧氣 C．前者需要氧氣，后者不需要氧氣 D．前者不需要氧氣，后者需要氧氣 答案　(1)甲　過濾得到的果汁體積　溫度、pH等　果膠酶的濃度(或用量)　(2)B　(3)培養(yǎng)液中缺氧環(huán)境及酵母菌產(chǎn)生的乙醇能抑制絕大多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖　(4)D 解析　(1)果膠酶的活性受溫度、pH等條件的影響，每一種酶的最適pH和最適溫度是一定的。衡量實(shí)驗(yàn)結(jié)果的指標(biāo)有兩種，一個(gè)是果汁的量，另一個(gè)是果汁的澄清度。(2)果膠酶的最適用量是過濾得到果汁澄清度最高時(shí)對(duì)應(yīng)的最小酶量，B點(diǎn)后酶量增加而澄清度不再增加，因此B點(diǎn)對(duì)應(yīng)的量為最適用量。(3)缺氧條件不利于大多數(shù)細(xì)菌的生存，同時(shí)乙醇有殺菌作用。(4)酒精發(fā)酵為厭氧發(fā)酵，醋酸發(fā)酵為需氧發(fā)酵。 8．請(qǐng)回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)、發(fā)酵過程中的相關(guān)問題： (1)在“分離以尿素為氮源的微生物”的實(shí)驗(yàn)中，配制好的尿素固體培養(yǎng)基加上封口膜后用________________方法滅菌，冷卻后加入用G6玻璃砂漏斗過濾的尿素溶液。玻璃砂漏斗用后需用適宜濃度的________浸泡，再用________沖洗，干燥后保存。 (2)在“果汁中的果膠和果膠酶”實(shí)驗(yàn)中，可以用________(A.50%的乙醇　B．70%的乙醇　C．90%的乙醇　D．95%的乙醇)鑒別果膠。果膠酶可以從黑曲霉或________中提取，配制這些微生物的培養(yǎng)基時(shí)需要將pH調(diào)至________。 (3)在“用果汁制作果酒”實(shí)驗(yàn)中，為了增加果酒的含糖量，可以在發(fā)酵瓶中加入一定量的________。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌　HCl　蒸餾水　(2)D　蘋果青霉　中性偏酸　(3)蔗糖 解析　(1)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌。玻璃砂漏斗用后需用適宜濃度的HCl浸泡，再用蒸餾水沖洗，干燥后保存。(2)在“果汁中的果膠和果膠酶”實(shí)驗(yàn)中，可以用95%的乙醇鑒別果膠。果膠酶可以從黑曲霉或蘋果青霉中提?。缓谇够蛱O果青霉都屬于真菌，配制真菌的培養(yǎng)基時(shí)需要將pH調(diào)至中性偏酸。(3)在“用果汁制作果酒”實(shí)驗(yàn)中，為了增加果酒的含糖量，可以在發(fā)酵瓶中加入一定量的蔗糖。 7 加試特訓(xùn)2　生物技術(shù)實(shí)踐(B) 1．某研究小組利用酵母菌發(fā)酵葡萄生產(chǎn)葡萄酒?；卮鹣铝袉栴}： (1)欲從土壤中分離野生型酵母菌，最好采用________法進(jìn)行接種，經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基上微生物的________，從中選出酵母菌。 (2)為提高生產(chǎn)效率，做了對(duì)比實(shí)驗(yàn)。甲發(fā)酵罐中保留一定量的氧氣，乙發(fā)酵罐中沒有氧氣，其余條件相同且適宜，定期測(cè)得的數(shù)據(jù)如圖所示。 甲發(fā)酵罐提供氧氣的目的是______________________，12 h后，甲、乙兩發(fā)酵罐消耗的葡萄糖量之比為________(A.3∶4　B．4∶3　C．5∶3　D．3∶5)。實(shí)驗(yàn)后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，盡管酵母菌菌種合適、原料充足、操作正確、發(fā)酵溫度和pH適宜，但乙醇含量比預(yù)期低，可能的原因是________________________。 (3)在釀制葡萄酒時(shí)，加入果膠酶將果膠分解成可溶性的____________，瓦解植物的胞間層，可以提高果汁的出汁率，并使果汁澄清，提高葡萄酒的品質(zhì)。 答案　(1)劃線分離(或涂布分離)　菌落　(2)使酵母菌進(jìn)行需氧呼吸，快速繁殖　B　乙醇增多會(huì)抑制酵母菌的酒精發(fā)酵過程　(3)半乳糖醛酸 解析　(1)欲從土壤中分離野生型酵母菌，最好采用劃線分離法或涂布分離法進(jìn)行接種，經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基上微生物的菌落，從中選出酵母菌。(2)甲發(fā)酵罐提供氧氣的目的是使酵母菌進(jìn)行需氧呼吸，快速繁殖。由于甲發(fā)酵罐中含有一定量的氧氣，因此甲發(fā)酵罐中進(jìn)行需氧呼吸和酒精發(fā)酵，由題圖可知，甲發(fā)酵罐中的氧氣是6 mol，則需氧呼吸消耗的葡萄糖是1 mol，產(chǎn)生的乙醇是18 mol，則酒精發(fā)酵消耗的葡萄糖是9 mol，故消耗的葡萄糖共10 mol；乙發(fā)酵罐不含有氧氣，只進(jìn)行酒精發(fā)酵，產(chǎn)生的酒精是15 mol，則酒精發(fā)酵消耗的葡萄糖是7.5 mol。因此，甲、乙兩發(fā)酵罐消耗的葡萄糖之比為10∶7.5＝4∶3。實(shí)驗(yàn)后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，盡管酵母菌菌種合適、原料充足、操作正確、發(fā)酵溫度和pH適宜，但乙醇含量比預(yù)期低，可能的原因是乙醇增多會(huì)抑制酵母菌的酒精發(fā)酵過程。(3)果膠酶將果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸。 2．下列問題是有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答： (1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和____________作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的________。 (2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在________________中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)________后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行________，并將培養(yǎng)皿________放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及________________，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 (3)通常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)________的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定。 (4)關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是________。 A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上 (5)科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素，其過程如圖。由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為________，構(gòu)建得到丙時(shí)必需的工具酶有________________________。在此過程中，用來處理丁以增加細(xì)菌細(xì)胞壁通透性的化學(xué)試劑是________。 A．氯化鈉 B．氯化鈣 C．次氯酸鈉 D．纖維素酶 答案　(1)酵母提取物　NaCl　(2)LB液體培養(yǎng)基　稀釋　分離　倒置　無菌操作是否規(guī)范　(3)菌落　(4)D(5)重組質(zhì)粒(重組DNA分子)　限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶　B 解析　(1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。(2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(3)通常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進(jìn)行初步鑒定。(4)高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能直接打開放氣閥使壓力表指針回到零；倒平板過程中只能打開皿蓋的一邊，不能將皿蓋放在一邊，以防止雜菌污染；接種環(huán)在火焰上灼燒，待冷卻后才可以快速挑取菌落；用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上。(5)由目的基因甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為重組質(zhì)粒；構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，需先用限制性核酸內(nèi)切酶切割外源DNA分子和載體，再用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入微生物細(xì)胞時(shí)，常用氯化鈣來處理微生物細(xì)胞，以增加細(xì)胞壁通透性，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，有利于重組質(zhì)粒向內(nèi)部轉(zhuǎn)移。 3．請(qǐng)回答微生物篩選和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題： (1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從__________________環(huán)境采集。 (2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇____________的培養(yǎng)基，并在________條件下培養(yǎng)。 (3)為獲得一種能高效降解農(nóng)藥的細(xì)菌(目的菌)，向培養(yǎng)基中加入某種化合物，將初步篩選得到的目的菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基中，常采用的接種方法是____________；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉，這樣做是為了________________。 (4)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行________，接種前要進(jìn)行____________，在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進(jìn)行。 答案　(1)海灘等高鹽　(2)以淀粉為唯一碳源　高溫　(3)劃線分離法　防止造成環(huán)境污染　(4)pH調(diào)整　高壓蒸汽滅菌 4．果膠酶能分解果膠等物質(zhì)，澄清果蔬飲料，在食品加工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用。某興趣小組的同學(xué)對(duì)三種不同品牌的果膠酶制劑(制劑中果膠酶濃度相同)進(jìn)行了探究，其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表所示。 分組 蒸餾水(mL) 緩沖液(mL) 果汁(mL) 果膠酶制劑(mL) 果汁渾濁程度 甲 乙 丙 1 2 2 5 2 0 0 ＋ 2 2 2 5 0 2 0 ＋＋＋ 3 2 2 5 0 0 2 ＋＋ 4 X 2 5 0 0 0 Y 注：“＋”越多表示果汁越渾濁。 (1)表中X所代表的數(shù)值應(yīng)為__________，Y的果汁渾濁程度應(yīng)表示為______________(用若干個(gè)“＋”表示)。 (2)除了觀察果汁渾濁程度外，還可以通過檢測(cè)____________的變化量來判斷不同品牌果膠酶制劑的效果。若使用該方法，相關(guān)物質(zhì)變化量最大的是________組。 (3)微生物是生產(chǎn)果膠酶的優(yōu)良生物資源。分離和篩選能產(chǎn)生果膠酶的微生物，使用的培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一碳源；如需進(jìn)一步純化果膠酶，可根據(jù)果膠酶分子的___________(至少寫出兩點(diǎn))等特性進(jìn)行分離提純。