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第2講 細(xì)胞工程 1．(2017年江蘇卷)牛雄性胚胎中存在特異性H－Y抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H－Y單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行制藥。下列相關(guān)敘述正確的是(　　) A．H－Y單克隆抗體由骨髓細(xì)胞分泌 B．應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別 C．鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植 D．用H－Y抗原免疫母?？色@得相應(yīng)抗體 【答案】D 【解析】單克隆抗體是雜交瘤細(xì)胞分泌的，A錯(cuò)誤。通常選用囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行胚胎性別鑒定，B錯(cuò)誤。因?yàn)槭抢萌橄偕锓磻?yīng)器進(jìn)行生物制藥，則鑒別后的雌性胚胎應(yīng)進(jìn)行篩選，選出形態(tài)正常、發(fā)育良好的雌性胚胎進(jìn)行移植，C錯(cuò)誤。用H－Y抗原免疫母牛，會(huì)刺激母牛的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，D正確。 2．(2017年海南卷)甲、乙兩名同學(xué)分別以某種植物的綠色葉片和白色花瓣為材料，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖該植物?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體，在一定條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗，其原理是__________________________________________________。 (2)甲、乙同學(xué)在誘導(dǎo)愈傷組織所用的培養(yǎng)基中，均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到______________。若要用細(xì)胞作為材料進(jìn)行培養(yǎng)獲得幼苗，該細(xì)胞應(yīng)具備的條件是______________(填“具有完整的細(xì)胞核”“具有葉綠體”或“已轉(zhuǎn)入抗性基因”)。 (3)圖中A、B、C所示的是不同的培養(yǎng)結(jié)果，該不同結(jié)果的出現(xiàn)主要是由于培養(yǎng)基中兩種激素用量的不同造成的，這兩種激素是__________________________________。 A中的愈傷組織是葉肉細(xì)胞經(jīng)__________形成的。 (4)若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖，在培養(yǎng)時(shí)，______(填“能”或“不能”)采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是____________________________________________ ________________________________________________________________________。 【答案】(1)綠色葉片和白色花瓣的細(xì)胞具有全能性，在一定條件下能發(fā)育成完整的植株 (2)葡萄糖、果糖　具有完整的細(xì)胞核 (3)細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素　脫分化 (4)不能　對(duì)雜合體的植株來(lái)說(shuō)，其體細(xì)胞的基因型相同，而花粉粒的基因型與體細(xì)胞的基因型不同，用花粉粒進(jìn)行組織培養(yǎng)得到的花卉基因型不同于原植株 【解析】(1)綠色葉片和白色花瓣是細(xì)胞分化的結(jié)果，遺傳物質(zhì)并沒(méi)有改變，所以以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體，在一定條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗，其原理是綠色葉片和白色花瓣的細(xì)胞具有全能性。(2)一分子蔗糖由一分子葡萄糖和一分子果糖組成，所以蔗糖水解后可得到葡萄糖、果糖。若要用細(xì)胞作為材料進(jìn)行培養(yǎng)獲得幼苗，該細(xì)胞應(yīng)具備的條件是具有完整的細(xì)胞核。(3)圖中A、B、C所示的是不同的培養(yǎng)結(jié)果，該不同結(jié)果的出現(xiàn)主要是由于培養(yǎng)基中兩種激素用量的不同造成的，這兩種激素是細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素。A中的愈傷組織是葉肉細(xì)胞經(jīng)脫分化形成的。(4)若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖；在培養(yǎng)時(shí)，不能采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是對(duì)雜合體的植株來(lái)說(shuō)，其體細(xì)胞的基因型相同，通過(guò)減數(shù)分裂形成花粉粒，可以導(dǎo)致等位基因分離，非同源染色體上的非等位基因自由組合等，花粉粒的基因型與體細(xì)胞的基因型不同，后代會(huì)出現(xiàn)性狀分離，用花粉粒進(jìn)行組織培養(yǎng)得到的花卉基因型不同于原植株。 3．(2017年全國(guó)新課標(biāo)Ⅲ卷)編碼蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示。 回答下列問(wèn)題： (1)現(xiàn)要通過(guò)基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。 (2)某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過(guò)程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為_(kāi)_________，加入了________作為合成DNA的原料。 (3)現(xiàn)通過(guò)基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對(duì)照，培養(yǎng)并定期檢測(cè)T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2。 ①由圖2 可知，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是________________________________。 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是__________________。 ②僅根據(jù)圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少__________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所編碼的肽段，則會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。 【答案】(1)編碼乙的DNA序列起始端無(wú)ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無(wú)起始密碼子 (2)模板　dNTP (3)①進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)　維持培養(yǎng)液的pH?、贑 【解析】(1)由基因乙的堿基序列可知，由該序列轉(zhuǎn)錄出的mRNA無(wú)起始密碼子，所以在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列后，所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙。(2)PCR反應(yīng)體系中除了加入了DNA聚合酶、引物等，還應(yīng)加入序列甲作為模板，加入四種脫氧核苷酸(dNTP)作為合成DNA的原料。(3)當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，T淋巴細(xì)胞的濃度不再增加，是因?yàn)槌霈F(xiàn)了接觸抑制現(xiàn)象，所以可以進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)，使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖；培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是維持培養(yǎng)液中的pH。根據(jù)圖2可知，甲、乙兩組的T淋巴細(xì)胞數(shù)量多，丙組的T淋巴經(jīng)胞數(shù)量少，根據(jù)圖1比較可知，丙組T淋巴細(xì)胞少的原因是蛋白丙缺少C片段所編碼的肽段。 4．(2016年全國(guó)新課標(biāo)Ⅱ卷)下圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程。 回答下列問(wèn)題： (1)圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_(kāi)___________。過(guò)程①表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用______________的方法。②代表的過(guò)程是__________。 (2)經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中________________的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。 (3)若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)與克隆羊“多莉(利)”培育成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了________________________________________________________________________。 【答案】(1)XX或XY　顯微操作(去核法)　胚胎移植 (2)遺傳物質(zhì) (3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響 (4)已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性 【解析】(1)提供體細(xì)胞的供體可能為雌性，也可能為雄性，因此圖中A(正常細(xì)胞核)的性染色體組成為XX或XY。常采用顯微操作去核法來(lái)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核。②過(guò)程表示將早期胚胎移入受體，其過(guò)程為胚胎移植。(2)取供體動(dòng)物的體細(xì)胞培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。超過(guò)10代繼續(xù)培養(yǎng)，則其遺傳物質(zhì)(或核型)的穩(wěn)定性會(huì)降低。(3)克隆動(dòng)物的細(xì)胞核基因來(lái)自供體，因此大部分性狀與供體相同，但細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)源于受體(或提供卵母細(xì)胞的個(gè)體)，即卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響，這就決定了克隆動(dòng)物的性狀與供體不完全相同。(4)克隆動(dòng)物的培育采用的是核移植技術(shù)，核移植技術(shù)的原理是已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。 5．(2014年全國(guó)新課標(biāo)Ⅰ卷)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過(guò)________次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠，理由是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________， 體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是___________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)雜交瘤細(xì)胞中有________個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________________________________________________________________。 【答案】(1)4　Y　Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高 (2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞　細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100% (3)1　100　(4)不能無(wú)限增殖 【解析】(1)分析題圖可知，經(jīng)4次免疫后，小鼠Y的血清抗體效價(jià)就可達(dá)到16 000以上。