由于果膠酶的活性容易受到外界環(huán)境因素的干擾，所以應(yīng)利用____________技術(shù)減少影響從而保護(hù)酶的活性。 答案　(1)4?。?或多于＋＋＋)　(2)反應(yīng)物(或“果膠”“半乳糖醛酸”“生成物”“產(chǎn)物”)　1　(3)果膠　形狀和大小(或“所帶電荷性質(zhì)和多少”“溶解度”“吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力”等)　固定化酶 解析　(1)對(duì)照實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循單一變量原則，要嚴(yán)格控制無關(guān)變量適宜且相同。由題中實(shí)驗(yàn)分組處理可知，第4組實(shí)驗(yàn)中沒有添加果膠酶制劑，為保證各組實(shí)驗(yàn)溶液體積相同，X應(yīng)為4；果膠酶能分解果膠等物質(zhì)以澄清果蔬飲料，故沒有添加果膠酶制劑的第4組的果汁渾濁程度應(yīng)當(dāng)最高。(2)果膠酶可水解果膠，可通過反應(yīng)中反應(yīng)物的減少量或生成物的生成量來表示果膠酶的作用效果。(3)果膠可作為微生物培養(yǎng)的碳源，并且果膠的水解需要果膠酶，故在分離和篩選能產(chǎn)生果膠酶的微生物時(shí)，要使用果膠作為唯一碳源的培養(yǎng)基。分離提純物質(zhì)一般根據(jù)其物質(zhì)的相關(guān)特性設(shè)置分離提純方法，如：“形狀和大小”“所帶電荷性質(zhì)和多少”“溶解度”“吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力”等。固定化酶技術(shù)能有效地減少外界環(huán)境對(duì)酶的影響。 5．如圖是泡菜的制作及測(cè)定亞硝酸鹽含量的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答： (1)制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜，原因是__________________________________。 (2)制備泡菜的鹽水中清水與鹽的質(zhì)量比約為4∶1，鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)泡菜的制作方法不當(dāng)，很容易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，試分析可能的原因(只要求寫一個(gè)原因)：_________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法是____________________，其原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生________反應(yīng)后，與________________________偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。 答案　(1)亞硝酸鹽的含量低　(2)加熱煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了保證乳酸菌等微生物的生命活動(dòng)不受影響　(3)泡菜壇子密封不嚴(yán)或取食工具不衛(wèi)生或鹽的比例過小或溫度過高都會(huì)引起雜菌滋生、泡菜變質(zhì)　(4)光電比色法　重氮化　N-1-萘基乙二胺 6．請(qǐng)回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用____________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗__________________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落最少的是______(A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　B．10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)________，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________所致。 (4)制備固定化脲酶時(shí)，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。 答案　(1)瓊脂糖　(2)高壓蒸汽　孔徑小，細(xì)菌不能濾過(3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3)　(4)除去游離的脲酶 解析　(1)固體培養(yǎng)基中需添加瓊脂糖起到凝固的作用。(2)因?yàn)镚6玻璃砂漏斗中存在雜菌，所以在其過濾除菌之前需進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；G6玻璃砂漏斗能過濾除菌的原理是其孔徑較小，細(xì)菌不能通過。(3)土壤中的微生物在LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中都能生長(zhǎng)，在尿素固體培養(yǎng)基中只有能利用尿素的微生物能生長(zhǎng)，10－4土壤稀釋液中微生物數(shù)量較多，所以推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)最少的是10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基；在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶的細(xì)菌周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，因?yàn)榧?xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生了氨(NH3)，導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性，培養(yǎng)基中的酚紅物質(zhì)在堿性條件下會(huì)變紅。(4)并不是所有的脲酶都能吸附在石英砂上，所以裝柱后需用蒸餾水洗滌固定化酶柱，以洗去多余的未吸附的脲酶。 7．大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含有109個(gè)，且能夠與致病菌混雜生長(zhǎng)。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測(cè)指標(biāo)之一。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題： (1)大腸桿菌異化作用的類型是____________，大腸桿菌在腸道中一般對(duì)人無害，但如果進(jìn)入人的________，會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。 (2)測(cè)定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數(shù)目，常用涂布分離法進(jìn)行測(cè)定。在操作過程中錯(cuò)誤的是________。 A．將玻璃刮刀從70%酒精中取出后需放在酒精燈火焰上灼燒 B．涂布時(shí)需轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿以使涂布均勻 C．每一濃度需設(shè)多個(gè)培養(yǎng)皿進(jìn)行涂布 D．也可以利用劃線分離法進(jìn)行測(cè)定 (3)根據(jù)菌落測(cè)出的大腸桿菌數(shù)比實(shí)際數(shù)值要________(高、低)，原因是__________________ ________________________________________________________________________。 實(shí)驗(yàn)完成后需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行________處理，然后才能倒掉。 答案　(1)兼性厭氧型　泌尿系統(tǒng)　(2)D　(3)低　培養(yǎng)基中可能有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌緊挨在一起，共同形成一個(gè)菌落　滅菌 8．以下是有關(guān)泡菜發(fā)酵過程中的相關(guān)問題，請(qǐng)回答下列問題： (1)蔬菜剛?cè)雺瘯r(shí)，其表面帶有不抗酸的大腸桿菌和酵母菌等微生物。其中的酵母菌最初的呼吸作用方式是________________，請(qǐng)寫出相關(guān)反應(yīng)式：____________________________。 (2)到發(fā)酵中期，無氧環(huán)境形成，乳酸菌開始活躍，并產(chǎn)生大量乳酸，使乳酸積累量達(dá)到0.6%～0.8%，pH為3.5～3.8，試分析此時(shí)壇內(nèi)其他微生物的活動(dòng)情況及原因。 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)發(fā)酵后期，乳酸含量繼續(xù)增加，當(dāng)達(dá)到1.2%以上時(shí)，發(fā)酵速度逐漸變緩甚至停止，主要原因是________________________________________。 (4)請(qǐng)?jiān)谙铝凶鴺?biāo)圖中畫出該過程中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量的變化趨勢(shì)。 答案　(1)需氧呼吸　C6H12O6＋6O2酶,6CO2＋6H2O＋能量 (2)其他微生物活動(dòng)減慢甚至停止，因?yàn)閜H不適宜 (3)pH過低抑制了乳酸菌的生長(zhǎng) (4)如圖所示 解析　(1)蔬菜入壇的初期，壇內(nèi)氧氣充足，酵母菌主要進(jìn)行需氧呼吸產(chǎn)生CO2和H2O。(3)發(fā)酵后期發(fā)酵速度變緩甚至停止的主要原因是過多的乳酸使pH過低，抑制了乳酸菌的生長(zhǎng)。 7 加試特訓(xùn)3　現(xiàn)代生物科技專題(A) 1．植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列問題： (1)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。 (2)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的________，如果檢測(cè)結(jié)果呈陽性，再在田間實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)植株的________是否得到提高。 (3)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為15∶1，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了__________________。 答案　(1)篩選　(2)乙　表達(dá)產(chǎn)物　耐旱性　(3)兩對(duì)同源染色體上 解析　(1)從基因文庫中獲取目的基因需要進(jìn)行篩選。(2)要提高植物乙的耐旱性，需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細(xì)胞中。要檢測(cè)目的基因(耐旱基因)是否表達(dá)應(yīng)該用抗原－抗體雜交法檢測(cè)目的基因(耐旱基因)的表達(dá)產(chǎn)物(即耐旱的相關(guān)蛋白質(zhì))；個(gè)體水平檢測(cè)可以通過田間實(shí)驗(yàn)，觀察檢測(cè)其耐旱情況。(3)因?yàn)樽哟心秃蹬c不耐旱植株的數(shù)量比為15∶1(9∶3∶3∶1的變式)，所以可將該轉(zhuǎn)基因植株的基因型設(shè)為AaBb，且兩對(duì)等位基因滿足自由組合定律，則推測(cè)該耐旱基因整合到了兩對(duì)同源染色體上。 2．科學(xué)家將蜘蛛的蛛絲蛋白基因?qū)肷窖蝮w內(nèi)，得到轉(zhuǎn)基因山羊，使羊奶中含有一種獨(dú)特的蛛絲蛋白，生產(chǎn)原理見圖。請(qǐng)回答： 　　　　―→ 　　　　　　　　　　　　　　　　　乙↓ 　 (1)將蛛絲蛋白基因和質(zhì)粒通過甲過程形成的X物質(zhì)為________________。如果選取的受體細(xì)胞為體細(xì)胞，當(dāng)在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)，需要進(jìn)行________培養(yǎng)。