由于4次免疫后的Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高，故最適合用于制備B淋巴細(xì)胞。(2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)中，由于細(xì)胞融合是隨機(jī)的，而且誘導(dǎo)融合率不可能達(dá)到100%，所以會(huì)有未融合的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞。(3)雜交瘤細(xì)胞同時(shí)具有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的核物質(zhì)，但細(xì)胞核只有一個(gè)。由于雜交瘤細(xì)胞在分裂過(guò)程中染色體會(huì)丟失，故細(xì)胞核中染色體數(shù)目最多是40＋60＝100(條)。(4)B淋巴細(xì)胞已經(jīng)分化，沒(méi)有無(wú)限增殖的潛能。 6．(2014年廣東卷)鐵皮石斛是我國(guó)名貴中藥，生物堿是其有效成分之一。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡(jiǎn)稱PLBs，類似愈傷組織)生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下： 在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時(shí)間的變化如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)選用新生營(yíng)養(yǎng)芽為外植體的原因是________________________________，誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過(guò)程稱______________。 (2)與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在______________，______________，______________。 (3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量，但會(huì)抑制PLBs的生長(zhǎng)。若采用液體培養(yǎng)，推測(cè)添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。同學(xué)們擬開(kāi)展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測(cè)，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案時(shí)探討了以下問(wèn)題： ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)置4個(gè)ABA處理組，1個(gè)空白對(duì)照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無(wú)菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基___________________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣：實(shí)驗(yàn)50天完成，每10天取樣，將樣品(PLBs)稱重(g/瓶)后再測(cè)定生物堿含量。如初始(第0天)數(shù)據(jù)已知，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需測(cè)定的樣品數(shù)為_(kāi)_______。 ③依所測(cè)定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時(shí)間：當(dāng)某3個(gè)樣品(重復(fù)樣)的________________________________________________________________________ 時(shí)，其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間是適宜培養(yǎng)時(shí)間。 【答案】(1)細(xì)胞分化程度低，容易誘導(dǎo)形成PLBs(或含病毒極少，甚至無(wú)毒)　細(xì)胞的脫分化 (2)生長(zhǎng)起始較快　快速生長(zhǎng)時(shí)間較長(zhǎng)　PLBs產(chǎn)量較高 (3)①滅菌、冷卻?、?5?、跴LBs重量和生物堿含量乘積的平均值最大 【解析】本題主要考查植物組織培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)，并以植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為背景考查實(shí)驗(yàn)探究能力。(1)植物組織培養(yǎng)中外植體常選用莖尖、芽尖，原因是莖尖和芽尖分裂能力強(qiáng)，易誘導(dǎo)其脫分化，而且一般不含病毒。(2)從圖中比較光照和黑暗條件下PLBs重量曲線可知，光照條件下PLBs生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在開(kāi)始生長(zhǎng)時(shí)間、快速生長(zhǎng)的時(shí)間及達(dá)到生長(zhǎng)穩(wěn)定時(shí)PLBs重量的大小等方面。(3)①因ABA受熱易分解，所以必須在培養(yǎng)基滅菌并冷卻至常溫后才能加入無(wú)菌ABA。②依題干信息可知，本實(shí)驗(yàn)有5組，每組3個(gè)樣品，需分別在第0天、10天、20天、30天、40天、50天測(cè)定PLBs重量和生物堿含量，而初始數(shù)據(jù)(第0天)已知，因此還需測(cè)定的樣品數(shù)是535＝75。③根據(jù)實(shí)驗(yàn)探究目的，當(dāng)3個(gè)樣品(重復(fù)樣)的PLBs重量和生物堿含量乘積的平均值最大時(shí)，其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間為適宜培養(yǎng)時(shí)間。 7．(2014年福建卷)Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如下圖： (1)步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的___________________________________。 (2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時(shí)， 可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。 (3)步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體?？梢愿鶕?jù)Rag2基因的________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有________________________酶的酶切位點(diǎn)。 (4)為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的________，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。 【答案】(1)細(xì)胞核　(2)囊胚 (3)核苷酸序列　Hind Ⅲ和PstⅠ限制 (4)蛋白質(zhì) 【解析】(1)步驟①為動(dòng)物核移植，核移植是將動(dòng)物一個(gè)體細(xì)胞(上皮細(xì)胞)的細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體的過(guò)程。(2)步驟②為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)。(3)利用PCR技術(shù)獲取目的基因(Rag2基因)的前提是要有一段已知目的基因(Rag2基因)的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。由于Rag2基因的兩側(cè)是用Hind Ⅲ限制酶和PstⅠ限制酶剪切的，為了將該片段直接連接到表達(dá)載體上，也應(yīng)用Hind Ⅲ限制酶和PstⅠ限制酶剪切載體，以確保產(chǎn)生的末端一致，再利用DNA連接酶連接起來(lái)，故所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有Hind Ⅲ限制酶和PstⅠ限制酶的酶切位點(diǎn)。(4)為了檢測(cè)目的基因(Rag2基因)是否表達(dá)出蛋白質(zhì)，可采用抗原—抗體雜交技術(shù)，因此可用抗Rag2蛋白的抗體與治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)(抗原)進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。 8．(2014年江蘇卷)為了獲得植物次生代謝產(chǎn)物，先用植物外植體獲得愈傷組織，然后在液體培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)外植體經(jīng)誘導(dǎo)后形成愈傷組織的過(guò)程稱為_(kāi)________________________________。 (2)在愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞干重、蔗糖濃度和pH的變化如圖所示。細(xì)胞干重在12 d后下降的原因有______________________；培養(yǎng)液中蔗糖的作用是____________________、______________________________。 (3)多倍體愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量常高于二倍體。二倍體愈傷組織細(xì)胞經(jīng)________處理，會(huì)產(chǎn)生染色體數(shù)目加倍的細(xì)胞。為檢測(cè)愈傷組織細(xì)胞染色體數(shù)目，壓片前常用纖維素酶和________酶解離愈傷組織。若愈傷組織細(xì)胞(2n)經(jīng)誘導(dǎo)處理后，觀察到染色體數(shù)為8n的細(xì)胞，合理的解釋是________________________、_____________________。 (4)為了更好地獲得次生代謝產(chǎn)物，生產(chǎn)中采用植物細(xì)胞的固定化技術(shù)，其原理與酵母細(xì)胞固定化類似。下列說(shuō)法正確的有________(填序號(hào))。 ①選取旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織細(xì)胞包埋?、诒仨氃诠庹諚l件下培養(yǎng)?、叟囵B(yǎng)過(guò)程中需通空氣?、芄潭ɑ笾参锛?xì)胞生長(zhǎng)會(huì)變慢 【答案】(1)脫分化 (2)蔗糖濃度下降，pH降低　提供能源　調(diào)節(jié)滲透壓 (3)秋水仙素(低溫)　果膠　經(jīng)加倍到4n的細(xì)胞處于有絲分裂后期　經(jīng)加倍到8n的細(xì)胞處于有絲分裂中期 (4)①③④ 【解析】(1)外植體經(jīng)脫分化可形成愈傷組織。(2)分析坐標(biāo)曲線圖可知，培養(yǎng)液中的蔗糖濃度已降至較低，pH也由6降為4，因此使得細(xì)胞生命活動(dòng)受阻，細(xì)胞干重減小。培養(yǎng)液中的蔗糖可為培養(yǎng)的細(xì)胞提供能源，又可調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的滲透壓。(3)二倍體愈傷組織經(jīng)秋水仙素或低溫等人工誘導(dǎo)處理，可產(chǎn)生染色體數(shù)目加倍的細(xì)胞。植物細(xì)胞之間除纖維素外，還存在果膠層，因此可利用纖維素酶和果膠酶解離愈傷組織。愈傷組織細(xì)胞(2n)經(jīng)人工誘導(dǎo)后，細(xì)胞中染色體數(shù)目加倍成4n，染色體數(shù)為4n的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，處于有絲分裂后期的細(xì)胞中含有8n條染色體；若加倍到4n的細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后繼續(xù)加倍形成染色體數(shù)為8n的細(xì)胞，這樣的細(xì)胞再進(jìn)行有絲分裂，在中期時(shí)會(huì)看到染色體數(shù)為8n的細(xì)胞。(4)通過(guò)愈傷組織獲得次生代謝產(chǎn)物時(shí)，需選擇生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，由于植物細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸，培養(yǎng)過(guò)程需通入空氣。愈傷組織細(xì)胞沒(méi)有葉綠體，不進(jìn)行光合作用，無(wú)需光照。植物細(xì)胞固定化后，與外界環(huán)境的物質(zhì)交換能力降低，生長(zhǎng)變慢。 9．