要使重組細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，乙過程需要的技術(shù)操作是________。 (2)下列關(guān)于丙過程的敘述，正確的是________。 A．該過程為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，目的是獲得更多的重組細(xì)胞 B．該過程所用培養(yǎng)液的成分往往是相同的 C．該過程在無菌條件下進(jìn)行，需要提供CO2來調(diào)節(jié)pH D．通過現(xiàn)代生物技術(shù)可以將重組細(xì)胞在體外培養(yǎng)成山羊個(gè)體 (3)為了快速繁殖轉(zhuǎn)基因山羊，還可在丁過程前對(duì)早期胚胎進(jìn)行________，經(jīng)培養(yǎng)后再分別移植到________________的代孕母羊的相應(yīng)部位。 答案　(1)重組DNA分子(重組質(zhì)粒)　傳代(分瓶)　核移植　(2)C　(3)胚胎分割　同期發(fā)情、未經(jīng)配種 解析　轉(zhuǎn)基因山羊的產(chǎn)生利用了基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程技術(shù)，從流程圖判斷圖中的甲過程是構(gòu)建重組質(zhì)粒；乙過程為細(xì)胞核移植，因動(dòng)物體細(xì)胞不能像受精卵那樣發(fā)揮全能性，但體細(xì)胞核具有全能性；丙過程為胚胎體外培養(yǎng)；丁過程為胚胎移植過程。結(jié)合上述分析可知：(1)X物質(zhì)為重組質(zhì)?；蛑亟MDNA分子；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)如出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，則需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)；乙過程為細(xì)胞核移植，即將體細(xì)胞核移入去核的同種生物卵細(xì)胞中，構(gòu)建重組細(xì)胞，以利于細(xì)胞全能性的表達(dá)。(2)丙過程為胚胎體外培養(yǎng)過程，結(jié)果是得到早期胚胎，培養(yǎng)過程要求在不同時(shí)期更換培養(yǎng)液的成分，同時(shí)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一樣需要提供CO2調(diào)節(jié)pH，C正確。(3)為了快速繁殖更多轉(zhuǎn)基因山羊，可對(duì)早期胚胎進(jìn)行胚胎分割后再進(jìn)行胚胎移植，以得到更多的相同后代；代孕母羊需進(jìn)行同期發(fā)情處理，并且不能配種。 3．(2016·浙江六校聯(lián)考)下圖為利用生物技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因生物的過程，據(jù)圖回答： (1)在基因工程中，A表示________，A進(jìn)入受體細(xì)胞的非酶工具是________。 (2)在②過程中一般采用________作受體細(xì)胞。 (3)④過程必須利用到的生物技術(shù)有________________、________________。 (4)形成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉D(zhuǎn)的變異類型屬于________。 (5)下列關(guān)于過程⑤的說法不正確的是________。 A．其利用的原理是植物細(xì)胞具有全能性 B．一般要經(jīng)歷脫分化和再分化過程 C．必須放在二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．按進(jìn)程，要調(diào)整培養(yǎng)基中植物激素的種類和比例 (6)下列關(guān)于生物工程的說法不正確的是________。 A．基因工程的核心是構(gòu)建重組DNA分子 B．動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng) C．植物細(xì)胞工程技術(shù)就是在原生質(zhì)體培養(yǎng)的基礎(chǔ)上的原生質(zhì)體融合技術(shù) D．胚胎工程技術(shù)可以加快畜牧業(yè)的發(fā)展速度，使家畜優(yōu)良品種的生產(chǎn)工廠化 答案　(1)目的基因　載體　(2)受精卵　(3)胚胎體外培養(yǎng)　胚胎移植(可以互換)　(4)基因重組　(5)C(6)C 解析　(1)在基因工程中，人們感興趣的基因即目的基因，題干中可從人的DNA分子或蘇云金芽孢桿菌中獲得目的基因?；蚬こ讨饕腥N工具：限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體。其中，載體是能夠?qū)⑼庠椿蜻\(yùn)送到細(xì)胞中的非酶工具。(2)動(dòng)物的受精卵全能性高，因此受體細(xì)胞一般選用受精卵。由于棉花是植物，體細(xì)胞具有全能性，因此受體細(xì)胞可以用體細(xì)胞。(3)受精卵要發(fā)育成早期胚胎，需要進(jìn)行胚胎體外培養(yǎng)，但是由于胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)不能發(fā)育成完整個(gè)體，因此，胚胎移植成為胚胎工程中獲得后代的唯一方法。(4)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組。(5)過程⑤是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，包括脫分化和再分化過程，原理是植物細(xì)胞具有全能性，A、B正確；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)利用液體培養(yǎng)基，CO2培養(yǎng)箱可調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH，而植物組織培養(yǎng)一般使用固體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基，植物組織培養(yǎng)不需要CO2培養(yǎng)箱，C錯(cuò)誤；再分化時(shí)要通過平衡植物激素的配比進(jìn)行調(diào)控，從而誘導(dǎo)根和芽的分化，D正確。(6)植物細(xì)胞工程技術(shù)不僅僅是原生質(zhì)體融合技術(shù)，還包括借助基因工程方法，將外源遺傳物質(zhì)(DNA)導(dǎo)入受體細(xì)胞(包括原生質(zhì)體)中等，C錯(cuò)誤。 4．(2016·金華十校高考模擬)通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出乳汁中含人β-酪蛋白的山羊，其流程圖如下?；卮鹩嘘P(guān)問題。 (1)過程①需要借助______________________________酶才能完成。若人β-酪蛋白基因的序列是已知的，則可以通過________方法獲得該基因，然后再利用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。 (2)在培育轉(zhuǎn)基因山羊時(shí)必須________。 A．從能表達(dá)β-酪蛋白的人體細(xì)胞中獲取目的基因 B．選擇不含Y染色體的受精卵為目的基因受體細(xì)胞 C．用含青霉素的培養(yǎng)基篩選受精卵 D．在8細(xì)胞胚時(shí)期進(jìn)行過程② (3)為獲得較多的轉(zhuǎn)基因山羊，在過程②可對(duì)早期胚胎通過機(jī)械切割和________方法進(jìn)行分割。下列對(duì)早期胚胎進(jìn)行分割處理操作中正確的是________。 (4)過程③需要利用________________、________________和胚胎移植技術(shù)才能實(shí)現(xiàn)。 答案　(1)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接　化學(xué)合成　PCR　(2)B　(3)酶處理　B　(4)細(xì)胞核移植　胚胎體外培養(yǎng) 解析　(1)步驟①為形成重組DNA分子的過程，需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和載體Ti質(zhì)粒，還需要用DNA連接酶將目的基因和載體連接形成重組質(zhì)粒。對(duì)于序列已知的目的基因，我們可以用化學(xué)方法合成目的基因，然后再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。(2)人體的任何一個(gè)有核的細(xì)胞都含有β-酪蛋白基因，不一定要從能表達(dá)β-酪蛋白基因的細(xì)胞獲取，A錯(cuò)誤；要培育出乳汁中含有β-酪蛋白的山羊，應(yīng)該選含XX染色體的受精卵作為受體細(xì)胞，這樣發(fā)育成的雌性動(dòng)物能分泌乳汁，B正確；當(dāng)受體細(xì)胞為受精卵時(shí)，不能用含青霉素的培養(yǎng)基篩選，C錯(cuò)誤；②為胚胎移植，通常移植的最適宜時(shí)期是發(fā)育到8細(xì)胞以上的胚胎，如早期囊胚，D錯(cuò)誤。(3)胚胎分割有兩種方法：在顯微鏡下用切割刀或切割針分割胚胎，或者用酶處理將卵裂球中的細(xì)胞分散開。在胚胎分割時(shí)要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)出現(xiàn)含內(nèi)細(xì)胞團(tuán)多的部分發(fā)育的能力強(qiáng)，少的部分發(fā)育受阻或發(fā)育不良，甚至不能發(fā)育等問題。選項(xiàng)中灰色部分代表內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，因此本題選B。(4)過程③為動(dòng)物的無性繁殖——克隆，需要利用的技術(shù)有細(xì)胞核移植、胚胎體外培養(yǎng)和胚胎移植。 5．下圖表示通過克隆技術(shù)獲得煙草植株的過程，請(qǐng)回答： (1)①過程往往選取煙草的幼嫩部位，需經(jīng)過________處理，才能置于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。 (2)②過程稱為________，③過程稱為________。 (3)通過懸浮培養(yǎng)形成的單細(xì)胞可發(fā)育成________，繼而形成植物幼體；也可利用________________水解細(xì)胞壁，獲得的________培養(yǎng)后也可形成植株。 (4)在培養(yǎng)過程中，若要誘導(dǎo)芽的產(chǎn)生，則配制植物激素時(shí)要________。 A．添加適量的生長(zhǎng)素和適當(dāng)減除其他某些激素 B．適當(dāng)配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素 C．添加適量的生長(zhǎng)素和適當(dāng)增加其他某些激素 D．適當(dāng)增加細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的量 (5)煙草細(xì)胞很容易再生出新植株，但在長(zhǎng)期培養(yǎng)過程中，其胚胎發(fā)生的器官形成能力下降，不可能的原因是________。 A．染色體畸變或細(xì)胞核變異 B．組織或細(xì)胞中的激素平衡被打破 C．產(chǎn)生了缺乏成胚性的細(xì)胞系 D．植物細(xì)胞全能性喪失 答案　(1)消毒　(2)脫分化　再分化　(3)幼胚(胚狀體)　纖維素酶和果膠酶　原生質(zhì)體　(4)B　(5)D 解析　(1)植物組織培養(yǎng)過程中如果在培養(yǎng)基上有細(xì)菌等微生物存在，它們比植物細(xì)胞具有更強(qiáng)的新陳代謝能力，比植物細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖得更快，而且它們會(huì)產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)基上的植物細(xì)胞死亡。因此，在培養(yǎng)過程中要求一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。(2)植物組織培養(yǎng)的原理是植物體細(xì)胞具有全能性。培養(yǎng)過程可概括為：離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化為根、芽或胚狀體，最后發(fā)育為完整植株。(3)液體懸浮培養(yǎng)形成的單細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中可以發(fā)育成胚狀體，最后形成植株；植物細(xì)胞壁的成分是纖維素和果膠，可以用纖維素酶和果膠酶處理獲得裸露的原生質(zhì)體，進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng)，也可以獲得植株。