(2013年新課標(biāo)Ⅱ卷)甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時(shí)含有A和B的新型藥用植物?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)為了培育該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用________酶和________酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的__________，再用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)二者融合。形成的融合細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)形成________組織，然后經(jīng)過(guò)________形成完整的雜種植株。這種培育技術(shù)稱為_(kāi)_______________________________________________________________________。 (2)上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指__________________________________ ________________________________________________________________________。 假設(shè)甲與乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，造成這種差異的原因是_______________________________________________________________________。 (3)這種雜種植株可通過(guò)制作人工種子的方法來(lái)大量繁殖。經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的________________等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 【答案】(1)纖維素　果膠　原生質(zhì)體　愈傷　再分化(或分化)　植物體細(xì)胞雜交技術(shù) (2)體細(xì)胞中含有三個(gè)或三個(gè)以上染色體組的個(gè)體(其他合理答案也可)　在減數(shù)分裂過(guò)程中，前者染色體聯(lián)會(huì)異常，而后者染色體聯(lián)會(huì)正常 (3)胚狀體、不定芽、頂芽、腋芽(答對(duì)其中一項(xiàng)即可) 【解析】(1)纖維素和果膠是細(xì)胞壁的主要成分，所以去除細(xì)胞壁常用纖維素酶和果膠酶。去除細(xì)胞壁后，得到原生質(zhì)體。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合后，融合細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)脫分化過(guò)程形成愈傷組織，然后再經(jīng)過(guò)再分化過(guò)程形成完整的雜種植株。(2)植株是否可育的關(guān)鍵是同源染色體能否正常聯(lián)會(huì)，甲與乙有性雜交后代含有兩個(gè)染色體組，但是沒(méi)有同源染色體，故進(jìn)行減數(shù)分裂時(shí)聯(lián)會(huì)異常，而甲與乙體細(xì)胞雜交后代含有4個(gè)染色體組，含有同源染色體，能進(jìn)行正常聯(lián)會(huì)。(3)制造人工種子一般采用經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽或腋芽等。 10．(2013年海南卷)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV1)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV1 的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV1?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)在制備抗HSV1 的單克隆抗體的過(guò)程中，先給小鼠注射一種純化的HSV1 蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗______________的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了__________反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮腳___中獲取B 淋巴細(xì)胞。將該B 淋巴細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是________________________________。 (2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的________中使其增殖，再?gòu)腳_________中提取、純化獲得。 (3)通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV1 蛋白，其原因是該抗體具有__________和____________等特性。 【答案】(1)HSV1蛋白　體液免疫　脾臟(其他合理答案也可)　骨髓瘤　能無(wú)限增殖且可產(chǎn)生專一性抗體(其他合理答案也可) (2)腹腔　腹水 (3)靈敏度高　特異性強(qiáng)(其他合理答案也可) 【解析】(1)單克隆抗體制備的第一步是免疫處理。先給小鼠注射一種純化的HSV1蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗HSV1蛋白的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了體液免疫反應(yīng)。第二步制備雜交瘤細(xì)胞。從小鼠的淋巴器官(如脾、骨髓、扁桃體、胸腺等)中獲取B淋巴細(xì)胞，與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生專一性抗體。(2)若想獲得大量單克隆抗體，通常有兩種方法：一是將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中，然后從動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中分離出單克隆抗體；二是將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，然后從小鼠的腹水中提取純化獲得。(3)單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等特性。