(4)適量的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配比可以誘導(dǎo)芽的產(chǎn)生，添加適量的生長(zhǎng)素和適當(dāng)減除其他某些激素，則是誘導(dǎo)生根。(5)在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因是染色體畸變、細(xì)胞核變異或者非整倍體的產(chǎn)生；細(xì)胞或者組織的激素平衡被打破，或細(xì)胞對(duì)外源生長(zhǎng)物質(zhì)的敏感性改變；或者由于其他原因產(chǎn)生了缺乏成胚性的細(xì)胞系。 6．(2016·寧波高二下學(xué)期九校聯(lián)考)苦蕎富含黃酮類化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS)是黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶，下圖為將CHS基因?qū)肟嗍w，培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。 (1)基因工程的核心是________________。 (2)可利用________________、________________方法獲取CHS基因。 (3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是________________。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)過程②③分別是________________。苦蕎細(xì)胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是________________________________________。 (5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植物，還可將該植物幼葉消毒后，用________________酶混合液處理，獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是________________。將目的基因?qū)朐|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過________________得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成________________，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。 (6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，下列原因錯(cuò)誤的是________(填選項(xiàng)編號(hào))。 A．愈傷組織發(fā)生遺傳變異 B．愈傷組織不能分散成單細(xì)胞 C．愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變 D．愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變 答案　(1)構(gòu)建重組DNA分子　(2)從基因文庫中獲取　化學(xué)方法合成　PCR合成(任答兩項(xiàng)即可)　(3)限制性核酸內(nèi)切酶　能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子　(4)脫分化、再分化　植物細(xì)胞的全能性(細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因)　(5)纖維素酶和果膠　維持滲透壓　液體懸浮培養(yǎng)　胚狀體　(6)B 解析　(1)基因工程的核心是構(gòu)建基因表達(dá)載體(即重組DNA分子)。(2)獲取目的基因的方法有：從基因文庫中獲取、化學(xué)方法合成、PCR合成。(3)過程①中切開質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶，它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子。(4)過程②是脫分化形成愈傷組織，過程③是再分化形成試管苗?？嗍w細(xì)胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是植物細(xì)胞具有全能性(細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因)。(5)由植物細(xì)胞獲得原生質(zhì)體，需要用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。處理過程中酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是維持滲透壓，防止原生質(zhì)體過度吸水或者失水死亡。將目的基因?qū)朐|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過液體懸浮培養(yǎng)得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成胚狀體，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過多會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，可能的原因有愈傷組織發(fā)生遺傳變異，愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變，愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變等，故選B。 7．如圖為某研究小組欲將已知Bt毒蛋白基因(抗蟲基因)導(dǎo)入原生質(zhì)體培育抗蟲棉的過程。 請(qǐng)回答： (1)Bt毒蛋白基因來源于________細(xì)胞，為獲得大量Bt毒蛋白基因，可通過PCR技術(shù)進(jìn)行________，也可將其連接到質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增。 (2)制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的________，其目的是維持制備的原生質(zhì)體的________。酶混合液需通過________________過濾除菌，才能用于無菌原生質(zhì)體的制備，整個(gè)無菌操作過程需在超凈臺(tái)中進(jìn)行。 (3)將Bt毒蛋白基因?qū)肴旧w的________中，其方法有基因槍法、________________等方法。導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁，經(jīng)持續(xù)分裂獲得________，進(jìn)一步分化獲得再生植株并擴(kuò)大繁殖。 (4)利用帶有標(biāo)記的Bt毒蛋白基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的__________進(jìn)行分子雜交，驗(yàn)證抗蟲基因是否被整合到受體的細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄。通過擴(kuò)大繁殖的再生植株是否對(duì)棉鈴蟲具有__________的特性來初步篩選出抗蟲棉。 (5)為了獲得大量該抗蟲棉，可將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入適宜培養(yǎng)基中獲得大量叢狀苗，然后轉(zhuǎn)入________培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成再生植株。再生植株需進(jìn)行________(A.滅菌 B．煉苗　C．消毒　D．暗處理)后才能移種到大田。 答案　(1)原核　擴(kuò)增　(2)甘露醇　滲透壓　G6玻璃砂漏斗　(3)DNA　農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法　愈傷組織(4)mRNA　抗性　(5)生根　B 解析　(1)Bt毒蛋白基因來源于蘇云金芽孢桿菌，屬于原核細(xì)胞；為獲得大量Bt毒蛋白基因，可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)植物原生質(zhì)體是用纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞壁后得到的，酶混合液中一般含較高濃度的甘露醇，目的是維持原生質(zhì)體的滲透壓；酶在高溫下易變性，因此酶混合液需通過G6玻璃砂漏斗過濾除菌。(3)Bt毒蛋白基因可用基因槍法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法等方法導(dǎo)入染色體的DNA中；導(dǎo)入后的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁后，先經(jīng)脫分化獲得愈傷組織，然后通過再分化獲得再生植株。(4)驗(yàn)證抗蟲基因是否已整合到受體細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄，可通過將帶有標(biāo)記的Bt毒蛋白基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的mRNA進(jìn)行分子雜交的方法來進(jìn)行；抗蟲棉則可通過觀察再生植株是否對(duì)棉鈴蟲具有抗性來進(jìn)行初步篩選。(5)要獲得大量該抗蟲棉可采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)：先將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入適宜培養(yǎng)基中脫分化后得到愈傷組織，再分化獲得大量叢狀苗，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成再生植株；再生植株需進(jìn)行煉苗后才能移種到大田。 8．(改編)酵母菌與人類的生活息息相關(guān)，目前被廣泛運(yùn)用于食品、釀酒、醫(yī)藥衛(wèi)生等方面。如圖為科學(xué)家利用相關(guān)技術(shù)改造酵母菌以提高釀酒工藝。請(qǐng)據(jù)圖回答： (1)圖中α－淀粉酶基因來自于地衣芽孢桿菌，若目的基因的序列未知，通常從________中獲取。圖甲中，過程①需要的酶有________________和________________，培養(yǎng)工程酵母菌的核心操作步驟是________。 A．獲取α－淀粉酶基因 B．將目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建重組DNA分子 C．將α－淀粉酶基因?qū)虢湍妇?xì)胞 D．目的基因的檢測(cè)和表達(dá) (2)為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以________作為唯一碳源，制備固體培養(yǎng)基最后要將平板倒置，其主要目的是防止__________________________________________。②③過程需要重復(fù)幾次，目的是________________________________________________。 答案　(1)基因文庫　限制性核酸內(nèi)切酶　DNA連接酶　B　(2)淀粉　培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染，影響菌落的形成　進(jìn)一步篩選出分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌 解析　(1)若目的基因序列已知，則可以用人工合成法或者用PCR法擴(kuò)增目的基因；若目的基因序列未知，則可以從基因文庫中獲得目的基因。形成重組DNA分子的過程需要借助限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，基因工程操作過程的核心是構(gòu)建重組DNA分子。(2)為獲得分解淀粉能力較強(qiáng)的工程菌需要提供以淀粉作為唯一碳源的培養(yǎng)基，這樣才能篩選出目的菌。平板倒置的主要目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染影響菌落的形成，重復(fù)②③過程的目的是進(jìn)一步篩選出分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌。 8